Seminario del curso biología molecular por estudiantes de la Universidad Pontificia Bolivariana de Colombia. Presentación a cargo de Isabella Castaño y David Correa

2. • Western Blot is a laboratory technique used to
detect a specific protein in a sample of blood or
tissue.
• Identify proteins in samples
• Disease diagnosis
• Antibody identification
• Confirmation tests
Western Blot overview
Main utilities

3. Here it´s
chemically
explained
LOVE
SCHIZOPHRENIA
DEPRESSION FURY OR FEAR
ANXIETY HAPPINESS
These
regulate life
• Recognize synaptic
and non-synaptic
proteins in brain tissue
Western Blot used to

5. • Detección de proteínas en una muestra de tejido.
• Electroforesis – separación de
proteínas.(detección antígeno anticuerpo) – mas
rxn = mas oscuro
• Dx enfermedades
Detergente iónico y eliminador de formaldehido
• PAGE
• TRIS
• SDS
Sirve para conocer:
• Concentración
• Forma
• Tamaño
• Separación de muestras por medio de
electroforesis en gel
• Detección de proteínas totales
• Evaluación de la modificación postraduccional
Utilidad en el artículo
Definición

6. Imagen de campo claro
• Estereomicroscopio
• Imagen contra fondo brillante
Utilidad en el artículo
• Rastrear y obtener imágenes de las
secciones (utilizando el objetivo en
4x y 10x)

7. Anticuerpo primario anti-GFAP de ratón
Anticuerpo secundario de cabra anti-ratón conjugado
con AlexaFluor 488.
Obtención de la muestra
Bloqueo de sustancias endógenas
Fijación
• Es un método de laboratorio en el cual se
usan anticuerpos a fin de determinar si
hay ciertos antígenos en una muestra de
tejido.
• Hoy en día se utiliza para la
valoración de la mayor parte de los
factores pronósticos en tumores
malignos.
¿Qué es?

8. ¿Qué es?
Utilidad en la prueba:
Los métodos de fijación se pueden clasificar en
dos tipos:
• Físicos > Calor y frío
• Químicos. • TRIS (trisaminometano)
• SDS (dodecilsulfato sódico)
• SDS-PAGE ((electroforesis en gel de
poliacrilamida con dodecilsulfato sódico)

12. ¿Qué es la GFAP?
¿Por qué es importante?
• GFAP / Proteína glial fibrilar acídica
• Permite confirmar origen glial de los tumores
cerebrales y es útil en el diagnóstico
diferencial con metástasis o linfoma

13. AUTHORS ARGUMENT AGREE OR
DISAGREE
Yoon et al 2017
Moreover, these protein expression results are
remarkably consistent with previous
immunohistological analyses for these proteins.
(GFAP)
Meconi et al 2018 A single animal was subject to a repeated awake-
closed head injury paradigm
Christie et al 2019 For our proof of concept experiment we employed a
repeated awake closed head injury paradigm

14. • This experiment has significant utility for future studies, which can use fixed tissue
samples in a variety of neuropathological conditions to study their behavior and arrive
at possible solutions for them.
• The comparison of laboratory techniques such as western blot and
immunohistochemistry allow discovering new methods to facilitate the expression of
proteins according to specific conditions.
• The GFAP protein could represent a great advance towards the future study of brain
tissues, in addition to the fact that it could be observed that it represents great support
as a biomarker of brain tumors, since it stood out in each procedure carried out in the
study.