1. Enfermedad de Alzehimer
Enfermedad neurodegenerativa que se manifiesta como
deterioro cognitivo y trastornos conductuales. Se caracteriza
en su forma tipica por una perdida inmediata de lamemoria y
de otras capacidades mentales, a medida que las celulas
nerviosas mueren y diferentes zonasdel cerebro se atrofian.
Incurable y generalmente terminal.

2. Introduccion
• La enfermedad de alzeheimer es la causa
mas comun de demencia en las personas
mayores de 60 años de edad.
• Las mutaciones en los genes PS1,PS2 y
APP causa forma autosomica dominante
de Alzheimer familiar (Alzheimer de inicio
temprano)

3. • El mas fuerte factor de riesgo genetico es el gen
de la ApoE, siendo el alelo Ɛ4 un factor de
riesgo, y Ɛ2 un factor de proteccion.
• El mecanismo que involucra a ApoE dependeria
de sus efectos sobre el metabolismo Amiloide ß.
• Varios receptores estan implicados: LDLR,
LRP1, ApoER2 y VLDLR, como asi tambien la
proteina Reelina.

4. • Figura 1

5. Papel fisiopatológico de ApoE en
Alzheimer:
• ApoE: Glicoproteina de 299 aminoacidos, se
expresa en higado y en SNC principalmente en
astrocitos y microglia.
• En el SNC es la apoproteina que mas se
produce.
• Sus funciones estan mediadas por receptor y
endocitosis.
• Los polimorfismos de un solo nucleotido en
clusterina han demostrado ser un factor de
riesgo.

6. Genética y clínica de la relación
entre ApoE y EA.
• El gen ApoE humano presenta varios
polimorfismos de un solo nucleotido
(SNPs).
• Los tres mas comunes conducen a tres
isoformas:
• ApoE2: cys 112-cys158
• ApoE3: cys112-arg158
• ApoE4: arg112-arg158

7. • ApoE se colocaliza en placas amiloides
siendo el alelo Ɛ4 un factor de riesgo (un
alelo Ɛ4 aumenta el riesgo en 3 veces, y
dos alelos en 12 veces).

8. Papel de ApoE en metabolismo del
Aß
• Primero se dijo que ApoE induce un
cambio conformacional patológico en el
Aß, siendo esto demostrado en autopsias.
• Ɛ4 se asocia con aumento de las placas
neuríticas.
• El efecto de la apoE4 es acelerar el inicio
de la deposicion de Aß en el cerebro.

9. • Personas apoE4 (+) de mediana y avanzada
edad son mas propensas a tener placas
amiloides, mientras que personas apoE2 (+)
rara vez desarrollan Aß.
• Las isoformas ApoE difieren en el defecto sobre
el tiempo de inicio, cantidad, ubicación y
conformacion de Aß.
• La formacion de complejos entre apoE lipidada y
Aß sigue el siguiente orden:
ApoE2>ApoE3>>ApoE4.

10. • La alteracion del estado de lipidacion en el
cerebro esta relacionado con efectos de la ApoE
sobre la fibrilizacion de Aß. Esta lipidacion esta
a cargo de ABC A1.
• ApoE tambien altera el transporte y
aclaramiento del Aß soluble en el cerebro.
• Las lipoproteinas con ApoE pueden secuestrar
Aß y modular su captacion, ademas puede
modular la eliminacion del mismo a traves de la
BHE.
• ApoE facilita la internalizacion y la union de Aß
soluble por las celulas.

11. Receptores de ApoE
• El efecto de la apoE esta mediado en parte por
sus receptores.
• Los mecanismos por los cuales estos
receptores pueden contribuir a la enfermedad
incluyen:
• Control de la inflamacion
• Metabolismo del colesterol
• Neurogenesis
• Generacion y trafico de Aß.
• Otros: Dendritogenesis, funcion del receptor de
glutamato y plasticidad sinaptica.

12. Bases moleculares en la
señalizacion
• Receptores ApoE contienen solo colas
citoplamaticas cortas, pero tienen una
secuencia corta conservada como el motivo
NPxY. Estos receptores pueden funcionar como
correceptores para proteinas de señalizacion,
entre ellos para el receptor NMDA.
• ApoER2 y VLDLR no necesitan asociarse para
provocar una señal, ambos se unen a la
proteina de señalizacion Reelina.

13. • La señalizacion por Reelina es esencial
para el desarrollo normal del cerebro y
para regular la migracion y
posicionamiento de cuerpos celulares en
la corteza cerebral.

14. Regulacion de la fosforilacion de
Tau
• Altos niveles de fosforilacion de Tau conducen a
grados variables de disfuncion cerebral,
comprometiendo la estabilidad de los
microtubulos de la neurona. Ademas interrumpe
el trafico del receptor de glutamato y su
reciclado.
• Varios resultados suman a la implicancia de los
receptores de apoE y su interaccion con Aß y
Tau controlando los mecanismos moleculares
de la patogenesis de esta enfermedad.

15. Neurotransmicion glutamaergica y
plasticidad sinaptica
• Varias observaciones apuntan hacia un papel de
Reelina y receptores de ApoE en la formacion
de conexiones neuronales.
• Reelina modula la movilidad y residencia de las
subunidades NR2B de los receptores NMDA.
• El aumento de plasticidad sinaptica esta
mediado por Reelina que tiene un efecto sobre
el trafico del receptor AMPA y a su vez en la
actividad sinaptica de estos receptores.

16. • Oligomeros del Aß induce supresion sinaptica
debido a disminucion en la actividad del
receptor NMDA por desfosforilacion del receptor
y endocitosis acelerada.
• Reelina activa la señalizacion por Src tirosina
quinasa, por esto la activacion de Reelina puede
prevenir la supresion sinaptica inducida por los
oligomeros, siendo asi un factor de proteccion.
• Esta funcion es interferida por ApoE4.
• Los niveles de reelina disminuyen en cerebros
de pacientes con alzheimer.

17. Receptores ApoE y proteccion
• ApoER2 y LRP1 estan implicados en la
proteccion contra la perdida de neuronas y
dendritas.
• Esta neuroproteccion se debe a la fosforilacion
de la proteina vinculada al elemento de
respuesta por AMP ciclico (CREB).
• Reelina promueve fuertemente esta fosforilacion
requiriendo el receptor NMDA. Esto es impedido
por la ApoE4.

18. Efectos de LRP1 sobre el
metabolismo de Aß, ApoE y APP
• El aumento de la endocitosis de APP
conduce a mayor produccion de Aß.
• Varios receptores ApoE interactuan con
APP como por ejemplo LRP1 en sus
motivos NPxY, esta interaccion acelera el
procesamiento del Aß.
• ApoER2 aumenta o disminuye la
produccion de Aß según las condiciones
extracelulares.

19. • Aclaramiento de Aß desparejo es un
acontecimiento patogenico.
• Hay 2 vias para el aclaramiento del Aß: mediada
por receptor o mediada por endopeptidasas. En
el primer caso esta mediada por LRP1, LDLR y
VLDLR.
• El mejor caracterizado es el LRP1 el cual casi
siempre esta presente en placas amiloides.
Disminuir su expresion lleva al deterioro en
aclaramiento de Aß.

20. • LRP1 se une al Aß directamente o a
traves de la ApoE en su dominio
carboxiterminal, siendo la ApoE3 la que
se une con mayor afinidad. Esta union
esta influenciada por la lipidacion de
apoE.
• LDLR tambien esta implicado y el
aumento de su expresion podria ser una
estrategia terapeutica.

21. • Figura 4

22. Diferencias entre LRP1 y LDL
• Ambos juegan un papel en el metabolismo de
ApoE. LRP1 se expresa mas en neuronas, y
LDLR mas en celulas gliales.
• ApoE secretada por los astrocitos tienen mas
afinidad por LDLR, y HDL de LCR se unen mas
al LRP1.
• Estas diferencias estan influenciadas por la
conformacion y lipidacion.
• LP1 sirve como sensor de colesterol mediando
en el transporte de otros lipidos como los
sulfatidos (marcadores del alzheimer).

23. Diagnostico Molecular: ARMS
• ARMS-PCR: Amplification Refractory
mutation sistem.
• Es una tecnica util para la deteccion de
mutaciones puntuales, deleciones,
inserciones y polimorfismos entre otros.
• Permite la amplificacion de alelos
especificos usando cebadores especiales
que solo hibridan con el alelo deseado.

24. • Comprende dos reacciones de PCR y 3
cebadores, ambas contienen un cebador
comun, y otros dos cebadores
aleloespecificos: uno para el alelo normal
y otro para el mutado.
• Cuadro (figura 10)

25. • Para incrementar la especificidad de los
cebadores se introduce un cambio de
base adicional en el 2° o 4° nucleotido del
extremo 3´.
• figura11

26. • Ventajas:
• No es radiactivo y es bastante rapido,
sencillo, exacto.
• Desventajas:
• Solo permite detectar mutaciones
puntuales conocidas.

27. Protocolo
• Consideraciones importantes:
• Hay un control (+) interno, cada muestra
debe procesarse por duplicado (se hace
una Mix para dos cebadores ARMS cys y
la otra para dos cebadores ARMS arg).
• Figura 13