Este documento trata sobre principios de normalización, estandarización, validación y calibración. La normalización busca definir guías para que sistemas, productos y servicios cumplan criterios mínimos de calidad. La estandarización busca minimizar variabilidad en ensayos de laboratorio. La validación evalúa si un método es adecuado para su uso previsto mediante parámetros de desempeño. La calibración establece la relación entre valores indicados por un instrumento y valores de referencia para garantizar la exactitud de las mediciones.

1. Principios de normalización, estandarización,
validación y calibración
Ávila, G., Bermúdez, M., Calvo, C., Des Bouillons,R. & Díaz,C.

2. Normalización
Actividad que permite definir una guía a seguir sobre cómo debe ser
un sistema, producto o servicio, de manera que todas las
organizaciones que lo desarrollen sigan el mismo modelo. Con ello se
consigue que estos cumplan unos criterios mínimos con los que
pueden ser evaluados y comparados para establecer un nivel de
calidad determinado.

3. Normalización
Normas
Aplicación
repetitiva
Unificar
criterios
Lenguaje
común
Organismo
autorizado

4. Normas
Tipos
;l
¿Qué es?
Es un documento técnico establecido
por consenso:
1) Especificaciones técnicas
voluntarias
2) Elaborada con participación de las
partes involucradas
3) Resultado de la experiencia y
desarrollo tecnológico
Básicas
Terminológicas
Producto
Seguridad Organización
Servicio
Ingeniería
Públicas

5. Organismos de Normalización
Internacionales Regionales Nacionales

6. Organismos de Normalización Internacional
Antecedentes
- XX: Comprensión de la importancia de establecer normas
- 1926: ISA→ promover el comercio internacional y precedente inmediato
de ISO.
No gubernamental
Federación de Org.
Nacionales
1 por país
Normas internacionales
Voluntarias
Desarrollo conjunto y
ofrecimiento mundial
Consenso Internacional

7. -ISO 9001
-ISO 14001
-ISO 22 000
-ISO 13485
- ISO/IEC 17025:2005
-ISO 10012
- “Requisitos generales para la competencia de
laboratorios de ensayo y calibración”.
- Gestión de procesos de medición
La Lanorma
La norma dice ¿Qué hay que hacer?​
El laboratorio dice ¿Cómo?
- Gestión de calidad
- Gestión Ambiental
- Gestión de Inocuidad de alimentos
- Dispositivos Biomédicos

8. Calibración
Conjunto de operaciones que establecen, en
condiciones especificadas, la relación entre
los valores de una magnitud indicados por
un instrumento de medida o un sistema de
medida, o los valores representados por una
medida materializada o por un material de
referencia, y los valores correspondientes
de esa magnitud realizados por patrones.
Comparación de un estándar de
medición, o de un equipo, con
estándar o un equipo de mayor
exactitud; para detectar y cuantificar
imprecisiones y reportarlas o
eliminarlas mediante un ajuste.
Resultados Certificado

9. Conceptos
Patrón
Valor de medición materializado,
aparato o sistema de medida con el
que se intenta definir, realizar,
conservar o reproducir una unidad
física o bien uno o varios valores
conocidos de una magnitud con el
fin de que sirva de comparación a
otros elementos de medida
Trazabilidad
Propiedad del resultado de una
medición o patrón tal que pueda
relacionarse con referencias
determinadas (patrones nacionales
o internacionales) por medio de una
cadena ininterrumpida de
comparaciones teniendo todas las
incertidumbres determinadas.

10. Metrología
1. 2. 3.
Científica Legal
Comercial/
Industrial
- Francia
- Investigaciones
- Equipo patrón
(masa)
- Trazabilidad
- Boston
- Labcal
- 22 labs
secundarios

11. Métodos de calibración
● Medición directa
● Medición indirecta: Fórmula matemática
● Sustitución: para masa
● Equilibrio: nulo o cero
● Simulación: respuesta de voltaje o resistencia
● Diferencial: volumen de un sólido
(* medición directa)
Combinación de ellos
Calibrar con la mínima incertidumbre
medible posible
Nivel del Laboratorio
Nivel de patrones Precio de la calibración
$

12. ¿Por qué calibrar?
● Cuando se utilizan equipos de medición de manera continua, la exactitud y la precisión varían
gradualmente a causa del desgaste de sus partes o por interferencias causadas por acumulación de polvo
y/o mugre.​
● Verificar el buen funcionamiento de los equipos​
● Responder a los requisitos establecidos por las normas de calidad​
● Garantizar la fiabilidad y trazabilidad de las medidas​
● Lograr la estandarización de procesos - eliminación de variables​
● Da validez​
● El equipo debe ser calibrado antes y después del proceso de validación

13. Calibración
- 3100 equipos calibrados
- 93% se calibra a nivel nacional
- Departamento de Calibración interno: 3
técnicos y un ingeniero
- 300-400 cal/mes
- Reportan a la sección de calidad
- Plan mayor: etiquetar, almacenar,
calibrar, entrenar.
- Softwares: seguimiento
- USA y Japón

14. Estudio RyR (reproducibilidad-repetibilidad)
● Te dice que % de error está aplicando
El técnico
El proceso de medición
El equipo
Estudiar los posibles motivos para así reducir
la variabilidad de la medición de un proceso
Mayor exactitud
● Se debe trabajar con parámetros
30%
No está bien
de error* Proceso confiable y reproducible
Por ejemplo:

15. ISO/IEC 17025:2005
Establece los requisitos que deben cumplir los
laboratorios de ensayos y calibración para
demostrar:
1) Operan un SGC eficaz y en mejora
continua.
2) Técnicamente competentes.
3) Capaces de producir resultados de
ensayos y calibración confiables.
Contenido
❖ Requisitos de gestión:
administrativos (Normas 9000).
❖ Requisitos técnicos: competencia
del laboratorio (personal,
instalaciones, condiciones
ambientales, métodos y
validación) y validez de
resultados.
❖ Cubre: -Normalizados
- No normalizados (cliente)
- Laboratorio
Cumplir con el 100% de
los requisitos

16. Algunos Puntos de Ejemplo

17. Verificación
-La validación y la verificación no son propiamente normas, aunque forman parte de
las normas relacionados con el control de calidad .
-Revisión a un servicio o producto con el objetivo de garantizar sus especificaciones
de calidad
-Amplio abanico de aspectos relacionados al producto. Se debe aplicar tanto en la
fase de desarrollo, como el escalamiento y la producción comercial.
-Mantener las especificaciones definidas durante el desarrollo del producto a lo largo
de todo el ciclo de vida.

18. Verificación
Revisión
Servicios-productos-
Procesos
Características de
funcionalidad y
calidad
Desarrollo
Escalamiento
Producción
Mantenerlas a lo
largo del ciclo de
vida
Pruebas y modelado

20. Verificación
-Modelado del Producto o partes del producto, servicio o sistema
-Repaso o revisión de resultados de modelado
-Repetir pruebas regularmente para asegurar la continuidad de las especificaciones
del diseño. los requerimientos y las regulaciones
-Usualmente es un proceso interno
-Deben generarse registros para temas de auditorías para acreditar por ISO o por
cualquier otra compañía acreditadora.

21. Estandarización de ensayos de laboratorio
Diseñar un procedimiento de operación estándar que
minimice la variabilidad debida a diferentes analistas
y diferentes condiciones del laboratorio o entidad.
“Disminuir error sistemático entre analistas”

22. Aspectos claves en la estandarización
1. Buscar si hay métodos normalizados
2. Miembros del laboratorio o empresa participen.
3. Capacitación del personal.
4. Que el procedimiento estándar sea la forma más fácil, segura y mejor.
5. Documentar.
6. Demostrar mediante evidencia objetiva que el método es capaz de generar
resultados estadísticamente válidos y confiables en las condiciones de trabajo del
laboratorio.
7. Paso inicial hacia la validación.

23. Ejemplo
- Cambio de la enzima B-glucoronidasa
en lugar de la enzima Zimolasa
- Paso de incubación extra a 100°C.
- Se evalúo la calidad de ADN. (124,9
±30,2 ng/μl)
(A260/A280 nm = 1,86±0,1)

24. Validación de un Proceso
- FDA: Process Validation: General Principles and Practices 2011:
“process validation is defined as the collection and evaluation of data, from the
process design stage through commercial production, which establishes scientific
evidence that a process is capable of consistently delivering quality product”
- Entradas variables+proceso controlado=Producto uniforme
- Proceso continuo de retroalimentación
- Todas las etapas

26. Etapas de Validación
Etapa 1 – Diseño de Proceso : El proceso de manufactura se diseña de acuerdo a
partir del conocimiento del desarrollo y el escalamiento
Etapa 2 – Cualificación del Proceso: El diseño se pone a prueba para ver si es capaz
de manufactura comercial reproducible
Etapa 3 – Verificación Continua del Proceso: Aseguramiento contínuo durante la
producción de que el proceso se mantiene controlado, con resultados uniformes.

27. Validación
exitosa
Cada lote
Certeza razonable de
sus características
Identidad
Fuerza
Calidad
Pureza
Potencia
Conocimiento del
producto y el proceso
Datos A
escala
laboratorio
piloto, y
comercial
Identificar Fuentes de
Variación
Detectar presencia y Grado
de Variación
Definir Impacto de Variación
En
proceso
En
producto
Controlar variación, tomando en
cuenta riesgos para el producto

28. Control del Proceso
Todo el Ciclo de vida
Deben revalidarse las
variaciones
Equipo
Insumos Personal y capacitacion
Ambiente de Produccion
Cambios del Proceso

29. Otras consideraciones
-Procedimientos de control=monitoreo de procesos o etapas con potencial de
generar variaciones de calidad
-Validez estadística
-Corroboración las especificaciones deseadas
-Equipo calibrado y revisado = programa planificado siempre de manera uniforme
-Los parámetros y atributos clasificarse por qué tan críticos son y asignarles
medidas de control proporcionales.

30. Validación de ensayos de laboratorio: Definiciones
“Proceso de evaluación sistemático para demostrar que el método cumple con los requisitos necesarios
para el uso que se le va a otorgar” Acevedo (2014)
“Verificación de que los requisitos especificados son adecuados para el uso previsto” Instituto Nacional
de la Salud, Colombia, 2014
“Proceso que determina la idoneidad de una prueba, que se ha desarrollado, optimizado y estandarizado
adecuadamente para un fin concreto. La validación incluye estimaciones de las características de
rendimiento analítico y diagnóstico de una prueba” Organización mundial de la Salud Animal (2012)
“Repetibilidad, el análisis no debe diferir significativamente entre analistas o el mismo analista en tiempos
distintos” Profesor de Química, TEC

31. GUÍA PARA LA VALIDACIÓN DE MÉTODOS.
ECA-MC-PO01-G01
INTE-ISO/IEC 17025
INTE-ISO 15189
Estrategias de evaluación de
los laboratorios de ensayo y
de calibración.
Competencia técnica,
capacidad del laboratorio
para emitir resultados fiables
Confirmar, verificar

32. Consideraciones preliminares
1. Objetivo de la prueba.
2. Variables que pueden afectar la realización de la prueba.
3. Matriz.
4. Factores que intervienen en el rendimiento.
5. Cualitativa o cuantitativa.
6. Situación: Normalizado, Normalizado modificado o no normalizado.

33. Guía de Validación - ECA
1. -Determinar los parámetros de desempeño (cuadro 3)
2. -Establecer los criterios de aceptación
3. -Evaluación de los resultados de la validación por comparación directa o por la
aplicación de pruebas estadísticas (comparar parámetros con criterios)
4. -Declaración de la conformidad del método
5. -Alcance: Normalizado, normalizado modificado o no normalizado
evaluar
Verificación de
algunos
parámetros
Adicional las
modificaciones
Desarrollado por
el Lab

34. Informe de Validación
1) Objetivo
2) Los ítems que se van a ensayar o a calibrar y el ámbito
3) Personas que participaron (responsable técnico Doc. Campos/Mariel C.)
4) Equipos patrones y Reactivos (Detalle de insumos, controles metro y amb.)
5) Metodología
Descripción parámetros y criterios y evaluación diseño experimental
6) Resultados y conclusiones: Resumen resultados, tratamiento estadístico y
conclusiones
7) Evidencia de Revisión y aprobación
Justificación
técnica de
parámetro no
determinado
Sí parámetros NO documentados
→ declaración de complimiento
en plan de validación de común
acuerdo con el cliente.

35. Validación de IFI Mal de ChagasECA
Chinche Triatoma inmediata

36. Robustez de la Técnica
La habilidad de reproducir el método en
diferentes laboratorios o bajo diferentes
circunstancias sin la ocurrencia de
diferencias inesperadas en los resultados
obtenidos.
International Conference on Harmonisation
of Technical Requirements for the
Registration of Pharmaceuticals for
Human Use (ICH) "
❏ 2 Temperaturas de Incubación
❏ 2 Tiempos de Incubación
❏ Cantidad de muestra y Conjugado por
pocillo
❏ Tiempo de Lectura
8 ensayos
7 PUNTOS
CRÍTICOS
" Capacidad de un método para
mantenerse sin cambios ante pequeñas
pero deliberadas variaciones en los
parámetros del método, que provee una
indicación de su confiabilidad durante el
uso normal. "

37. 2 estándares
1 UI
Suero Humano
Liofilizado
2011
unidad
discreta de
tipificación
Tipo 1 y 2
Caracterizarlos
Determinar el Título
1:60
Montar
2 muestras
1 por estándar
por duplicado

38. Especificidad y sensibilidad 100 muestras: tantas (+) y tantas (-)
Malaria, Leishmania,
Hepatitis B y C, y
Sífilis
● Determinar si hay reacción cruzada.
● Ya están caracterizadas
Hay o no concordancia
A partir de una fórmula que
se basa en falsos (+) y (-)
Tabla de contingencia de 2x2
Calcular a mano o
con programas
estadísticos
● La tabla era con la IFI y el gold
standard (en este caso no es otra
técnica, sino las tres técnicas de
diagnóstico juntas)
Capacidad del método de
dar negativo cuando las
muestras no tienen el
analito
Capacidad del método de
dar positivo cuando las
muestras tienen el analito

39. Precisión: proximidad entre los resultados de
mediciones independientes, bajo las mismas condiciones
● Uso de guía EP12-A2 de Clinical and Laboratory Standards Institute
Hacen normas para
hacer evaluaciones
para determinar la eficiencia de ensayos cualitativos
● Punto de corte: es el punto que me dice a mí, de aquí para arriba tengo resultados
positivos, y de aquí para abajo aunque vea fluorescencia, es negativo (1:40)
● C50: en este punto específico, las probabilidades son: 50%(+) y
50%(-), en ese punto yo no tengo certeza estadística, lo ideal es
que mi punto de corte coincida con este valor
● Entonces en el ensayo, determino si verdaderamente la
concentración que tomo como punto de corte coincide con la
C50 o no, en caso de que no sea, uno debe plantear si cambia
el punto de corte o como trata con eso
● Intervalo C5-C95, es de incertidumbre

40. Límite de Detección
Límite de detección: Concentración mínima de un analito en la matriz de una muestra que puede ser
detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo condiciones analíticas específicas.
El límite de detección, expresado como la concentración cL, o la cantidad qL, se deriva de la medida
más pequeña xL, que puede detectarse con certeza razonable por un procedimiento analítico dado.
El valor de xL es dado por la ecuación: xL = xbl + ksbl donde xbl es la media de las mediciones del
blanco y sbl la desviación estándar de las mediciones del blanco y k es un factor numérico elegido de
acuerdo al nivel de confianza deseado.
Muestras blanco, muestras de 1:40 y 1:80 → De cada muestras 60 repeticiones
EP17-A: Protocolo para la determinación de límites de detección y límites de cuantificación¨ del CLSI.

41. Principios de normalización, estandarización,
validación y calibración
Ávila, G., Bermúdez, M., Calvo, C., Des Bouillons,R. & Díaz,C.

43. OTRAS
DEFINICIONES DE
PARÁMETROS