Patrones de inmunotinción e interpretación de resultados en ihq

Nombre alumna: Estefania Reyes
Profesores Encargados: Mariolly Müller
Esteban Órdenes
Cristian Poblete
Fecha: 11/09/2015
Universidad de Chile
Facultad de Medicina
Dpto. Tecnología Médica

Introducción
 Las técnicas de inmunotinción son técnicas muy
útiles, ya que nos permiten diferenciar células y
tejidos a nivel molecular según la identificación de
diferentes antígenos, los que varían según sus
características funcionales, así como según el estadio
del desarrollo de cada célula y del tejido que
conformen.

Introducción
 A su vez, son útiles en la identificación y
diferenciación de patologías según la alteración en el
patrón de distribución intracelular y tisular de
diferentes componentes moleculares (antígenos).
 Es por ello que su uso, estandarización (mediante de
controles y protocolos) y correcto análisis han ido
ganado gran importancia en el diagnóstico de
patologías y en las investigaciones médicas dentro de
este último tiempo.

Patrones de inmunotinción
 Es la forma de distribución de la imnunotinción utilizada,
depende de la localización del antígeno a detectar.
 Patrones celulares  Estudian la distribución de un
antígeno dentro de las células.
Ejemplos: Patrones nucleares, citoplasmáticos, de
membrana, golgi, mixtos, etc.
 Patrones tisulares  Permite analizar qué población
celular es positiva para un determinado antígeno.
Ejemplos: Epitelios, células germinales, tejido conectivo,
etc.

Patrones de inmunotinción celular
 Nuclear: Núcleo con tinción positiva para IHQ. Intensidad de
tinción varía según tipo de antígeno y muestra analizada.
 Ejemplos: Receptor de estrógeno (RE), Receptor de
progesterona (RP), Ki67, P53, entre otros.
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.

 Nuclear:
 Ejemplos: Receptor de estrógeno (RE), Receptor de
progesterona (RP), Ki67, P53, entre otros.

 Citoplasmático: Tinción positiva en el citoplasma,
intensidad y distribución de tinción varía según tipo
celular analizado.
 Ejemplos: Filamentos intermedios, vimentina,
microtúbulos, microfilamentos, entre otros.

 Citoplasmático:
 Ejemplos: Filamentos intermedios, vimentina,
microtúbulos, microfilamentos, entre otros.

 Membrana: IHQ positiva en membrana ya sea total o
parcialmente, dependiendo de distribución del antígeno
según tipo celular analizado.
 Ejemplos: CD4, CD8, CD20, HER-2, entre otros.

 Membrana:
 Ejemplos: CD4, CD8, CD20, HER-2, entre otros.
Her-2 en carcinoma de
mama
Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog.
USA Edition. 2014.
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry
Theranostic and Genomic Applications. 3° Edition.
Saunders Elsevier. 2010.

 Golgi (Patrón puntiforme pan nuclear)
 Ejemplos: CD15 , CD30. En alguna clases de tumores se
pueden utilizar citoqueratinas (Ej: Ctk-20 para tumores
neuroendocrinos de la piel)

 Mixto: Distribución en diferentes zonas subcelulares
(núcleo/citoplasma; membrana/citoplasma; etc)
 Ejemplo: S-100 (Marcador de tejido de origen
neuroectodérmico. Se distribuye en núcleo y citoplasma)
S-100: De izquierda a derecha: Glioma humano, carcinoma de mama humana, carcinoma
de piel humano.
Extraído de: http://www.ptglab.com/PView/S100B-Antibody-15146-1-AP-PVIEW.htm

Patrones de inmunotinción tisular
 Se refiere a distribución de un antígeno determinado a nivel
de tejido, pudiendo ser en un tejido fisiológico (Ejemplo:
epitelio intestinal, músculo, cerebro, etc) ya sea en estadio
adulto o en etapas indiferenciadas.
 O tejido patológico ( Ejemplo: diferentes tipos de cáncer en
diferentes estadios de indiferenciación, hígado cirrótico,
glomerulonefritis, corazón con infarto al miocardio, etc).

Ejemplos: Tejidos fisiológicos

Ejemplos: Tejidos patológicos

Controles en inmunotinción
 Control positivo externo :
-Muestra diferente a la muestra problema que produce reacción
positiva para el antígeno a detectar.
-A su vez, la muestra produce reacción positiva para la técnica y el
sistema de detección utilizado
-Se conoce el patrón e intensidad
de tinción.
-Objetivo: Validar la técnica.
Permite comparar este control con
la muestra problema y definir si
el patrón e intensidad de tinción
es correcto o no lo es. Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and
Genomic Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.

 Control positivo interno:
-Zona del tejido problema en que se conoce que produce reacción
positiva para el antígeno a detectar.
-A su vez, se conoce que hay reacción positiva para el sistema de
detección utilizado.
-No necesariamente produce el mismo patrón e intensidad de
tinción que la zona del tejido a analizar.
Objetivo: Evaluar la conservación
del antígeno a estudiar y su
inmunoreactividad, la que se relaciona
con el procesamiento de la muestra.
Suvarna Kim , Layton Christopher, Bancroft John. Bancroft's Theory and
Practice of Histological Techniques. Expert Consult Online and Print, 7°
edition. Churchill Livingstone

 Control negativo externo:
-Muestra de diferente origen a la muestra problema que se conoce
que su reacción es negativa para el antígeno de interés.
-O bien, muestra del mismo origen de la muestra problema, sin
incorporación de algún reactivo
clave en la detección
(ej: Ab 1°, Ab2°, etc).
-Objetivo: Indica la especificidad
de la técnica para detectar
el antígeno de interés.
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and
Genomic Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.

 Control negativo interno:
-Zona del tejido a analizar en que se conoce que no hay reacción
positiva para el antígeno a estudiar.
Objetivo: Evaluar especificidad
del anticuerpos utilizados dentro
del tejido en estudio,
evaluar posibles reacciones
cruzadas.
Fotografía Tejido de amígdala. Inmunotinción anti-
vimentina. Se observan células de origen epitelial
(epitelio estratificado) sin reacción de inmunotinción.

 Artefactos en la inmunotinción:
 Fallas en la manipulación:
Precipitados (soluciones mal preparadas, cromógenos antiguos)
Background excesivo
Mala distribución de Ab
Error en orden de incubación de Ab, error en el protocolo de IHQ
Mala fijación; uso de otros fijadores (cambio en la morfología del
tejido)
 Características del tejido:
Tejido hemorrágico
Peroxidasa endógena, biotina endógena
Tejido necrótico
Pigmento melanina, etc.

Interpretaciones específicas de
patologías mediante Inmunotinción:
 Sistema Allred.
 Sistema Hercep test

Sistema Allred
 Evalúa el estadio del cáncer mamario y su posible tratamiento con
terapia hormonal.
 Identifica expresión de receptores de estrógeno y progesterona.
 Analiza porcentaje células teñidas positivamente:
0 = ninguna, 1< 1% , 2 = 1%-10% , 3 = 11% a 33%, 4= 34% a 66% ,
5= 67% a 100%
 Analiza nivel de intensidad de tinción:
1 = débil, 2=moderado , 3= fuerte.
 En base a la suma de estos dos parámetros crea una escala de
puntuación del 0 al 8. A partir de puntuación 3 se considera
positivo para carcinoma ductal de mama.

Interpretación de inmunotinción de receptores
hormonales según sistema de Allred
Dabbs David MD. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and Genomic Applications. 3° Edition. Saunders
Elsevier. 2010.

Hercep test
 Evalúa cáncer mamario según sobrexpresión del receptor HER-2 y
su posible tratamiento con anticuerpo Trastuzumab (Herceptina).
 Evalúa solo carcinoma invasor, no considera al carcinoma In Situ.
 De acuerdo al grado de inmunotinción crea una escala de
puntuación:
0  Sin tinción o tinción parcial leve (<10% del tumor)
1  Tinción de membrana débil en más del 10% de tumor. Células
se tiñen en solo una parte de la membrana.
2  Tinción débil a moderada completa de la membrana en más
del 10% de las células del tumor.
3  Tinción de membrana completa y fuerte en más del 30% de
las células del tumor.

Interpretación de inmunotinción de
HER 2 según Hercep test
Para puntuación 2 se deriva a un segundo análisis con FISH, si resultados son positivos
se considera el tratamiento con Trastuzumab.
Puntuación 3 se considera directamente el tratamiento con Trastuzumab.
Suvarna Kim, Layton Christopher, Bancroft John. Bancroft's Theory and Practice of Histological Techniques. 7° edition. Churchill Livingstone. 2013.

Conclusión
 Las técnicas de inmunotinción han ido asumiendo mayor
importancia en el análisis de células y tejidos ya sea dentro
del diagnóstico patológico, así como en investigaciones
médicas, debido a su alta especificidad y sensibilidad para
detectar alteraciones a nivel molecular.
 Esto explica la importancia de su implementación en la
detección oportuna de enfermedades a nivel molecular,
como el cáncer, en complemento con los métodos clásicos ya
utilizados.

Bibliografía
 Dabbs David. Diagnostic Immunohistochemistry Theranostic and Genomic
Applications. 3° Edition. Saunders Elsevier. 2010.
 Suvarna Kim, Layton Christopher, Bancroft John. Bancroft's Theory and
Practice of Histological Techniques. 7° edition. Churchill Livingstone. 2013.
 Leica Biosystem. Advanced Staining Catalog. USA Edition. 2014.
 Cárdenas Jesús, Erazo Aura, Maafs Eduardo, Poitevin Adela. Consenso
nacional sobre diagnóstico y tratamiento del cáncer mamario. Cuarta
revisión. Elsevier. 2011.
 García Raimundo. La inmunohistoquímica y el control de calidad en
anatomía patológica. Disponible en:
[http://apatologicaehistoria.ugr.es/pages/anatomia_patologica/pdf_cursos/
3_ihq/!]. [Visitado el día: 10/09/2015]
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