4. ANTICUERPO
• Molécula
• Funcional y heterogénea
• Unen antígenos mediante
dominio de unión (parátopo)
• Respuesta a estimulaciones
antigénicas
• Inmunoglobulinas (G, M, A, D, E)
30/05/2020 4
5. Reacción Ag-Ac – FUNDAMENTO
• Reacciones antígeno –
anticuerpo in vitro →
reacciones serológicas
• Detección y cuantificación
de antígenos y/o
anticuerpos (Diagnóstico
de enfermedades
infecciosas)
30/05/2020 5
7. Reacción Ag-Ac – CARACTERÍSTICAS
• Las reacciones Ag-Ac se
producen en 3 etapas:
• Primaria: formación del
complejo Ag-Ac
• Secundaria: conduce a
eventos visibles: aglutinación,
precipitación.
• Terciaria: destrucción del Ag o
su neutralización
30/05/2020 7
8. Reacción Ag-Ac – CARACTERÍSTICAS
• Enlaces no covalentes
• Unión antígeno – anticuerpo reversible
• Interacción primaria
• Interacción secundaria
30/05/2020 8
10. TÍTULO
• Inversa de la máxima
dilución de suero que
muestra reacción
observable en una prueba
• Útil para estimar la
concentración del Ac y Ag
• Comparar muestras
• Fenómeno prozona
30/05/2020 10
11. SEROCONVERSIÓN
• Aparición de anticuerpos o
• Aumento del título de
anticuerpos en cuatro veces
en un período entre 3 y 4
semanas
30/05/2020 11
19. INMUNODIFUSIÓN RADIAL
• Cuantifica Ig o antígenos solubles
• Difusión de la muestra (Ag ó Ac)
• Matriz semisólida de agar
• Ag ó Ac específico disuelto
• Precipitado visible
• https://www.youtube.com/watch?v=ko3cCY2EHHg
30/05/2020 19
20. INMUNODIFUSIÓN DOBLE BIDIMENSIONAL
• Método de Ouchterlony
• Placa petri con agar
• Pocillos con Ag y Ac
• Difusión radial
• Bandas de precipitación
• Similitud de antígenos
reaccionantes
• https://www.youtube.com/watch?v=Fnx5CkGRBEM
• https://www.youtube.com/watch?v=hmK7yYr2T54
30/05/2020 20
21. INMUNOELECTROFORESIS
• Técnica cualitativa (agarosa)
• Identificación de componentes
proteicos
• Dos etapas:
– Separación electroforética
– Difusión y formación de arcos de
precipitación
30/05/2020 21
22. AGLUTINACIÓN
• Antígeno particulado (insoluble)
• Unión con anticuerpo
• Formación de grumos (aglutinado)
• Zona de equivalencia
• Mayor sensibilidad que precipitación
30/05/2020 22
24. AGLUTINACIÓN ACTIVA
PARTÍCULA AGLUTINANTE REACCIÓN UTILIDAD DIAGNÓSTICA
GLÓBULOS ROJOS Determinación de grupo sanguíneo y factor RH
GLÓBULOS ROJOS COOMBS INDIRECTO Determinación de sensibilización por incompatibilidad RH
GLÓBULOS ROJOS COOMBS DIRECTO Determinación de Eritroblastosis Fetal
BACTERIAS (BRUCELLA) HUDDLESON Búsqueda de Ac anti Brucella en suero humano
PARÁSITOS (Trypanosoma cruzi) AD – CHAGAS Búsqueda de Ac anti T. cruzi en suero humano
PARÁSITOS (Toxoplasma gondii) AD - Toxo Búsqueda de Ac anti T. gondii en suero humano
30/05/2020 24
25. AGLUTINACIÓN PASIVA
• Empleo de una partícula
aglutinante inerte a la cual
se le ha unido un antígeno
30/05/2020 25
26. AGLUTINACIÓN PASIVA
PARTÍCULA AGLUTINANTE REACCIÓN UTILIDAD DIAGNÓSTICA
LÁTEX + gp 120 Búsqueda de anticuerpos anti VIH en suero humano
LÁTEX + sHBV Búsqueda de anticuerpos anti sHBV en suero humano
LÁTEX + estreptolisina O ASTO Búqueda de Ac anti Streptolisina O en suero humano
30/05/2020 26
27. AGLUTINACIÓN PASIVA DIRECTA
• Basada en la sensibilización de la partícula inerte con el Ag
• Útiles en la detección de Ac en distintos fluidos biológicos
30/05/2020 27
28. AGLUTINACIÓN PASIVA REVERSA
• Basada en la inmovilización del Ac en la superficie de la partícula inerte
• Útil para la detección de Ag en muestras biológicas
• Anticuerpos monoclonales
30/05/2020 28
29. FLOCULACIÓN
• Interacción entre Ag soluble y Ac
• Formación de precipitado de partículas muy finas
• Visibles macroscópicamente o microscópicamente
• VDRL
• RPR
30/05/2020 29
30. AGLUTINACIONES FEBRILES
• Detección semicuantitativa de Ac
• Tifoidea, Paratifoidea y Brucella
• En lámina
• En tubo
• Dilución más alta en que se
observe reacción positiva
• Títulos diagnósticos hasta 8 días
después de la fiebre (Ac Tifoidea)
30/05/2020 30
31. PROTEÍNA C REACTIVA
• Proteína de fase aguda
• Se incrementa como respuesta
a una inflamación aguda
inespecífica
• Útil en seguimiento y pronóstico
30/05/2020 31
32. CASO N° 01
• GFR, 60 años, agricultor, presenta
lesiones granulomatosas en
manos, con adenopatías en axilas.
Tiene heridas por espinas en
manos.
• Se ordena toma de muestras para
análisis.
30/05/2020 32
33. INDICACIÓN U ORDEN DE ANÁLISIS
Paciente: (apellido paterno, materno, nombre) Sexo: M --- F ---. Edad: --------- Estado civil: --------- H.C. -------------- Procedencia: -------- Dirección:
------------------------- Teléfonos: ----------- DNI: ------------ Correo electrónico: -------------------Aviso en caso de emergencia: ------------------------------
Antecedentes patológicos familiares: _____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________
Antecedentes patológicos personales: ____________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________
Impresión diagnóstica: Micosis subcutánea ________________________________________________________________________________________
Tratamiento con antibióticos o antisépticos u otros de interés: ________________________________________________________________________
Condiciones sanitarias y epidemiológicas: agricultor no usa guantes en sus labores _______________________________________________________
Descripción detallada de las lesiones : granulomatosas en manos, adenopatías axilares ____________________________________________________
FASE PRE ANALÍTICA
33
30/05/2020
Muestra: Raspado??? Aspirado??? Sangre venosa periférica.
Examen: Examen directo, cultivo, inmunodifusión.
Indicaciones para la toma de la muestra:
– Bioseguridad
– Transporte inmediato _________________________________________________________________________________________________________________
Fecha Indicación: _____________________________________________________________________________________________________________
Fecha toma de muestras : ______________________________________________________________________________________________________
Médico Firma
35. FASE POST ANALÍTICA
REPORTE DE RESULTADOS
• RESULTADOS
• Examen: INMUNODIFUSIÓN DOBLE
• Muestra: Sangre periférica________________________________________________________
• Resultado: Patrón de identidad total para Blastomyces dermatitides
• Fecha y hora de la toma de la muestra: ______________________________________________
• Fecha y tiempo de análisis: _______________________________________________________
• Nombre y firma del analista: ______________________________________________________
• Condiciones: muestra aparentemente bien tomada y conservada.
• Técnica empleada: ______________________________________________________________
30/05/2020 35
36. FASE POST ANALÍTICA
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Interpretación
La prueba de Inmunodifusión doble de Ochterlony nos muestra un resultado de patrón de identidad
para Blastomyces dermatitides y nos sugiere que el suero del paciente tiene anticuerpos contra este
hongo.
Correlacionar con la clínica del paciente y el tiempo de enfermedad
La blastomicosis es una enfermedad piogranulomatosa causada por el hongo dimórfico Blastomyces
dermatitides, encontrado con frecuencias en el suelo y sobre la madera. Tiene relación con la
actividad del paciente, quien recibió el tratamiento adecuado y se recuperó.
30/05/2020 36
37. CASO N° 02
• TGB, 29 años, inicia fiebre de
40°C, nauseas, vómitos,
diarrea y estreñimiento,
cefalea intensa. Antecedente
de ingesta de alimentos de
dudosa preparación.
30/05/2020 37
38. INDICACIÓN U ORDEN DE ANÁLISIS
Paciente: (apellido paterno, materno, nombre) Sexo: M --- F ---. Edad: --------- Estado civil: --------- H.C. -------------- Procedencia: --------
Dirección: ------------------------- Teléfonos: ----------- DNI: ------------ Correo electrónico: -------------------Aviso en caso de emergencia: ------------------------
Antecedentes patológicos familiares: __________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________
Antecedentes patológicos personales: _________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________
Impresión diagnóstica: Fiebre tifoidea _________________________________________________________________________________________
Tratamiento con antibióticos o antisépticos u otros de interés: _____________________________________________________________________
Condiciones sanitarias y epidemiológicas: ingesta de alimentos de dudosa preparación _________________________________________________
Descripción detallada de las lesiones : fiebre, náusea, vómitos, diarrea, estreñimiento, cefalea intensa ____________________________________
FASE PRE ANALÍTICA
38
30/05/2020
Muestra: Sangre venosa periférica.
Examen: Aglutinaciones febriles, hemocultivo, hemograma
Indicaciones para la toma de la muestra:
– Inicio de pico febril
– Mínimo dos muestras ______________________________________________________________________________________________________________
Fecha Indicación: __________________________________________________________________________________________________________
Fecha toma de muestras : ___________________________________________________________________________________________________
Médico Firma
40. FASE POST ANALÍTICA
REPORTE DE RESULTADOS
RESULTADOS
• Examen: Aglutinaciones febriles
• Muestra: sangre periférica___________________________________________________________
• Resultado:
• Fecha y hora de la toma de la muestra: _________________________________________________
• Fecha y tiempo de análisis: ___________________________________________________________
• Nombre y firma del analista: __________________________________________________________
• Condiciones: muestra aparentemente bien tomada y conservada.
• Técnica empleada: _________________________________________________________________
PRUEBA RESULTADO
TÍFICO O 1:160
TÍFICO H 1:320
PARATÍFICO A 1:20
PARATÍFICO B 1:20
BRUCELLA NEG
30/05/2020 40
41. FASE POST ANALÍTICA
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Interpretación
La prueba muestra títulos elevados para anticuerpos contra el antígeno O y H de Salmonella typhi,
estos títulos son diagnósticos.
Correlacionar con la clínica del paciente y el tiempo de enfermedad pues la positividad y los títulos
elevados se presentan después de la 2da semana de la fiebre.
Optimizar medidas de bioseguridad.
De ser posible se solicitará coprocultivo, hemocultivo y/o mielocultivo para aislamiento e identificación
del agente etiológico, además de pruebas de sensibilidad y resistencia a los antimicrobianos.
30/05/2020 41
42. CASO N° 03
• HGB, 19 años, consulta porque a
su pareja le ha salido una úlcera
no dolorosa en el glande y ella se
siente preocupada.
• Y ahora ?????????
30/05/2020 42
43. INDICACIÓN U ORDEN DE ANÁLISIS
Paciente: (apellido paterno, materno, nombre) Sexo: M --- F ---. Edad: --------- Estado civil: --------- H.C. -------------- Procedencia: --------
Dirección: ------------------------- Teléfonos: ----------- DNI: ------------ Correo electrónico: -------------------Aviso en caso de emergencia: ------------------------
Antecedentes patológicos familiares: __________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________
Antecedentes patológicos personales: _________________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________________________________________________
Impresión diagnóstica: Sífilis _________________________________________________________________________________________________
Tratamiento con antibióticos o antisépticos u otros de interés: _____________________________________________________________________
Condiciones sanitarias y epidemiológicas: contacto con pareja infectada con sd de úlcera genital compatible con sífilis primaria
_________________________________________________________________________________________________________________________
Descripción detallada de las lesiones : _________________________________________________________________________________________
FASE PRE ANALÍTICA
43
30/05/2020
Muestra: Sangre venosa periférica.
Examen: VDRL, RPR
Indicaciones para la toma de la muestra:
– Ayunas
– Bioseguridad ______________________________________________________________________________________________________________________
Fecha Indicación: __________________________________________________________________________________________________________
Fecha toma de muestras : ___________________________________________________________________________________________________
Médico Firma
45. FASE POST ANALÍTICA
REPORTE DE RESULTADOS
RESULTADOS
• Examen: VDRL - RPR
• Muestra: sangre periférica_________________________________________________
• Resultado: POSITIVO!!!!!!!!!!
• Fecha y hora de la toma de la muestra: _______________________________________
• Fecha y tiempo de análisis: _________________________________________________
• Nombre y firma del analista: _______________________________________________
• Condiciones: muestra aparentemente bien tomada y conservada.
• Técnica empleada: _______________________________________________________
30/05/2020 45
46. FASE POST ANALÍTICA
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Interpretación
La prueba de VDRL y/o RPR son de tamizaje o screening en la búsqueda de reacción ante infección
por Treponema pallidum pallidum. Cabe mencionar que no es una prueba treponémica, por lo que su
especificidad hay que relacionarla con la clínica del paciente. Esta prueba usa el principio de
floculación y no es de aglutinación.
Correlacionar con la clínica del paciente y el tiempo de enfermedad
Treponema pallidum es una bacteria de la familia de las espiroquetas, causante de la sífilis,
enfermedad de transmisión sexual, que se previene y además tiene tratamiento.
30/05/2020 46
53. EIA NO COMPETITIVO
• Ag específico ligado a
fase sólida
• Suero del paciente
• Conjugado
• Sustrato
cromogénico
30/05/2020 53
54. EIA COMPETITIVO
• Ag específico
ligado a fase
sólida
• Suero del
paciente
mezclado con
el conjugado
• Sustrato
cromogénico
30/05/2020 54
55. EIA DE CAPTURA
• Diseñado para detectar
un tipo específico de Ac
• Ac específico (Ig M ó Ig
G) ligado a fase sólida
• Suero del paciente
• Ag específico
• Sustrato cromogénico
30/05/2020 55
56. INMUNOFLUORESCENCIA
• Interacción Ag Ac
• Marcaje con sustancia
fluorescente
• Uso de microscopio de
fluorescencia
• Detecta Ag y Ac
– Inmunofluorescencia directa
– Inmunofluorescencia indirecta
30/05/2020 56
57. INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
• Aplicada a cortes de tejidos, o extendidos de microorganismos
• Detecta Ag
• FITC (isotiocianato de fluoresceína)
30/05/2020 57
59. QUIMIOLUMINISCENCIA
• Emisión de luz durante una reacción química
• Excelente sensibilidad
• Los marcadores quimioluminiscentes pueden ser unidos a Ag y/o Ac
• Luminol, ésteres de acridinio, peroxioxalato, dioxietano, tris - rutenio
30/05/2020 59
60. CASO N° 01
• WDE, 564 años, acude a
consulta prequirúrgica por Ca
de próstata, le indican una
serie de exámenes dentro del
riesgo quirúrgico.
30/05/2020 60
61. INDICACIÓN U ORDEN DE ANÁLISIS
Paciente: (apellido paterno, materno, nombre) Sexo: M --- F ---. Edad: --------- Estado civil: --------- H.C. --------------
Procedencia: -------- Dirección: ------------------------- Teléfonos: ----------- DNI: ------------ Correo electrónico: -------------------
Aviso en caso de emergencia: ------------------------------
Antecedentes patológicos familiares: ___________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Antecedentes patológicos personales: __________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Impresión diagnóstica: Cáncer de próstata – RQ __________________________________________________________
Tratamiento con antibióticos o antisépticos u otros de interés: ______________________________________________
Condiciones sanitarias y epidemiológicas: _______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Descripción detallada de las lesiones : __________________________________________________________________
FASE PRE ANALÍTICA
61
30/05/2020
Muestra: Sangre venosa periférica.
Examen: ELISA para VIH
Indicaciones para la toma de la muestra:
– Ayunas
– Bioseguridad
_________________________________________________________________________________________________________
Fecha Indicación: ___________________________________________________________________________________
Fecha toma de muestras : ____________________________________________________________________________
Médico Firma
63. FASE POST ANALÍTICA
REPORTE DE RESULTADOS
RESULTADOS
• Examen: ELISA para VIH
• Muestra: Sangre periférica_______________________
• Resultado: Positivo, en la primera y segunda muestra
• Fecha y hora de la toma de la muestra: _________________
• Fecha y tiempo de análisis: ___________________________
• Nombre y firma del analista: _______________________________
• Condiciones: muestra aparentemente bien tomada y conservada.
• Técnica empleada: _________________________________________
30/05/2020 63
64. FASE POST ANALÍTICA
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Interpretación
La prueba ELISA para VIH es una prueba de screening, tamizaje, cribado, cuya
sensibilidad está en más del 90% y se utiliza como primera prueba en
poblaciones con riesgo bajo de contaminación y no proporciona diagnóstico
definitivo, el manejo obliga a realizar prebas confirmatorias como el Western Blot
y/o la Inmunofluorescencia.
Se cita al paciente para la toma de una nueva muestra que será procesada con la
metodología de inmunofluorescencia.
30/05/2020 64
65. INDICACIÓN U ORDEN DE ANÁLISIS
Paciente: (apellido paterno, materno, nombre) Sexo: M --- F ---. Edad: --------- Estado civil: --------- H.C. --------------
Procedencia: -------- Dirección: ------------------------- Teléfonos: ----------- DNI: ------------ Correo electrónico: -------------------
Aviso en caso de emergencia: ------------------------------
Antecedentes patológicos familiares: ___________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Antecedentes patológicos personales: __________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Impresión diagnóstica: VIH por ELISA ___________________________________________________________________
Tratamiento con antibióticos o antisépticos u otros de interés: ______________________________________________
Condiciones sanitarias y epidemiológicas: _______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Descripción detallada de las lesiones : __________________________________________________________________
FASE PRE ANALÍTICA
65
30/05/2020
Muestra: Sangre venosa periférica.
Examen: Inmunofluorescencia (IFI) para VIH
Indicaciones para la toma de la muestra:
– Ayunas
– Bioseguridad
_________________________________________________________________________________________________________
Fecha Indicación: ___________________________________________________________________________________
Fecha toma de muestras : ____________________________________________________________________________
Médico Firma
67. FASE POST ANALÍTICA
REPORTE DE RESULTADOS
RESULTADOS
• Examen: Inmunofluorescencia (IFA) para VIH
• Muestra: sangre periférica_______________________
• Resultado: Negativo en la primera y segunda muestra
• Fecha y hora de la toma de la muestra: _________________
• Fecha y tiempo de análisis: ___________________________
• Nombre y firma del analista: _______________________________
• Condiciones: muestra aparentemente bien tomada y conservada.
• Técnica empleada: _________________________________________
30/05/2020 67
68. FASE POST ANALÍTICA
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Interpretación
La prueba de Inmunofluoresecencia (IFA) para VIH es una prueba confirmatoria,
cuya especificidad es de más de 99,9% y se utiliza para confirmar un hallazgo
positivo en ELISA.
Se cita al paciente dentro de 6 meses para un control.
El control salió positivo !!!!!!!
30/05/2020 68
69. CASO N° 02
• CST, 28 años, consulta por
ictericia, fiebre y dolor en
el Hipocondrio derecho.
Al examen clínico:
Hepatomegalia. Se
ordenan exámenes
30/05/2020 69
70. INDICACIÓN U ORDEN DE ANÁLISIS
Paciente: (apellido paterno, materno, nombre) Sexo: M --- F ---. Edad: --------- Estado civil: --------- H.C. --------------
Procedencia: -------- Dirección: ------------------------- Teléfonos: ----------- DNI: ------------ Correo electrónico: -------------------
Aviso en caso de emergencia: ------------------------------
Antecedentes patológicos familiares: ___________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Antecedentes patológicos personales: cirugía para banda gástrica con transfusión sanguínea en clínica particular _____
__________________________________________________________________________________________________
Impresión diagnóstica: Hepatitis B _____________________________________________________________________
Tratamiento con antibióticos o antisépticos u otros de interés: ______________________________________________
Condiciones sanitarias y epidemiológicas: _______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________
Descripción detallada de las lesiones : __________________________________________________________________
FASE PRE ANALÍTICA
70
30/05/2020
Muestra: Sangre venosa periférica.
Examen: Perfil de Hepatitis B por quimioluminiscencia
Indicaciones para la toma de la muestra:
– Ayunas
– Bioseguridad
_________________________________________________________________________________________________________
Fecha Indicación: ___________________________________________________________________________________
Fecha toma de muestras : ____________________________________________________________________________
Médico Firma
72. FASE POST ANALÍTICA
REPORTE DE RESULTADOS
RESULTADOS
• Examen: Perfil de Hepatitis B por quimioluminiscencia
• Muestra: sangre periférica_______________________
• Resultado:
• Fecha y hora de la toma de la muestra: _________________
• Fecha y tiempo de análisis: ___________________________
• Nombre y firma del analista: _______________________________
• Condiciones: muestra aparentemente bien tomada y conservada.
• Técnica empleada: _________________________________________
PRUEBA RESULTADO
HBs Ag Positivo
Hbe Ag Positivo
HBc Ac total Positivo
HBc Ac Ig M Positivo
Ac HBs Ag Negativo
30/05/2020 72
73. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Interpretación
La quimioluminiscencia es una metodología muy sensible, utilizada en el diagnóstico de muchas
enfermedades infecciosas, entre ellas la Hepatitis B, midiendo diferentes marcadores de infección, sean Ag o
Ac que nos van a permitir diagnosticar la enfermedad y determinar la fase en que se encuentra.
30/05/2020 73