3. EL VIRUS HPV
- Pertenece a la familia Papovavirus
- Virus ADN, de doble cadena
- Pequeño (50 nm. ) e icosaédrico (20 caras).
- Hay más de 100 tipos con marcadas
diferencias genéticas
4. Papel de los distintos tipos de
HPV
- La mayor parte producen lesions cutáneas:
- Verrugas vulgares
- Verrugas planas
- Epidermodisplasia verruciforme (congénita)
- Enfermedad de Bowen
- Tipos 1 y 2 en palmas y plantas.
- Más de 20 tipos afectan al tracto genital femenino
- En cérvix: 6,11,16,18, 31, 33 35 y 39
5. Técnicas para tipar el HPV son:
• Hibridación in situ de ADN
• Southern Blot (análisis mediante
transferencia por capilaridad de ADN puesto
en funcionamiento por Southern)
• PCR: Reacción en cadena de la Polimerasa.
• Captura híbrida en microplacas
6. Tipos de HPV en lesiones
genitales:
- Condiloma acuminado: 6, 11
- Carcinoma infiltrante: 16, 18, 31
- Lesiones escamosas intraepiteliales
pretumorales y condilomas planos:
16,18,31, 33, 35
- Son virus de alto riesgo: 16 y 18
- Son virus de bajo riesgo: 6 y 11
7. CICLO VITAL DEL HPV
• Infección latente asintomática
• Replicación:
– Coilocitosis
– Disqueratosis viral
• Integración en el genoma celular:
– HSIL
11. COLPOSCOPIA:
Consiste en la visualización y magnificación mediante un
sistema óptico (colposcopio, lupa) del cuello uterino.
Se complementa con una serie de test :
- Aplicación de Acido Acético AA:
- al 3-5 %, produce coagulación de las proteinas celulares en
las zonas de condiloma plano y
- Aparecen como zonas blanquecinas con el colposcopio.
- Test de Schiller o test del lugol:
- Color pardo-caoba en las zonas normales (ricas en
glucógeno)
- Las áreas de condiloma plano o SIL no se tiñen porque
tienen muy poco glucógeno.
16. SOUTHERN BLOT
• Digestión del ADN con enzimas de restricción
• Electroforesis en gel de agarosa.
• Desnaturalización de los fragmentos separados y cortados.
• Transferencia de las cadenas simples a una membrana de
nitrocelulosa o nylon y fijación por medio de calor (800C).
• Prehibridación con sondas de ADN inespecífico
• Marcaje de la sonda con nucleótidos radioactivos
• Hibridación de la sonda y lavado de la membrana para
eliminar el exceso de sonda o aquellas que hayan hibridado
mal.
• Revelado en placa radiográfica.
18. HIBRIDACIÓN IN SITU
Target DNA
Biotin-labelled Probe
Fluorescein-conj ugated
Streptavidin
Propidium
Iodide
Mountingmedium
Containing Propidium Iodide
19.
20. Infección por HPV
-Deteccion de HPV por HCT (“hybrid capture”)
en tubos
La muestra del paciente que potencialmente puede contener el DNA viral es
desnaturalizada (1) y la cadena liberada de DNA es hibridizada (2) en una solución mixta
de RNA, que contiene 14 tipos virales; 5 de bajo riesgo (6,11,42,43 y 44) y 9 de alto
riesgo (16,18,31,33,35,45,51,52,56).
Los híbridos de RNA-DNA son capturados (3) en la superficie de un tubo que contiene
anticuerpos inmovilizados que reconocen específicamente a los híbridos de RNA-DNA
(4). Los híbridos capturados reaccionan con un segundo anticuerpo conjugado con
fosfatasa alcalina y con un substrato quimioluminiscente (5); la luz emitida, es leída por
una máquina (luminómetro). El resultado numérico y/o cuantitativo no está sujeto al
factor subjetivo del examinador; las medidas se expresan en unidades relativas de luz
1 2 3 4 5
ALTERACIONES DE LAS CELULAS EPITELIALES
ESCAMOSAS Dr. Pereira 2003
21. ALTERACIONES DE LAS CELULAS EPITELIALES ESCAMOSAS
Dr. Pereira 2003
ALTERACIONES DE LAS CELULAS EPITELIALES ESCAMOSAS
Dr. Pereira 2003
Infección por HPV
-Deteccion de HPV por HIS (“hybrid capture”)
CAPTURA HIBRIDA I - HCT - TECNICA EN TUBOS.
Es una nueva generación de test de hibridización en solución con
señal de amplificación
Sensibilidad: 70%-96.8%
En conjunto con el Pap, la detección HSIL alcanza un 93-100%
Es positivo cuando las relaciones relativas de luz RLU/PCA (controles
positivos para virus de bajo riesgo para los virus del Grupo I ) (bajo
riesgo) y/o RLU/PCB para los virus del grupo II (alto riesgo) son
iguales o mayores que uno.
CAPTURA HIBRIDA II – HC II – MICROPLACA.
Es 50 veces mas sensible que la Captura Híbrida en tubos y además
agrega la detección de 4 tipos virales de alto riesgo (39,58,59 y 68);
así están representados casi todos los tipos virales oncogénicos. Ha
reemplazado a la técnica en tubos que aún continúa siendo válida
aunque menos sensible.
25. COILOCITOSIS:
• Células escamosas maduras
• Gran cavidad perinuclear, debilmente teñida,
translúcida y de bordes “cortados a pico”
• Alrededor citoplasma denso, eosinófico o basófilo
(aspecto hialino) o anfófilo
• Núcleo de aspecto variable:
• Cromatina borrosa, hipercromático,
agrandado
• Menbrana nuclear no visible (sin nucleolos, ni
inclusiones)
• Binucleación frecuente, a veces un solo núcleo
o multinucleación
26. DISQUERATOSIS VIRAL:
•Queratinización anómala de células
escamosas
•En grupos tridimensionales o aisladas
•Citoplasma orangófilo denso
•Núcleo variable, puede mostrar
cambios coilocíticos o picnosis
38. CLASIFICACIONES DE LESIONES
ESCAMOSAS PRETUMORALES DE
CÉRVIX
REAGAN (1953)
RICHART (1966) BETHESDA (1989)
Displasia leve CIN I LSIL (de bajo grado )
También incluye las
lesiones por VPH
Displasia moderada CIN II
Displasia severa
Carcinoma in situ
CIN III HSIL ( de alto grado )
39. Histología de CIN
según la proporción de epitelio afectado:
• CIN I : 1/3 inferior
• CIN II: ½ inferior (entre 1/3 y 2/3)
• CIN III: más de 2/3, o incluso todo el
grosor.
41. CIN I ó LSIL:
• Células de tamaño y aspecto citoplásmico similar a
las superficiales o intermedias grandes.
• Núcleos aumentados de tamaño
• Relación núcleo citoplasma N/C inferior a 1/3.
• Cromatina finamente granular, de distribución
homogénea, aunque con su densidad aumentada
(núcleos ligeramente hipercromáticos).
42. CIN II (ya HSIL):
• Junto a posibles imágenes de CIN I, o incluso
imágenes de VPH,..
• Células de tamaño intermedias pequeñas y
parabasales grandes.
• Núcleos aumentados de tamaño
• Relación núcleo citoplasma N/C entre 1/3 y 2/3,
aproximadamente ½.
• Núcleos hipercromáticos, habitualmente redondos u
ovales, pero ya pueden ser fusiformes o irregulares.
• Cromatina de distribución homogénea.
• Citoplasma generalmente basófilo, aunque también
podría ser eosinófilo.
43. CIN III ó HSIL:
• Células de aspecto parabasal
• Núcleo aumentado de tamaño
• Relación núcleo citoplasma N/C superior a 2/3.
• Núcleos claramente hipercromáticos, de forma irregular, con
cromatina tosca, granular, no homogénea.
• Disposición de las células aisladas, pero también en grupos
pseudosincitiales de bordes mal definidos.
• Citoplasmas en general pequeños, como un anillo alrededor del
núcleo.
• En las lesiones queratinizantes, los citoplasmas pueden ser
amplios y eosinófilos.
• El aspecto celular puede ser muy variable: células redondeadas,
ovales, fusiformes o irregulares.
55. Lesión Escamosa Intraepitelial
Resumen
-LSIL: Repetir el frotis cada 4-6 meses durante 2 años
-LSIL: Se puede hacer colposcopia y biopsia directa o
curetaje exocervical
-HSIL: Requiere comprobación por colposcopia y
biopsia
PROTOCOLOS PARA LESIONES
INTRAEPITELIALES ESCAMOSAS
Dr. Pereira 2003
64. -ASC es un diagnóstico de exclusión (debe
suponer <5% de todos los diagnósticos y como
máximo 2 ó 3 veces el número de SIL)
-ASC-US: repetir frotis cada 4-6 meses
durante 2 años
-ASC-US inespecífico con inflamación: repetir
a los 2-3 meses
-ASC-US en frotis atróficos postmenopáusicos:
tratar con estrógenos
-ASC-HSIL: actuar como si fuera una Lesión
Intraepitelial
PROTOCOLOS EN ASC-US Y EN ASC-H
Dr. Pereira 2003
PROTOCOLOS EN ASC-US Y EN ASC-H
Dr. Pereira 2003
65. .Carcinoma queratinizante:
- Células escamosas queratinizadas con
formas atípicas (en fibra, renacuajo,..)
- Núcleos:
- Grandes, irregulares
- Sin nucleolo (es raro que lo tengan)
- Picnóticos, a veces.
66. Carcinoma Epidermoide
queratinizante. (Dr. De Agustí)
• Límites citoplásmicos
netos
• Citoplasmas densos,
núcleos con cromatina
atípica
• Células sueltas
• Pleomorfismo:
– formas aberrantes, en
fibra, renacuajo
– A veces sincitios
– Cromatina grosera o en
tinta china
– Citoplasmas
queratinizados
orangófilos o globos
córneos
• Diátesis tumoral
73. .Carcinoma de células grandes:
• Grupos de células tumorales con tendencia a
amontonarse, a veces aisladas (siempre s observa
alguna aislada).
- Células grandes con citoplasma basófilo.
- Relación N/C mucho más alta que en el tipo
queratinizante.
- Núcleos:
- Grandes, con gran anisonucleosis
- Macronucleolos
- Cromatina granular tosca, con bandas gruesas y
espacios claros.
- Membrana nuclear irregular y “engrosada”
77. .Carcinoma de células pequeñas:
– Células sueltas o en grupos (la presencia de
grupos ayuda a diferenciarlo de posibles
linfomas).
- Células de pequeño tamaño y forma
redondeada.
- Citoplasma escaso, basófilo
- Relación N/C altísima, a veces prácticamente no
se ve el citoplasma.
- Núcleo hipercromático.
78. Carcinoma de células pequeñas
(Dr. De Agustí)
• Ausencia de
pleomorfismo:
– Tamaño pequeño,
moldeamiento (a
veces)
– Gran desproporción
N/C
– Cromatina grosera
– A veces sincitios
• Diátesis tumoral