Este documento describe las técnicas de hibridación del ADN y sus aplicaciones. Explica el proceso de desnaturalización del ADN mediante calor o químicos para separar las hebras de ADN, y la posterior hibridación cuando se vuelven a unir las hebras complementarias. También define las sondas de ADN y describe técnicas como Southern blot, Northern blot e hibridación in situ. Finalmente, destaca las ventajas de las técnicas moleculares como la especificidad, sensibilidad y rapidez para la detección

1. HIBRIDACIÓN
DEL ADN
"Año del Bicentenario del Perú: 200 años de
Independencia”
UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS
Curso : MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS II
Asesor : Blga. MSc. ALCEDO ROMERO, Margarita
Alumna(s) : MORI CRISÓSTOMO, Jhuliza
PORTILLO ROBLES, Maria de los Angeles
Tingo Maria – Perú
2021

2. ÁCIDOS NUCLEICOS
Compuestos de
elevado peso
molecular
Polímeros constituidos
por la unión mediante
enlaces químicos de
unidades menores
Nucleótidos

3. Formación
F
U
N
D
A
M
E
N
T
A
L
E
S
TRANSPORTA ENERGÍA
TRANSPORTAN ÁTOMOS
TRANSMITEN LOS
CARACTERES
HEREDITARIOS

4. Diferencias

5. ADN

6. DESNATURALIZACION DEL ADN
Se rompen las fuerzas de
unión entre las dos hebras
del DNA.
AGENTES:
- Calor
- Frio
- Solventes no polares
- Tratamientos
mecánicos
- Altas presiones
- Deshidratación
- pH y presencia de sales La desnaturalización térmica del ADN es un proceso
reversible. Si ha sido solo parcial, cada molécula puede
RENATURALIZARSE mediante una reacción
rápida cuando disminuye la temperatura.

7. HIBRIDACION
La hibridación es un proceso por
el cual se combinan dos cadenas
complementarias simples de
ácidos nucleicos (ADN o ARN)
se permite que formen una
única molécula de doble
cadena por apareamiento
de sus bases
de forma complementaria,
de forma natural.
¿Qué es la HIBRIDACIÓN?
La hibridación era así la
producción de seres híbridos, y
por extensión se denominaba
hibrido a cualquier producto de
elementos de distinta naturaleza.

8. Procedimiento
La hélice de doble cadena (ADN) se separa
mediante un proceso físico (calor) o químico ( con
una base fuerte como la soda caustica NAOH). Esto
rompe los enlaces por puente de hidrogeno que
mantienen unidad las dos hebras del ADN.
Las dos hebras complementarias se separan, el
ADN se desnaturaliza.
Una muestra de cadenas simples (o
desnaturalizadas) se mezcla con otra muestra
de cadenas simples.

9. Parámetros relacionados con la desnaturalización
y la hibridación - La Tm depende del contenido de bases nitrogenadas del ADN y
puede resultar modificada por factores tales como la concentración
de formamida y la fuerza iónica del medio.
- La formamida es un compuesto orgánico que reduce la Tm del ADN
en 0,72 “C por cada 1% contenido en la disolución. Su efecto es debido
a que debilita los puentes de hidrogeno.
- La fuerza iónica del medio modifica grandemente la Tm, que aumenta
al incrementarse la concentración de cationes de Na+.
- En la hibridación, a mayor concentración de estos cationes, mayor es
la velocidad de la reacción. EI sulfato de dextrano también se utiliza
para acelerar la velocidad de hibridación.
Dependencia de Tm
con el contenido en
G + C del ADN.
Los reactivos que
incrementan la
solubilidad de las
bases (como el
etanol) disminuyen
la Tm.

10. ¿Qué es una SONDA?
- Secuencia de ADN o ARN de cadena
simple
- Fragmentos específicos de ADN
susceptibles de hibridación.
- Son secuencias cortas de ADN de una
sola hebra, que son complementarias de
las secuencias de ADN que se quieren
marcar y examinar.
Moléculas
radioactivas
Material
Fluorescente
- Biología Molecular

11. Preparación y detección de una SONDA
Utilizar la secuencia
del ADN mensajero
Sondas sintéticas de
oligonucleótidos
Independientemente del
método de hibridación
Radioisótopos Síntesis y reparación

12. Expresión y la organización de los genes.
APLICACIONES DE LA SONDA
Diagnóstico Microbiológico
Detección de enfermedades congénitas
La técnica resulta muy poderosa y
sensible para el diagnóstico de
microorganismo específicos cuyo
aislamiento es imposible.
Detectar virosis latente
El ADN es bastante estable

13. TECNICAS DE HIBRIDACION
La hibridación puede llevarse a cabo en solución, en soporte sólido o in
situ.
Soporte solido:
El papel de
nitrocelulosa

14. TECNICAS DE HIBRIDACION
El Southerm
blot
Pueden usas membranas de nailon que son menos frágiles,
reutilizables y no requieren estufa. El procedimiento para el
Southem y el Northern blot es el mismo; la única diferencia
consiste en que en el Southem se usa ADN y en el Northem, ARN.
Es la técnica que
se utiliza por
excelencia para
caracterizar
molecularmente a
los virus.

15. TECNICAS DE HIBRIDACION

16. TECNICAS DE HIBRIDACION
Nothern Blot
Northern blot se utiliza para detectar una
secuencia de ARN específica en un muestra de
sangre o de tejido. Las moléculas de ARN en una
muestra se separan por tamaño mediante
electroforesis en gel. Los fragmentos de ARN son
transferidas del gel a la superficie de una
membrana. La membrana se expone a una sonda
de ADN marcada con una etiqueta radiactiva o
química. Si la sonda se une a la membrana,
entonces la secuencia complementaria de ARN
está presente en la muestra.

17. TECNICAS DE HIBRIDACION
Dot blot
Con esta técnica el ácido
nucleico no se hidroliza
mediante enzimas de
restricción ni es sometido a
electroforesis.
La muestra celular del paciente
se aplica directamente al papel
filtro de nitro celulosa. El papel
recibe una serie de tratamientos
y luego se procede a la
hibridación

18. TECNICAS DE HIBRIDACION
In situ
La hibridación in situ puede
hacerse en preparaciones
de cromosomas, secciones
de tejidos congelados,
especímenes citológicos y
secciones de tejidos en
parafina.
La Hibridación fluorescente
in situ (FISH) es para
detectar y localizar una
secuencia específica de ADN
en un cromosoma. La
técnica se basa en exponer
los cromosomas a una
pequeña secuencia de ADN
llamado sonda que tiene
una molécula fluorescente
pegada a ella.

19. Desventaja de las técnicas
convencionales
Los resultados se obtienen de 1 a 3 días
Mucha mano de obra
Estrés en los microorganismos
Métodos MOLECULARES
Especificidad
Sensibilidad
Rapidez
Automatizadas
FISH

20. Diagnóstico pre y post natal
de defectos genéticos
Diagnóstico de
enfermedades hereditarias
Mutaciones Genéticas
Enanismo
Identificar microorganismos
patógenos específicos que
contienen ARN y ADN.
EN LA INDUSTRIA ALIMENTARIA
Métodos microbiológicos
convencionales
ETA
OMS
Métodos
Moleculares
250
enfermedades

21. CONCLUSIÓN
Las técnicas moleculares presentan mayor ventaja frente a
las técnicas convencionales de cultivo para la detección e
identificación de microorganismos patógenos presentes en
alimentos, son más específicos, sensibles y se realizan en
menor tiempo. Por lo cual han ido en aumento en los últimos
años, permitiendo una mejor detección e identificación de
los microorganismos patógenos en alimentos.

22. Revisión Bibliográfica
ANGARITA M. (2017). Técnicas de Biología Molecular en el desarrollo de la investigación. Haban ciencia
médica.
ENCISO Y. & Itzigueri A. (2020). Aplicaciones de las técnicas moleculares en inocuidad alimentaria.
GARCIA M. 1990. Hibridacion de acidos nucleicos: fundamentos y aplicaciones. Bol Of Sanit Panam 109(3).
LAWRENCE C. & Brody D. (2013). Sondas – National Human Genome Research Institute.
National Human Genome Research Institute. Hibridacion. [en linea] https://www.genome.gov/es/genetics-
glossary/Hibridacion. recopilado 10/10/2021.
National Human Genome Research Institute. Doble hélice. [en linea] https://www.genome.gov/es/genetics-
glossary/Doble-hélice. Recopilado 9/10/2021.
National Human Genome Research Institute. Hibridacion fluorescente in situ (FISH). [en linea]
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Hibridacion-fluorescente-in-situ. Recopilado 10/10/2021.
ORGANISMO INTERNACIONAL DE ENERGÍA ATÓMICA. (2007). Radiosótopos.
PALOMINO C. & Gonzalez Y. (2014). Técnicas moleculares para la detección e identificación de patógenos en
alimentos: ventajas y limitaciones.
RAMIREZ N. 2003. Reaccion en cadena de polimerasa. Universidad Veracruzana. Revista Medica.
RODRIGUEZ R. & Suescún G. (2013). Aplicaciones e inconvenientes de la técnica Hibridación in situ
fluorescente (FISH) en la identificación de microorganismos.
SERRANO A. (2012). Ácidos nucleicos – Bioquímica. [En línea] (https://es.slideshare.net/Xideral/curso-de-
bioquimica-10acnucleicos). Recopilado 9/10/2021.

23. GRACIAS