Este documento describe las propiedades y estudios de Lepidium meyenii (Maca). La Maca es una planta herbácea con raíz tuberosa que crece en los Andes peruanos. Contiene alcaloides como la Macaina que pueden afectar el sistema nervioso central. Estudios muestran que la Maca estimula la maduración de folículos y espermatozoides en ratas. También puede mejorar la calidad del líquido seminal en humanos. Finalmente, el documento detalla estudios que muestran la actividad antiviral de extract

1. Lepidium meyenii (Maca)
PROTEÓMICA
PROTEÓMICA
JUANA DEL VALLE MENDOZA
UNIVERSITAT DE BARCELONA

2. Lepidium meyenii (maca)
- Plante herbácea, anual, raíz tuberosa.
- Genero Lepidium: 13 especies.
L i L idi ii l
- La especie Lepidium meyenii se encuentra en las
zonas andinas de diferentes países de Sudamérica.
Andes centrales Perú (4000-4500 m.)
- Cuatro variedades (color de la raíz)
1. Variedad amarillo - cremosa.
2. Variedad morada con franjas amarillas.
3. Variedad morada.
4. Variedad negra.
J. Agric. Food. Chem. 2005

3. Lepidium meyenii (maca)
Composición química Maca
tubérculo
% í
Energía (Kcal) 314
Agua (gr) 15,3
- Consumen cocidas: 13 a 16 % de proteína y son
ricas en aminoácidos esenciales.
Al l id s (M í 1 2 3 4) Rf 0 680 0 346
Proteína (gr) 11,8
Grasas (gr) 1,6
C b hid t ( ) 66 4
- Alcaloides (Macaína 1,2,3 y 4), Rf: 0.680, 0.346,
0.198, 0.851, respectivamente. Fx sistema nervioso
central. “Pueden ser usados como fármacos”
Carbohidrato (g) 66,4
Ceniza (gr) 5,0
Fósforo (mg) 183
- Principios activos : desconocidos
Tiamina (mg) 0,20
Riboflavina (mg) 0,35
Ácido ascórbico reducido 2,5
(mg)
Calcio (mg) 247
Hierro (mg) 14,7
Rf: movilidad electroforética

4. Usos tradicionales: Lepidium meyenii (maca)
- Como alimento: raíz que ha sido secada previamente y luego cocida.
Las hojas son consumidas como complemento de ensaladas.
Como licor: se maceran las raíces cocida y se licúan preparando un cóctel
- Como licor: se maceran las raíces cocida y se licúan, preparando un cóctel.
- Reconstituyente: reconstituyente prodigioso.
- Antirraquítico.
- Antianémico
Antianémico
- Para combatir las alteraciones en el ciclo menstrual y/o hormonales.
- En la Etnoveterinaria: se le administra a los animales para aumentar su fertilidad y
ponerlos en estro.

5. Estudios clínicos-Lepidium meyenii (maca)
Estudios histológicos en ratas:
- Estimulación de la maduración de los folículos (hembras).
- Aumento en la cantidad de espermatozoides, en los tubos seminíferos y aumento de mitosis
y espermatogonia.
y espermatogonia.
“Confirmando así científicamente la creencia de la población andina sobre su bondad medicinal
l d ll h l”
en el desarrollo humano y animal”
Alcaloides
Calcio
Fierro
anemia y como estimulantes en la formación de glóbulos rojos
coadyuvantes - la leucemia, SIDA y enf. referentes al sistema inmune
(Chacón 1997)
Fierro (Chacón, 1997)

6. Estudios clínicos-Lepidium meyenii (maca)
E d h f d bl l d ( l )
Estudio en humanos, Maca en forma de tabletas gelatinizadas (Maca La Molina),
mejora en la calidad del líquido seminal.
Cabe señalar que los estudios deben realizarse de forma seria.
Informar al consumidor que esta planta no es un afrodisiaco.
Tiene más propiedades y es muy rica en sus compuestos.
p p y y p
Hay mucho que investigar sobre ella.

7. PROTEÓMICA
- Genómica funcional a nivel de proteínas.
- Es la ciencia que correlaciona las proteínas con sus genes.
E t di l j t l t d t í d bt d
- Estudia el conjunto completo de proteínas que se pueden obtener de un genoma.
- La proteómica intenta resolver preguntas como:
¿Qué función tienen las proteínas?,
¿Qué tipo de modificaciones postransduccionales sufren las proteínas y
á ó
cuál es su función?,
¿Cómo varían las proteínas de una célula enfrentada a distintas condiciones
bi t l ?
ambientales?.
¿ Determinar interacción de proteínas?

8. Obtención de Alcaloides (Macaína 1,2,3 y 4)
los alcaloides
(vacuolas y es preciso
romper la célula para
romper la célula para
que se liberen)
Agua acidulada, se puede purificar el extracto
añadiendo un alcalí.
Disolventes orgánicos polares, se estrae con alcohol
70º acidulado, extrae impurezas (pigmentos,..)
Disolventes orgánicos apolares, es el más utilizado
D so nt s orgán cos apo ar s, s más ut za o
(amoniaco, carbonato sódico, bicarbonato sódic).
Maceración
cloroformo, cloroformo más eter,
cloroformo más isopropanol
Purificación extracto
Purificación extracto

9. Alcaloides (Macaína 1,2,3 y 4), Rf: 0.680, 0.346, 0.198, 0.851, respectivamente
Obtención AA
(métodos bioquímicos)
(métodos bioquímicos)
Rf: movilidad electroforética

10. Alcaloides (Macaína 1,2,3 y 4), Rf: 0.680, 0.346, 0.198, 0.851, respectivamente
WM WM
Rf: movilidad electroforética

11. MALDI-TOF
ionización suave,
espectrometría de masas
p
Biopolímeros
(proteinas, los péptidos y
azúcares)

13. Antiviral activity of Lepidium meyenii (Maca) against
fl
Human Influenza virus.
Del Valle, Juana1; Del Valle, Luis J.4*; Alzamora, Libertad3 and Pumarola, Tomás2
1 Medicine Faculty, Applied-Sciences Private University (UPC), Lima-1, Peru.
2 Microbiology Unit, Department of Microbiology and Parasitology, Medical School, University of Barcelona,
St/ Casanova 143 E 08036 Barcelona Spain
St/ Casanova 143, E-08036 Barcelona, Spain.
3 Faculty of Biological Sciences, Mayor National University of San Marcos (UNMSM), Avda. Venezuela s/n,
Lima-1, Peru.
4 Department of Agri-Food Engineering and Biotechnology, ESAB, Technical University of Catalonia (UPC),
p g g g gy y
Avda. Canal Olimpic 15, E-08860 Castelldefels, Spain.

14. RT-PCR multiplex nested
► RT-PCR multiplex nested para Influenza A, B y C.
VGA
VGB
VGC
VRSA
VRSB
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FOTO GEL

15. ESTAMOS PREPARADOS PARA UNA PANDEMIA ?
Aparición de nuevos subtipos de gripe A
(mutación antigénica)
HA: proteína Hemaglutinina
NA: proteína Neuraminidasa
Pandemias durante el siglo XX
Pandemias durante el siglo XX
1918-19: La "gripe española" [A (H1N1)],
500 000 muertes (USA)
50 millones persona (mundo)
50 millones persona (mundo)
1957-58: La "gripe asiática" [A (H2N2)],
70 000 muertes (USA)
1968-69: La "gripe de Hong Kong" [A (H3N2)]
34 000 muertes (USA)
actualmente circulan
1997 : Hong-Kong " [A (H5N2)] , futura pandemia de gripe humana

16. VIGILANCIA DE INFLUENZA Y OTROS
VIRUS RESPIRATORIOS EN PERÚ

17. Objetivos
Estudiar la actividad antiviral de Lepidium
Estudiar la actividad antiviral de Lepidium
meyenii (Maca) en virus respiratorios

18. ENSAYOS DE ACTIVIDAD ANTIVIRAL

19. ENSAYOS DE ACTIVIDAD ANTIVIRAL
1.- Citotoxicidad del extracto acuoso (CC50) (Método
cuantitativo MTT)
cuantitativo MTT).
2.- Titulación del Virus.
3.- Ensayo de la actividad antiviral (CE50).

20. Citotoxicidad del extracto acuoso (CC50)
(Método cuantitativo MTT)
- Basado en el cambio de color al reducirse MTT (3-4 5 dimethylthiazol-2-y 1-
(Método cuantitativo MTT)
- Basado en el cambio de color al reducirse MTT (3-4, 5 dimethylthiazol-2-y 1-
2.5 diphenyltetrazolium bromide) por acción de enzimas mitocondriales.
- 0. 5 x105 cél/pocillo.
Procedimiento
- Add diferentes concentraciones extracto.
- Incubar a 37ºC durante 5- 7 dias.
- Lavar cél. con PBS 1X
+
- 100
20 80
40
Maca
(µg/ml)
- Adicionar 20-50 µg/ml MTT.
- Incubar 4 horas a 37ºC.
- Lavar las células con PBS 1X
(µg/ml)
- Adicionar 200 µl DMSO.
- Incubar 15 mín.
- Leer O.D. 450 – 620 nm.

21. Citotoxicidad del extracto acuoso (CC50)
(Método cuantitativo MTT)
(Método cuantitativo MTT)
Líneas celulares: MDCK (influenza)
- Líneas celulares: MDCK (influenza)
120
80
100
120
iabilit
20
40
60
%
Cell
vi
0
20
1
0
2
0
4
0
5
0
1
0
0
2
0
0
4
0
0
6
0
0
8
0
0
1
0
0
0
Dose(ug/ml)
Diferentes concentraciones del extracto mantienen
Dose(ug/ml)
la viabilidad de la célula
CC50 is the toxic concentration in µM required to reduce the number of viable cells by 50%.

22. Titulación del Virus
1 Evaluar el efecto citopático (CPE)
1.- Evaluar el efecto citopático (CPE).
Concentración de la muestra necesaria para inhibir el 50% del CEP
causado por el virus.
2.- Cuantificación de Unidades Formadoras de Colonias (PFU).
Determinación de la viabilidad celular (Hitoshi y otros, 1991) por el
( y , ) p
método del rojo neutro.
3 - Ensayo de viabilidad celular (MTT)
3. Ensayo de viabilidad celular (MTT).
Cuantificación de la viabilidad celular por el método del MTT (3-4, 5
dimethylthiazol-2-y 1-2.5 diphenyltetrazolium bromide)

23. Titulación del Virus
1.- Evaluar el efecto citopático (CPE).
2.- Cuantificación de Unidades Formadoras de Colonias (PFU).
3.- Ensayo de viabilidad celular (MTT).
10-1
-
i
10-2 10-3
10-7
...............
Determinación de la concentración requerida del virus para causar cambios
i ibl l 50% él l i t t (CPE)
virus
visibles en el 50% células intactas (CPE).

24. Titulación del Virus
0
0

25. Ensayo de la actividad antiviral (CE50)
Ensayo de la actividad antiviral (CE50)
Procedimiento
- Sembrar la línea celular en placas de 24
p
pocillos.
- Add diferentes concentraciones del extracto
- Incubar 90 min. a 37ºC.
- Add suspensión viral (X ml).
- Incubar durante 5-7 días.
- Adicionar 20-50 µg/ml MTT.
+
-
virus
80
10 40
20 Maca
(µg/ml)
- Incubar 4 horas a 37ºC.
- Lavar las células con PBS 1X
- Adicionar 200 µl DMSO.
- Incubar 15 mín.
- Leer O.D. 450 – 620 nm.

26. Actividad antiviral de la maca frente VGA
A
100
40
60
80
100
ll
viability
(%)
Maca (µg/ml)
0
20
control 0 10 20 40 80
Ce
Maca (µg/ml)
FLU-A virus
B
Maca (µg/ml)
FLU-A virus
100
800
800
20
0 10 40 80
-
(µg )

27. Actividad antiviral de la maca frente VGB
A
100
40
60
80
ell
viability
(%) 0
20
0 10 20 40 80
Ce
Maca (µg/ml) + FLU-B virus
B
Maca (µg/ml)
FLU-B virus
-
0 10 20 40 80
800

28. Table 1
IC ( / l)
Vi CC ( / l)
Antiviral activities of maca extract against influenza viruses
IC50 (µg/ml)
Virus CC50 (µg/ml) TI (CC50/IC50)
FLU A 5 4 850 157 4
FLU B
FLU-A
7 69
5, 4 850
850
157, 4
110 5
FLU-B 7, 69
IC is the inhibitory concentration in µM required to reduce viral replication by 50%
850 110, 5
IC50 is the inhibitory concentration in µM required to reduce viral replication by 50%.
CC50 is the toxic concentration in µM required to reduce the number of viable cells by 50%.
Therapeutic index (TI50) : (IC50/CC50)
Considera la efectividad de un antiviral, SI >10,18

29. Ensayo de virucidad extracelular
Ensayo de virucidad extracelular
D t i l id d d l t t d i ti di t t
- Determinar la capacidad del extracto acuoso de inactivar directamente
las partículas virales.
Procedimiento
- Mezclar 2x virus y 2x extracto en
+
- 200
40 160
80 Maca
(µg/ml)
y
medio de cultivo.
- Incubar 30 min. a 37ºC.
- Adicionar 50 µl de la mezcla a la monocapa de
2 X virus
células.
- Incubar a 37ºC durante 5- 7 días.
- Determinar la actividad viral por el método del
rojo neutro
rojo neutro.
- Determinación CE 50.

30. Actividad antiviral de las Fracciones de Maca
HxF= fracción de hexano
DCF= fracción de diclorometano
DCF= fracción de diclorometano
EAF= fracción de etil acetato
CE= extracto crudo
CE extracto crudo
WF= fracción acuosa

32. Actividad antiviral Fracciones de Maca
Actividad antiviral Fracciones de Maca
Procedimiento
- Sembrar la línea celular en placas de 24
p
pocillos.
- Add diferentes fracciones obtenidas HPLC.
- Incubar 90 min. a 37ºC.
- Add suspensión viral (X ml).
- Adicionar 20-50 µg/ml MTT.
- Incubar 4 horas a 37ºC.
- Lavar las células con PBS 1X
- Adicionar 200 µl DMSO.
- Incubar 15 mín.
+
- CE WF
HxF EAF
DCF
Fracciones Maca (µg/ml)
- Leer O.D. 450 – 620 nm. Fracciones Maca (µg/ml)
+ Virus

33. C l i
Conclusiones
1.- Las diferentes concentraciones utilizadas del extracto de
Maca no dañan la viabilidad celular.
2.- Los ensayos antivirales contra VGA y VGB muestran que
la Maca tiene propiedades antivirales
la Maca tiene propiedades antivirales.

34. ENTIDADES COLABORADORAS
UNIVERSITAT DE BARCELONA