Bacterias

OBJETIVO DE LA UNIDAD Al finalizar la unidad el alumno será capaz de aplicar el conocimiento acerca de las características estructurales, morfológicas, bioquímicas, genéticas, patogénicas y taxonómicas de las bacterias, para apoyar el diagnóstico y orientar la terapéutica.

PROCARIOTAS 1.Su material genético (DNA) no está rodeado de una membrana. 2. Carecen de organelos membranosos . 3. Su DNA no está asociado a proteínas de la clase de las histonas 4. Sus paredes celulares contienen casi siempre péptido glucano , un polisacárido complejo. 5. Suelen dividirse por fisión binaria . En este proceso se copia el DNA y la célula se divide en dos.

BACTERIOLOGÍA. Subdisciplina de la Microbiología que se encarga del estudio de las bacterias.

BACTERIOLOGÍA Louis Pasteur. Robert Koch Pasteurización. Vacuna contra el antrax. Postulados de Koch. Mycobacterias.

BACTERIAS DE INTERÉS EN MEDICINA VETERINARIA. Actinobacillus pleuropneumoniae. Pasteurella multocida. Mycoplasma hyopneumoniae Mannheimia haemolytica Mycobacterium bovis. Escherichia coli en aves . Salmonella spp. Escherichia coli Lawsonia intracellularis Campylobacter spp. Clostridium spp.

BACTERIAS DE INTERÉS EN SALUD PÚBLICA Salmonella spp. Campylobacter spp. Serotipos de Escherichia coli. Brucella spp. Mycobacterium spp. Leptospira spp. Bacillus spp

BACTERIAS DE INTERÉS EN LA INDUSTRIA. ALIMENTOS: LACTOBACILLUS (YOGHURT, QUESO, CREMA, MANTEQUILLA). ANTIBIÓTICOS: TETRACICLINA, ESTREPTOMICINA. BIOTECNOLOGÍA: HORMONAS ( INSULINA), PROTEÍNAS (INTERFERON) TRANSGÉNICOS PCR: Thermus aquaticus.

MORFOLOGÍA BACTERIANA PEQUEÑAS ( 1 µ m). IDENTIFICACIÓN MICROSCÓPICA BASADA EN: FORMA DE LA CÉLULA Y DE AGRUPACIÓN, REACCIÓN DE GRAM, MOTILIDAD.

MORFOLOGIA BACTERIANA COCOS: FORMAS REDONDAS. Ejem: Staphylococcus spp, Streptococcus spp.

COCOS SE AGRUPAN EN PARES, TÉTRADAS, CADENAS Y RACIMOS.

MORFOLOGIA BACTERIANA BACILOS: FORMAS ALARGADAS EN FORMA DE BASTON. Ejem: Escherichia coli, Bacillus spp.

MORFOLOGÍA BACTERIANA ESPIRALES: EN FORMA DE RESORTE. Ejem: Leptospira spp, Campylobacter spp. 87

FLAGELOS APENDICES HELICOIDALES FILAMENTOSOS. COMPUESTOS DE SUBUNIDADES DE UNA PROTEINA DENOMINADA FLAGELINA. SE ORIGINAN DE UN CUERPO BASAL

FLAGELOS MOVILIDAD DE LAS BACTERIAS. COMUNES EN LAS ENTEROBACTERIAS SE CONOCEN COMO ANTIGENOS H.

FLAGELOS POR EL NUMERO Y LOCALIZACIÓN SE CLASIFICAN COMO: MONOTRICOS O POLARES, IOFOTRICOS Y PERITRICOS.

PILIS O FIMBRIAS FILAMENTOS RECTOS, MAS DELGADOS Y CORTOS QUE LOS FLAGELOS, RODEAN LA CELULA BACTERIANA. COMUNES EN BACTERIAS GRAM NEGATIVAS SE CONOCEN COMO ANTIGENO K (F)

PILIS O FIMBRIAS COMPUESTOS DE UNA PROTEINA LLAMADA PILINA SU FUNCION ES LA ADHESION A OTRAS CELULAS. RELACIONADAS CON LA PATOGENICIDAD (E. coli K88, K99)

CAPSULA CAPA DE POLIMEROS SIMPLES COMPUESTOS POR POLISACARIDOS ( Streptococcus spp ) POLIPÉPTIDOS ( Bacillus anthracis ) O COMPLEJOS GLUCOPROTEICOS. PROTEGE A LAS BACTERIAS CONTRA LA FAGOCITOSIS.

PARED CELULAR DA FORMA Y PROTECCIÓN A LA CELULA BACTERIANA. PERMITE CLASIFICAR A LAS BACTERIAS EN GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS.

PARED CELULAR: BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

MEMBRANA PLASMÁTICA FORMADA POR PROTEINAS Y FOSFOLÍPIDOS (MODELO DEL MOSAICO FLUIDO) TRANSPORTE, BIOSINTESIS Y GENERACIÓN DE ENERGÍA.

ESTRUCTURAS CITOPLASMÁTICAS . CROMOSOMA PROCARIOTICO: UNA MOLECULA CIRCULAR DE DNA. RIBOSOMAS: PEQUEÑOS (70S). INCLUSIONES: RESERVA DE MATERIALES (GLUCOGENO, SULFURO, PIGMENTOS, ENZIMAS).

ACIDOS NUCLEICOS BACTERIANOS. CROMOSOMA PROCARIOTICO: UNA MOLECULA CIRCULAR DE DNA CARENTE DE HISTONAS. DNA EXTRACROMOSOMAL : PLASMIDOS REPLICACIÓN DEL DNA SIMILAR QUE EN CÉLULAS EUCARIOTAS

ENDOSPORAS ESTRUCTURAS RESISTENTES A ALTAS TEMPERATURAS, BAJA HUMEDAD, RADIACIONES Y AGENTES QUIMICOS. FORMAS DE VIDA LATENTE FRECUENTES EN BACTERIAS DEL GENERO Bacillus spp y Clostridium spp 85

ENDOSPORAS SEGÚN SU LOCALIZACION: TERMINALES SUBTERMINALES CENTRALES

Formas de nutrición de los organismos. Fotosintéticos: utilizan la luz solar como fuente de energía. Utilizan CO 2 como fuente de carbono. Autotróficos: Utilizan moléculas inorgánicas como fuente de energía. Utilizan CO 2 como fuente de carbono.

Formas de nutrición de los organismos. Heterótrofos: No usan luz, componentes inorgánicos, CO 2. Utilizan moléculas orgánicas ( azúcares, aminoácidos, ácidos grasos y ácidos nucleicos), como fuente de energía y carbono. Todos los microorganismos patógenos.

Microorganismos Fotosintéticos Autótrofos Heterótrofos Saprofitos Parásitos estrictos

Nutrientes esenciales. Carbono. Fuente de energía. Nitrógeno. Fósforo. Sulfuro Sodio Potasio Hierro

NUTRICIÓN BACTERIANA FUENTES DE CARBONO. FUENTE DE ENERGÍA METABOLISMO DE AZUCARES Y AMINOÁCIDOS FUENTE DE NITRÓGENO. PROTEÍNAS, ÁCIDOS NUCLEICOS. FUENTES INORGÁNICAS: IONES AMONIO O NITRATO.

NUTRICIÓN BACTERIANA IONES INORGÁNICOS. FOSFATO COFACTORES DE ENZIMAS Mg, K, Na Ca.

NUTRICIÓN BACTERIANA CAPTACIÓN DE HIERRO. COMPONENTE DE LA CATALASA, LOS CITOCROMOS, PROTEÍNAS Y ENZIMAS. CAPTACIÓN DE HIERRO A TRAVÉS DE SIDERÓFOROS (CATECOLES)

NUTRICIÓN BACTERIANA METABOLITOS ESENCIALES AMINOÁCIDOS VITAMINAS PURINAS PIRIMIDINAS

TEMPERATURA MESÓFILAS : 35 - 37 ºC. PSICRÓFILAS: 0 ºC O MENOS TERMÓFILAS: 45-70 ºC O MÁS.

CONCETRACIÓN DE HIDRÓGENO. NEUTROS O LIGERAMENTE ALCALINOS (pH: 7.0 – 7.5). ACIDOS ( Ph: 1.0): BACTERIAS DEL TRACTO GASTROINTESTINAL.

OXÍGENO Y POTENCIAL REDOX: PERÓXIDO Y SUPER ÓXIDO + AGUA= RADICAL LIBRE HIDROXILO (TÓXICO). ELIMINACIÓN DEL HIDROXILO: CATALASA, SUPERÓXIDO DISMUTASA Y LAS PEROXIDASAS.

CONCENTRACIÓN DE OXÍGENO. AEROBIOS OBLIGADOS: MYCOBACTERIUM. FACULTATIVOS: ESTEROBACTERIAS Y STAPHYLOCOCCUS. MICROAEROFÍLICOS: CAMPYLOBACTER. ANAEROBIOS OBLIGADOS: CLOSTRIDIUM, FUSOBACTERIUM

¿COMO CRECE UNA BACTERIA ? CRECIMIENTO = INCREMENTO EN EL NÚMERO DE CÉLULAS POR FISIÓN BINARIA. NUTRIENTES NECESARIOS EN CANTIDADES SUFICIENTES. CONDICIONES MEDIO AMBIENTE ( TEMPERATURA, pH, OXÍGENO

FISIÓN BINARIA Se copia el material genético (DNA) y se deposita en los extremos de la célula. Proteína de fisión se ensamblan en forma circular al centro de la célula. El citoplasma se divide en dos sin afectar al DNA. En muchas bacterias la pared celular es sintetizada.

FISIÓN BINARIA TIEMPO GENERACIONAL. E. coli = 20 min. Mycobacterium = 24 hrs.

UN CASO… TIEMPO 7:20 7:40 8:00 8:20 8:40 9:00 9:20 No DE BACTERIAS 1 ?

ESTACIONARIO MUERTE EXPONENCIAL LAG TIEMPO (HORAS) LOG CELULAS VIABLES 89B

CARACTERÍSTICAS DEL GENOMA BACTERIANO.

INTRODUCCIÓN SU MATERIAL GENÉTICO NO ESTÁ RODEADO POR UNA MEMBRANA. POSEEN NUCLEOIDE

TIPOS DE MATERIAL GENÉTICO EN BACTERIAS. DNA CROMOSOMAL. DNA EXTRACROMOSOMAL (PLÁSMIDOS). TRANSPOSONES

DNA CROMOSOMAL. MOLÉCULA CIRCULAR, DOBLE CADENA, CARENTE DE HISTONAS, SUPERENROLLADO. DNA = EUCARIOTAS.

DUPLICACIÓN DEL ADN SIMILAR A LAS EUCARIOTAS. OCURRE EN CUALQUIER FASE DEL CICLO CELULAR. LOS PLÁSMIDOS SE REPLICAN DE MANERA INDEPENDIENTE AL CROMOSOMA.

CROMOSOMA BACTERIANO Escherichia coli 4.7 millones de pares de bases. Puede sintetizar 1700 enzimas. Tiene genes para 1700 ARNm.

PLÁSMIDOS DOBLE CADENA CIRCULAR DE DNA CON CAPACIDAD DE AUTOREPLICACIÓN. NO CODIFICAN PARA FUNCIONES ESENCIALES POSEE INFORMACIÓN PARA RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS O CAPACIDAD DE CONJUGACIÓN ( FACTOR F).

MUTACIÓN. Cambio heredable en la secuencia de bases de los ácidos nucleicos que constituyen el genoma de un organismo, se deben fundamentalmente a errores en los procesos de replicación del ADN.

MECANISMOS DE VARIABILIDAD GENÉTICA

TRANSFORMACIÓN. DNA CROMOSOMAL LIBRE QUE ES LIBERADO DURANTE LA LISIS DE UNA BACTERIA. EL DNA LIBRE ES CAPTADO E INSERTADO DENTRO DEL GENOMA DE OTRA BACTERIA (COMPETENTE). 92

TRANSDUCCIÓN. DNA CROMOSOMAL EMPACADO DENTRO DE UN BACTERIOFAGO. EL BACTERIOFAGO INFECTA UNA BACTERIA Y LE TRANSFIERE EL MATERIAL GENÉTICO BACTERIANO QUE CONTIENE. 92A

CONJUGACIÓN CONTACTO ENTRE UNA CELULA DONADORA Y UNA RECEPTORA. TRANFERENCIA DE MATERIAL GENÉTICO CROMOSOMAL O EXTRACROMOSOMAL A TRAVÉS DE UN PILI SEXUAL 92B

PRODUCCIÓN DE INSULINA RECOMBINANTE

MECANISMOS DE RESISTENCIA BACTERIANA A LOS ANTIMICROBIANOS.

¿QUE ES UN ANTIBIÓTICO ? Sustancias producidas por microorganismos que matan o inhiben a otros microorganismos.

¿QUÉ ES UN ANTIMICROBIANO? CUALQUIER SUSTANCIA DE ORIGEN NATURAL, SINTÉTICO O SEMISINTÉTICO, QUE EN BAJAS CONCENTRACIONES INHIBE EL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS CAUSANDO UN NULO O MÍNIMO DAÑO AL HUÉSPED.

COMO SE USAN LOS ANTIMICROBIANOS EN M.V. TERAPEÚTICOS. PROFILÁCTICOS PROMOTORES DEL CRECIMIENTO

RESISTENCIA ANTIMICROBIANA: HABILIDAD DE UN MICROORGANISMO PARA CONTINUAR MULTIPLICÁNDOSE O PERSISTIR EN PRESENCIA DE UN AGENTE ANTIMICROBIANO A NIVELES TERAPEÚTICOS.

¿POR QUÉ LAS BACTERIAS SON RESISTENTES A LOS ANTIMICROBIANOS? PRESIÓN SELECTIVA ASOCIADA AL USO DE LOS ANTIMCIROBIANOS. DOSIS INADECAUDAS. TRATAMIENTOS CON DURACIÓN INADECUADA. AUTOMEDICACIÓN.

MECANISMOS DE RESISTENCIA RESISTENCIA NATURAL: MECANISMOS DETERMINADOS GENÉTICAMENTE, QUE NO SE ASOCIAN AL USO DE LOS ANTIMICROBIANOS. Pseudomona aeruginosa RESISTENTE A LAS BENCILPENICILINAS Y AL SULFAMETOXAZOL + TRIMETOPRIM

MECANISMOS DE RESISTENCIA RESISTENCIA ADQUIRIDA : CAMBIOS PUNTUALES EN EL DNA (MUTACIÓN) O POR LA ADQUSICIÓN DE NUEVO MATERIAL GENÉTICO ( PLÁSMIDOS, TRANSPOSONES) QUE PERMITEN A LAS BACTERIAS SOBREVIVIR A LA ACCIÓN DE UN ANTIMICROBIANO.

MECANISMOS DE RESISTENCIA INACTIVACIÓN DEL ANTIMICROBIANO. ALTERACIÓN DEL SITIO BLANCO. ALTERACIÓN DE LA PERMEABILIDAD (TRANSPORTE). LOS TRES PUEDEN OCURRIR DE MANERA SIMULTÁNEA.

DESTRUCCIÓN O INACTIVACIÓN DEL ANTIMICROBIANO. PRODUCCIÓN DE ENZIMAS QUE DESTRUYEN EL ANTIMICROBIANO. BETALACTAMASAS, ERITROMICINA ESTERASA, ENZIMAS MODIFICADORAS DE LINCOSAMIDAS, CLORANFENICOL Y AMINOGLUCÓCIDOS.

BETA LACTAMASAS. ANTIBIÓTICOS BETA LACTÁMICOS: PENICILINA, OXACILINA, CEFALOSPORINAS. MODO DE ACCIÓN: INHIBEN LA ENZIMA D ALANIL D ALANIN CARBOXIPEPTIDASA (PBPS) SÍNTESIS DE PARED CELULAR. BETALACTAMASA: HIDROLISA EL ENLACE AMIDA DEL ANILLO PENICILÁNICO

INACTIVACIÓN DEL ANTIMICROBIANO

ALTERACIÓN DEL SITIO BLANCO. ALTERACIÓN DE LAS PROTEINAS DE UNIÓN DEL ANTIMICROBANO (SITIO BLANCO). PARED CELULAR. RIBOSOMAS (TET, ERY, AMINOGLUCÓCIDOS). DNA GIRASA: QUINOLONAS.

BARRERAS DE PERMEABILIDAD (TRANSPORTE) PROTEÍNAS DE MEMBRANA EXTERNA (PORINAS): DISMINUCIÓN DEL INGRESO. TRANSPORTE ACTIVO, INCREMENTO DE LA SALIDA ( BOMBAS DE EFLUJO)

MECANISMOS DE PATOGÉNESIS BACTERIANA

ENFERMEDADES CAUSADAS POR BACTERIAS: UN EJEMPLO. INGLATERRA 1665. PESTE NEGRA (GRAN PLAGA, PESTE BUBÓNICA). 100,000 MUERTOS.

LA GRAN PLAGA En 1849 durante una epidemia en Hong Kong Alexandre Yersin y Shibasaburo Kitasato (Tokio), aislaron al bacilo Pasteurella pestis (ahora Yersinia pestis ) responsable de la peste bubónica. 2001. Genoma completo. Bioterrorismo.

ESTUDIOS DE PATOGENICIDAD Robert Koch obtuvo en 1905 el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Padre de la bacteriología moderna. Demostró que las enfermedades infecciosas están provocadas por microorganismos y elaboró técnicas para aislar e identificar bacterias patógenas

POSTULADOS DE KOCH 1.- El agente siempre deberá ser encontrado en los animales enfermos pero no en los sanos. 2.- El agente deberá ser aislado de los animales enfermos y poder aislarse en cultivo puro. 3.- El agente aislado en cultivo puro deberá iniciar un proceso infeccioso cuando sea inoculado en un animal susceptible. 4. El agente deberá ser aislado de nuevo del animal infectado de manera experimental.

PATOGENICIDAD HABILIDAD PARA PRODUCIR ENFERMEDAD EN UN HUÉSPED . PATÓGENO.

VIRULENCIA GRADO DE PATOGENICIDAD .

FACTORES DE VIRULENCIA CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS, BIOQUÍMICAS O ESTRUCTURALES QUE LE PERMITEN A UN MICROORGANISMO PRODUCIR ENFERMEDAD EN UN HUÉSPED.

INTRODUCCIÓN LAS BACTERIAS CAUSAN DAÑO AL HUESPED POR DOS MECANISMOS: INVASIVIDAD TOXIGÉNESIS

INVASIVIDAD: COLONIZACIÓN (ADHERENCIA Y MULTIPLICACIÓN). EVASIÓN DE LOS MECANISMOS DE DEFENSA DEL HUESPED. PRODUCCIÓN DE SUSTANCIAS QUE FACILITAN LA INVASIÓN

INVASIVIDAD COLONIZACIÓN: ESTABLECIMIENTO DEL PATÓGENO EN LOS TEJIDOS DEL HUESPED (TGI, TGU, TR, CONJUNTIVA). ADHERENCIA: RECEPTORES Y ADHESINAS

INVASIVIDAD FACTORES DE ADHERENCIA: Fimbrias o pilis Cápsula LPS Acidos teicoicos y lipoteicoicos

FACTORES DE DISEMINACIÓN HIALURONIDASA ( Streptococcus spp Staphylococcus spp, Clostridios ). COLAGENASA ( C. perfringens ). NEURAMINIDASA (Patógenos entéricos). ESTREPTOQUINASA ( Streptococcus spp ) ESTAFILOQUINASA ( Staphylococcus spp)

ENZIMAS QUE PRODUCEN POROS EN LA MEMBRANA CELULAR FOSFOLIPASAS LECITINASAS HEMOLISINAS

BACTERIAS INTRACELULARES BACTERIAS QUE PUEDEN SOBREVEVIR Y MULTIPLICARSE DENTRO DE LOS MACRÓFAGOS: Listeria monocytogenes Mycobacterium tuberculosis Brucella abortus. Salmonella spp

INTRODUCCIÓN DOS TIPOS DE TOXINAS BACTERIANAS: EXOTOXINAS ENDOTOXINAS

TOXIGÉNESIS POR SU NATURALEZA QUÍMICA: EXOTOXINAS: PROTEÍNAS. LIBERADAS EN EL MEDIO EXTRACELULAR POR BACTERIAS VIVAS ENDOTOXINAS: LIPOPOLISACARIDOS (LPS). ASOCIADOS A LA MEMBRANA EXTERNA DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

EXOTOXINAS SON PROTEÍNAS SON ALTERADAS POR EL CALOR, ACIDOS, ENZIMAS PROTEOLÍTICAS. TIENEN ACTIVIDAD BIOLÓGICA ALTA. TIENEN UNA ACCIÓN ESPECÍFICA.

EXOTOXINAS TOXINAS PROTEICAS PROTEINAS SOLUBLES SECRETADAS POR LAS BACTERIAS VIVAS EN LA FASE DE CRECIMIENTO EXPONENCIAL. BACTERIAS GRAM + o - FORMAN TOXOIDES ( TOXOIDE TETÁNICO). Clostridium tetani, C. botulinum, Bacillus anthracis, S. aureus, E. coli,

EXOTOXINAS Se pueden clasificar en varias categorías basadas en su efecto biológico en la célula huésped: Neurotoxinas. Citotoxinas Enterotoxinas Ejemplo: Neurotoxina C. botulinum Actúa sobre las motoneuronas evitando la liberación de acetil colina en las uniones neuromotoras, produciendo parálisis flácida.

ENDOTOXINAS (LPS). ASOCIADAS A LA MEMBRANA EXTERNA DE LAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS ( E. coli, Salmonella spp,Pseudomonas spp, Haemophilus spp) LIPOPOLISACARIDOS

ENDOTOXINAS (LPS). LIPIDO A: COMPONENTE TÓXICO NÚCLEO DE POLISACARIDOS: DETECCIÓN DE TOXINA POLISACARIDO O: DETERMINANTE ANTIGENICO (ANTÍGENO SOMÁTICO)

CARACTERÍSTICAS DE LAS ENDOTOXINAS MENOS ESPECÍFICAS SON TERMOESTABLES SU TOXICIDAD RADICA EN EL LIPIDO A DE LOS LPS. NO FORMA TOXOIDES SON ANTÍGENOS DÉBILES.

EFECTOS DE LAS ENDOTOXINAS FIEBRE LEUCOPENIA HIPOGLUCEMIA HIPOTENSIÓN Y CHOQUE COAGULACIÓN INTRAVASCULAR REACCIÓN DE SHWARTZMAN ACTIVACIÓN DEL COMPLEMENTO (INFLAMACIÓN AGUDA).

CARACTERISTICAS DE LAS ENDOTOXINAS Y EXOTOXINAS BACTERIANAS PROPIEDADES ENDOTOXINA EXOTOXINA NATURALEZA QUIMICA LPS PROTEINA RELACION CON LA CELULA MEMBRANA EXTERNA EXTRACELULAR EFECTO DEL CALOR NO SI ANTIGENICA POBRE SI FORMA TOXOIDES NO SI POTENCIA BAJA ALTA

CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN BACTERIANA

INTRODUCCIÓN LAS BACTERIAS SE CLASIFICAN E IDENTIFICAN PARA DISTINGUIR UN ORGANISMO DE OTRO. NOS PERMITE AGRUPAR A LOS MICROORGANISMOS DE ACUERDO CON DIFERENTES CRITERIOS DE INTERÉS. EL NIVEL MAS IMPORTANTE ES LA ESPECIE

LAS ESPECIES SON IDENTIFICADAS EN EL LABORATORIO A TRAVÉS DE: CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS, BIOQUÍMICAS Y PATOGÉNICAS. PRODUCCIÓN DE TOXINAS, PRESENCIA DE PLÁSMIDOS ESPECÍFICOS. PATRONES DE SENSIBILIDAD A BACTERIÓFAGOS. GENES O SECUENCIAS ESPECÍFICAS

TAXONOMIA CIENCIA DE LA CLASIFICACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y NOMENCLATURA. NIVELES DE ORGANIZACIÓN: FAMILIA: ENTEROBACTERIACEAE GÉNERO: SALMONELLA ESPECIE: ENTERITIDIS

CLASIFICACIÓN ARREGLO ORDENADO DE LAS BACTERIAS EN GRUPOS. CON BASE EN CRITERIOS NO CIENTÍFICOS MAS BIEN POR INTERESES. SEROTIPO PATRONES DE RESISTENCIA ANTIMICROBIANA PRODUCCION DE TOXINAS, MUTACIONES ESPECÍFICAS Y PLÁSMIDOS.

IDENTIFICACIÓN USO PRÁCTICO DE LOS CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN PARA DISTINGUIR CIERTOS ORGANISMOS DE OTROS, CON EL FIN DE VERIFICAR LA AUTENTICIDAD O UTILIDAD DE UNA CEPA O PARA AISLAR E IDENTIFICAR EL ORGANISMO QUE CAUSA CIERTA ENFERMEDAD.

NOMENCLATURA MEDIO A TRAVÉS DEL CUAL SE DEFINEN LAS CARACTERISTICAS DE UNA ESPECIE Y SE NOMBRAN. EL NOMBRE DE UNA ESPECIE DEBE SIGNIFICAR LOS MISMO PARA TODOS LOS MICROBIÓLOGOS .

DOS NOMBRES GENERO: Salmonella, Brucella, Pasteurella, Streptococcus, Staphylococcus, Pseudomona, ESPECIE. pullorum, abortus, multocida, uberis, aureus, aeruginosa.

BASADO EN: MORFOLOGÍA. REACCIÓN DE GRAM REQUERIMIENTOS DE OXÍGENO FORMACIÓN DE ESPORAS

OTROS FACTORES CULTIVOS: MORFOLOGÍA COLONIAL. ANTIGÉNICOS REACCIÓN BIOQUÍMICA. DNA: CONTENIDO G+C SECUENCIA RIBOSOMAL SECUENCIA GENÓMICA TOTAL.

CINCO GRUPOS GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS ESPIROQUETAS ACIDO ALCOHOL RESISTENTES (Mycobacterias). BACTERIAS CARENTES DE PARED CELULAR ( Mycoplasmas).

¿COMO SE ESCRIBEN LOS NOMBRES DE LAS BACTERIAS ? GÉNERO Y ESPECIE. USAR CURSIVAS O SUBRAYADO GÉNERO: Mayúscula al inicio. ESPECIE: minúscula. Brucella abortus Escherichia coli.

SI SÓLO SE MENCIONA EL GÉNERO USAR spp. Salmonella spp. Brucella spp. Haemophilus spp

DONDE CONSULTAR ? BERGEY´S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY. NOVENA EDICIÓN 1994. SITIO DE LA SOCIETY FOR SYSTEMATIC AND VETERINARY BACTERIOLOGY http://www.bacterio.cict.fr/sbsv/sbsvenglish.htm

TOMA DE MUESTRAS PARA ESTUDIO BACTERIOLÓGICO

CARACTERÍSTICAS DE LAS MUESTRAS PARA ESTUDIO BACTERIOLOGICO Tomar muestras de animales que presenten signos y lesiones características del problema Tomar las muestras para bacteriología al principio de las necropsia No considerar animales que ya presenten cambios “ post mortem ”

Órganos: 300 gr aprox. Colocar en bolsas limpias individuales e identificadas. Fluidos (articulaciones, LCR, cavidad pericárdica): Colectar con jeringa estéril Hisopos óticos u oculares: Colocar el hisopo en un tubo estéril con SSF. No romper el hisopo.

Orina: Cistocentesis o catéter. Transportar en una jeringa o frasco estéril. Guardar en refrigeración no mas de 8 hrs. Heces: 2 a 3 gr, en bolsas limpias y en algunos casos hisopos en tubos estériles con SSF.

Casos de aborto: Feto completo, pulmón, hígado, pieza de placenta. Abscesos: Tomar con jeringa estéril 3ml de pus de abscesos recién formados. Leche: Tomar 30 ml en un frasco estéril previa desinfección.

Muestras de agua: Colectar directamente de la fuente de agua utilizando un contenedor estéril ( mínimo 50 ml). Conservar en refrigeración a 4 °C

Muestras colectadas lo más asépticamente posible. Siempre deben ser colectadas antes de la administración de cualquier agente antimicrobiano

SIEMPRE CONSERVAR LAS MUESTRAS EN REFRIGERACION A 4 ºC

FUNDAMENTOS DE LAS TECNICAS DE DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO EN MEDICINA VETERINARIA

DEMOSTRACION Técnica barata y rápida. Se puede realizar en el material biológico o en las colonias Determinar la forma, tamaño y agrupación de las bacterias. Ejemplos: Tinción de Gram* Ziehl-Neelsen Campo oscuro

TINCION DE GRAM GRAM NEGATIVAS GRAM POSITIVAS

TINCIONES ESPECIALES TINCION DE TINTA CHINA PARA LA DEMOSTRACION DE CAPSULA

AISLAMIENTO Medios de cultivo: A.S, MaC,V.B,CHOC. Atmósfera de Incubación:O 2 , CO 2 , AN O 2 Temperatura de incubación:37ºC,42ºC Tiempo de incubación: 24 a 48 hrs, 48 a 72 hrs, 3 a 8 sem.

IDENTIFICACION PRIMARIA Tincion de Gram Morfología (bacilo, coco, cocobacilo o espiral) Crecimiento o no en el medio MacConkey Catalasa y oxidasa

OTRAS PRUEBAS INMUNODIFUSION AGLUTINACION EN PLACA COAGLUTINACION FIJACION DE COMPLEMENTO ELISA INMUNOFLUORESCENCIA BIOLOGÍA MOLECULAR

PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS Se utilizan para tomar decisiones terapéuticas Estudios epidemiológicos sobre resistencia Debe ser el complemento del aislamiento de un agente bacteriano sobre todo cuando es difícil predecir su sensibilidad.

MÉTODO DE DILUCIÓN Es un método cuantitativo Consiste en inocular un número conocido de microorganismos en tubos o placas que contienen un medio de cultivo con concentraciones específicas de un antimicrobiano CMI: mínima concentración del fármaco capaz de inhibir el crecimiento bacteriano.

MÉTODO DE DIFUSIÓN Es el método más utilizado y su interpretación es cualitativa. Correlaciona la concentración de un antibiótico con la distancia que la droga difunde desde un disco de papel que contiene una cantidad estándar de un antibiotico dado con la CMI .

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS DEL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA

I NTRODUCCIÓN AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS.

INTERPRETACION DE RESULTADOS: AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN. Flora normal: Mezcla de organismos. Cuantificación del crecimiento: ligero, moderado o intenso. Cultivo puro. Ausencia de patógenos específicos: Salmonella, Campylobacter . Cultivos sin crecimiento.

REPORTE DEL LABORATORIO MUESTRA: PULMÓN. RESULTADO: 1.- Se aisló Pasteurella multocida . 2.- No hubo crecimiento bacteriano

Causas de fallo en el aislamiento de un agente Presencia de contaminantes en la muestra Muerte del agente durante el transporte de las muestra al laboratorio Que el animal haya recibido terapia antimicrobiana antes de la toma de la muestra

RESPONSABILIDADES DEL MVZ Selección de la muestra Toma de la muestra Conservación y envío de la muestra Historia clínica completa Diagnóstico presuntivo Interpretación de resultados

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: PRUEBAS DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIMCIROBIANOS APOYO EN EL ESTABLECIMIENTO DE UN PLAN TERAPÉUTICO. RESISTENCIA ANTIMICROBIANA

INTERPRETACION NCCLS: National Comittee for Clinical Laboratory Standards. Puntos de corte para cada antimicrobiano con base en cepas de referencia. Por ejemplo: Gentamicina 10 µg S= >15 mm, I =13-14mm, R=<12mm

INTERPRETACIÓN Sensible: se espera respuesta al tratamiento con dicho fármaco a la dosis recomendada. Resistente: la infección causada por el microorganismo no responderá al antibiótico en cuestión, cualquiera que sea la dosis y la localización de la infección.

Interpretación. Intermedio: cepas con sensibilidad disminuida. Zona de transición entre cepas sensibles y resistentes. No se recomienda su uso como alternativa terapéutica.

INTERPRETACIÓN. PREDICEN LA RESPUESTA ESPERADA AL TRATAMIENTO PERO NO SON UNA GARANTÍA. TOMAR LOS RESULTADOS COMO UNA GUÍA. CONSIDERAR LOS ASPECTOS DE FARMACODINAMIA Y FARMACOCINÉTICA DE CADA ANTIMICROBIANO

RESULTADOS DE ANTIBIOGRAMA ANTIBIOGRAMA DE Escherichia coli GENTAMICINA 10 µg S ENROFLOXACINA 5 µg S TETRACICLINA 30 µg I AMPICILINA 10 µg R

INTERPRETACIÓN Resultados de susceptibilidad antimicrobiana proveen una parte de la información que se necesita para formular terapias antimicrobianas. La interpretación y la aplicación al caso clínico es responsabilidad del MVZ.

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