Investigación sobre un articulo, de cuales citocinas se elevan en la fase aguda con la enfermead chikunguya.

1. UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPAS
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
CAMPUS IV
MATERIA:
PROYECTO DE INVESTIGACION I
PROPUESTA DE TESIS:
CITOCINAS EN CHIKV FASE AGUDA.
NOMBRE DEL ALUMNO (A):
KARLA AREVALO HERNANDEZ
NOMBRE DEL CATEDRATICO:
DOCTOR SERGIO ARREVILLAGA DOMINGUEZ.
TAPACHULA CHIAPAS HOY 17 DE SEPTIEMBRE DEL 2015
SEMESTRE: OCTAVO
GRUPO: “A”

2. CITOCINAS EN CHIKV FASE AGUDA
ANURADHA VENUGOPALAN*, RAVI P. GHORPADE, ARVIND CHOPRA
CENTRO PARA ENFERMEDADES REUMATICA EN PUNE, INDIA.
RECIBIDO: 21 DE MAYO 2013; ACEPTADO: 30 DE SEPTIEMBRE 2014;
PUBLICADO: 24 DE OCTUBRE 2014 EN LA REVISTA ISSUE 9(10).
doi:10.1371/journal.pone.0111305

3. Introducción
 La chikunguya es una enfermedad viral febril transmitido por 2 vectores, inicia
provocando un cuadro agudo, después de 3-7dias de ser infectado presentando
como síntomas: (CDC. OPS/OMS 2011)
Mosquito tigre
SINTOMAS VALOR EN %
Artralgia (dolor articular) 71 a 100vv%
Fiebre mayor a 39 °C 70 a 100%
Mialgias (dolor muscular) 46 a 72%
fatiga 50 a 70%
conjuntivitis 34 a 50%
Depresion 50 a 70 %
Rash (erupciones en la piel) 28 a 77 %
Cefaleas 17 a 74 %
Nausea con o sin vomito 4 a 59 %
 Basado a la literatura estandar , citocinas se clasifican en: Th1: IFN α,β, y Y, TNF α, IL-1B, CXCL-
10,/10, MCP-1). Y Th2 : ( IL-6, IL-4, IL-10, IL-13) tambien las clasifican como citocinas
proinflamatorias e anti-inflamatorias. (Caio Marcio Barros de Oliveira 2011).
 IFN α,β, y Y, , TNF α, IL-1B, IL-6, , IL-13, CXCL-10,/10, MCP-1, MCP-1, IL-4, y IL-10 se midieron con el
Kit ELISA DUO SET.

4. El virus del chikunguya:
 Es un arbovirus de la familia togovidirae
 Genero: alfa virus del grupo A .
(chopra A, anuradha V. etal (2012)
Estructura de virus chikunguya
 Envoltura: una membrana compuesta por
lípidos, y glucoproteínas de envoltura .
 Nucleocapside: capside icosaedrica de 40 nm.
(OPS, 2003).
 Genoma:
ARN + de cadena sencilla la molécula mide 12 kb de longitud.
(OPS, 2003).
 El CHIKV consta de:
5 proteínas estructurales: ( E1 E2 E3 6K Y C ).
4 Proteínas no estructurales (NSP1, NSP2, NSP3, NSP4 ).
 TIENE 3 GENOTIPOS: asiático , áfrica occidental y ECSA (Linaje de cepas africanas ,
centro y sur ) (Martínez FN, González LJ, e tal 2009) .
tamaño
60 -70 nm
Doble
envoltura.
AGENTE CAUSAL

5. CICLO REPLICATIVO DEL VIRUS DEL CHIKUNGUYA

6. ANTECEDENTES
 Un resurgimiento de una cepa africana del CHIKV en 2006 causo una
epidemia sin precedentes extendida en el sur de Asia varias regiones
vecinas (Chopra A, 2012 )() Leo YS, Chow ALP 2009).
 Se realizo una encuesta en la comunidad rural durante la epidemia y
reportamos el perfil clinico CHIKV aguda y su secuela MSK. (Chopra A,
2012 ).
 Estabamos intrigados por la enorme intensidad del dolor MSK y
pilialtralgias la mayoria de los casos se recuperaba 3 semans despues
de la infeccion (Brihton SW 2014 ).

7. OBJETIVOS
 Es realizar un ensayo de citocinas seleccionadas el propósito es examinar
algunas de las correlaciones y los patrones de regulación positiva de
citocinas inmunes patológicas.
 Obtener el perfil de citocinas de los casos examinados en las cuatro semanas
del inicio de la enfermedad.

8. A) Poblacion de estudio:
Sintomatico:
Fase aguda ( 0 a 5 dias).
Fase subaguda(6 a 14 dias).
Fase extendidas( 15 a 30 dias).
Asintomaticos:
Recuperados
Controles sanos
B) Lugar de estudio: poblacion rural durante la epidemia de la india de CHIKV en 2006 en
BAVI ( pueblo en el distrito de SHOPAPUR) estado maharahtra india occidental (Chopra A,
2012)(2).
C) Criterio de inclusion: todos los pacientes con diagnostico de
CHIKV
D) Criterio de exclucion : se excluia a los paciente con otras enfermedades,
E) Se les aplica una carta de conocimiento informada.
F) Tipo de estudio: cohorte es un estudio epidemiológico, observacional, analítico,
longitudinal prospectivo, en el que se hace una comparación de la frecuencia de enfermedad (o
de un determinado desenlace) entre dos poblaciones,
F)Analisis estadistico:
 Calculos SPSS version 12.0
 Análisis no paramétrico con kruskal – wallis (para diferenciar citocinas)
 Coeficiente de correlación de Pearson .
 Se realizo un análisis de regresión lineal para determinar predictores de resolución de
METODOLOGIA

9. POBLACION OBJETIVO
N:1650
CASOS CON CHIKV
N:437
183(MUESTRAS DE SANGRE
RECOGIDAS)
CASOS SINTOMATICOS
N: 437
183(42%) MUESTRAS DE
SANGRE RECOGIDA
CASOS RECUPERADOS
N:72
49(58%) MUESTRAS DE SANGRE
RECOGIDAS
SUJETOS SIN CHIKV
N:683
49(7%) MUESTRAS DE
SANGRE RECOGIDAS
POBLACION PROYECTADA
(Sep 2006- Nov 2006)
N: 1192(72%)
4 SEMANA CON LA ENFERMEDAD
31 CASO
22(60%) MUESTRAS DE SANGRE
RECOGIDAS
4 SEMANAS CON LA ENFERMEDAD
41 CASOS
20( 49%) MUESTRAS DE SANGRE
RECOGIDAS
4 SEMANAS CON LA ENFERMEDAD
122 CASOS
73 (60%) MUESTRAS DE
SANGRESRECOGIDAS
4 SEMANAS CON LA
ENFERMEDAD
315 CASOS
110(35%) MUESTRAS DE
SANGRESRECOGIDAS
FASE DE LA ENFERMEDAD AGUDA.
23 (21%)MUESTRA DE SANGRE RECOGIDA
FASE DE LA ENFERMEDAD AGUDA.
22 (20%)MUESTRA DE SANGRE RECOGIDA
SINTOMATICO PROLONGADO DE LA
ENFERMEDAD AGUDA
65 (59%) MUESTRA DE SANGRE COLECTADA
FIGURA1. numero de casos identificados y muestras de
sangre recogidas durante la encuesta y en el posterior
periodo de seguimiento.

10. Él suero se
almaceno a
– 80 °c
Las muestras
se obtuvieron
asépticamente
Se examino frotis
para excluir el
parasito dela
malaria
Se realizo VSG
en tubos
wintrobe
caída a 1 hora.
Se realizo proteína C
reactiva utilizando
nefelometría.
Metodologia

11. Anti CHIKV Igm E Igg.
inmunocromatografia
e inmunoflueresencia
indirecta.
Elisa sándwich para medir
las citocinas naturales y
recombinantes.
Suero de pacientes -
80 °c:

12. PRUEBA
AGUDA
(N = 23)*
SUBAGUDA
(N = 22)*
SIMTOMATICO
EXTENDIDO
(N = 65)*
SIMTOMATICO
TOTAL (N =
110)*
RECUPERADO (N =
22)*
N (%) N (%) N (%) N (%) N (%)
CHIKV IgM + 4 (17%) 12 (55%) 40 (62%) 56 (51%) 7 (32%)
CHIKV IgG+ 12 (52%) 3 (100%) 2 (13%) 17 (40%) 8 (50%)
CHIKV IgM+IgG- 1 (4%) 0 10 (63%) 11 (26%) 2 (13%)
CHIKV IgM-IgG+ 9 (39%) 1 (33%) 0 10 (24%) 4 (25%)
CHIKV IgM+IgG+ 3 (13%) 2 (67%) 2 (13%) 7 (17%) 4 (25%)
CHIKV IgM-IgG- 10 (43%) 0 4 (25%) 14 (33%) 6 (38%)
PCR (>6 mg/L) 6(26.1%) 2 (9.1%) 8 (12.3%) 16 (14.5%) 4 (18.2%)
FR (>40 IU/ml) 2 (8.7%) 0 3 (4.6%) 5 (4.5%) 0
ANA 1 (4.3%) 1 (4.5%) 3 (4.6%) 5 (4.5%) 2 (9.1%)
TABLA 1: Perfil serológico de frecuencia de resultado positivo de los casos sintomáticos (N = 110 ) con casos
recuperados (N = 22 ) de CHIKV con enfermedad dentro de un mes de duración .
PCR = proteína C reactiva ; RF = Factor reumatoide ; ANA = Anticuerpo antinuclear
.Nota : Anti CHIKV IgM fue probado en todo el 110 sintomático y 22 sujetos recuperados ; Anti IgG CHIKV solamente se probó en
42 sujetos sintomáticos ( aguda = 23 ; subaguda = 3 y ampliado sintomática = 16) y 16 sujetos recuperados ;
RESULTADOS

13. Figura 2: se muestra la dispersión de ensayos de diversas citocinas en suero de los casos de CHIKV con 1 mes con la
enfermedad sintomático (n=110), recuperados (22), comparando con controles sanos, la mediana que se muestra como
barritas horizontales fue mayor (p<0.05) en el cohorte de estudio sintomático y recuperado. Los ensayo de suero para
TNF-a, IL-6, IL-13, CXCL-10/IP-10, fueron mayores en el grupo recuperado.

14. CITOCINAS FASE AGUDA FASE SUBAGUDA
FASE
SINTOMATICO
EXTENDIDA
TOTAL SINTOMATICO RECUPERADO CONTROLES
SANOS
(PG./ML) N =23 N = 22 N= 65 N =110 N =22 N = 80
14.16 MEDIANA 5.71 4.68 9.61 1.58
IFN-A [23.51] D ESTANDAR [0.26] [0.40] [22.32] ND [0.50]
(8.90–4.90) R INTERCUARTILIGO (5.37–5.82) (4.40–5.16) (5.84–28.42) (1.15–1.90)
112.57 MEDIANA 46.24 38.11 76.00 13.36
IFN-B [191.88] D ESTANDAR [2.57] [3.43] [181.64] ND [3.92]
(70.10–390.40) R
INTERCUARTILICO
(43.11–47.82) (35.28–41.70) (48.26–227.99) (9.82–16.25)
85.24 MEDIANA 29.33 26.84 37.70 15.82 1.72
IFN-Y [476.59] D ESTANDAR [201.56] [329.49] [348.42] [86.18] [153.13]
(30.61–416.17) R
INTERCUARTILICO
(10.02–76.40) (8.34–127.36) (9.62–133.69) (0.64–97.57) (0.88–8.22)
71.44 MEDIANA 61.81 66.15 65.65 79.48 2.65
CXCL-10/IP-
10
[277.41] D ESTANDAR [118.57] [93.85] [161.87] [111.97] [21.44]
(21.76–415.95) R INTERCUARTILICO (6.09–97.82) (5.98–99.86) (6.67–107.23) (31.79–149.04) (2.06–3.96)
11.15 MEDIANA 8.56 8.19 10.44 4.92
IL-1B [1.49] D ESTANDAR [0.32] [0.18] [1.82] ND [1.34]
(10.02–12.44) R INTERCUARTILIGO (8.41–8.99) (8.02–8.36) (9.11–11.80) (4.19–5.70)
90.99 MEDIANA 94.30 107.54 97.20 257.88 20.65
TNF-A [26.12] D ESTANDAR [60.38] [231.76] [355.80] [475.71] [328.60]
(18.01–188.33) R INTERCUARTILICO (4.2–1959.1) (57.79–276.20) (53.05–229.05) (60.69–610.03) (11.73–50.51)
1576.40 MEDIANA 1218.88 1869.23 1605.09 32.23
MCP-1 [541.83] D ESTANDAR [584.95] [776.26] [570.59] ND [76.45]
(1333.64–1892.25) R
INTERCUARTILIGO
(514.56–1608.27) (711.79–1955.56) (1254.59–1892.25) (18.31–58.73)
119.58 MEDIANA 392.57 170.53 137.94 1.00
IL-4 [89.36] D ESTANDAR [34.10] [24.26] [111.85] ND [0.61]
(88.98–249.31) R
INTERCUARTILIGO
(347.36–409.73) (162.00–204.77) (96.83–273.78) (1.00–1.69)
172.39 MEDIANA 233.74 250.93 235.07 501.16 33.40
IL-6 [230.68] D ESTANDAR [142.59] [197.89] [194.47] [203.08] [354.81]
(29.19–513.40) R
INTERCUARTILIGO
(103.16–278.85) (86.60–498.81) (82.21–456.99) (224.57–557.53) (8.46–472.96)
13.12 MEDIANA 46.12 72.97 17.44 1.98
IL-10 [43.88]D ESTANDAR [22.11] [11.87] [41.47] ND [0.87]
(6.46–22.05) R INTERCUARTILIGO (25.84–66.39) (68.89–89.82) (8.17–68.90) (1.91–2.55)
581.34 MEDINANA 449.69 576.09 558.63 751.61 177.77
IL-13 [46.63] D ESTANDAR [345.68] [939.43] [784.39] [1315.41] [688.76]
(420.15–780.05) R
INTERCUARTILIGO
(427.82–830.07) (461.38–1093.22) (440.37–856.74) (606.44–835.81) (142.29–212.07)
Tabla 2. perfil de citoquinas de los casos con enfermedad CHIKV el plazo de un mes de duración (N = 110 ) .

15. TABLA 3
COEFICIENTE DE CORRELACIONES POSITIVAS DE PEARSON SIGNIFICATIVAS ENTRE LAS CITOCINAS Y LAS VARIABLES
CLÍNICAS Y DE LABORATORIO SELECCIONADOS. DÉBIL (0.1 A 0.3) MODERADA (0.4 A 0.6) FUERTE (0.7 A 0.9) PERFECTO
(1.0).
CITOCINAS
FASE AGUDA FASE SUBAGUDA
Extended FASE
SINTOMATICA
RECUPERADO
total
(pg./ml) n =23 n =22 n = 65 n =22 N = 132
IFN-b (1.00) IFN-b (1.00)
IiFN-a IL-1b (0.94) ND ND ND IL-1b (0.90)
CXCL-10/IP-10 (0.59) CXCL-10/IP-10 (0.51)
IiFN-b CXCL-10/IP-10 (0.50) ND ND ND CXCL-10/IP-10 (0.52)
Fatigue (0.42)
Pain Intensity (0.23)
CXCL-10/IP-10 (0.45) – Recuento de plaqueta (0.35) Bajo dolor de cabeza (0.48)CXCL-10/IP-10 (0.18)
IiFN-y MCP-1 (0.65) CXCL-10/IP-10 (0.25) TNF-a (0.51 MCP-1 (0.74)
IL-6 (0.31)
IL-13 (0.18)
CHIKV-G (0.83) TNF-a (0.24)
CXCL-10/IP-10 pro IL-6 (0.57) Cantidad plaqueta
(0.52)
CHIKV-G (0.58) – IL-10 (0.37)
IL-6 (0.62) IL-6 (0.39)
IL-13 (0.45)
Fatigue (0.47)
IiL-1b CXCL-10/IP-10 (0.61) ND ND ND CRP (0.37)
CXCL-10/IP-10 (0.41)
Headache (0.20)
TNF-a pro IL-6 (0.48) Dolor de cabeza (0.48) IL-6 (0.60) hemoglobina (0.44) IL-6 (0.61)
IL-13 (0.23)
Platelet Count (0.41)
MCP-1 pro – ND ND ND TLC (0.37)
R Gender (0.38)
iIL-4 CHIKV-M (0.58) ND ND ND Myalgia (0.47)
IL-10 (0.85)
IiL-6 CRP (0.54) CHIKV-G (0.72) CHIKV-G (0.53) – Skin Rash (0.19)
R Gender (0.48) CANTIDAD LEUCOCITOS
TOTALES (0.51)
IL-13 (0.26)
IL-13 – Dolor de cabeza
(0.52)
CRP (0.28) – –

16. TABLA 4
COEFICIENTE DE CORRELACIONES NEGATIVAS DE PEARSON SIGNIFICATIVAS ENTRE LAS CITOCINAS Y LAS VARIABLES CLÍNICAS Y DE
LABORATORIO SELECCIONADOS. DÉBIL (-0.1 A - 0.3) MODERADA (-0.4 A - 0.6) FUERTE (-0.7 A -0.9) PERFECTO (-1.0). Mientras una se eleva la
otra citosina baja.
CITOCINAS FASE AGUDA FASE
SUBAGUADA
FASE SINTOMATICA
EXTENDIDA
RECUPERADOS
TOTAL
(PG/ML) N = 23 N = 22 N =65 N =22 N = 132
IFN-A IL-4 (-0.73) ND ND ND CHIKV-IGM (-0.51)
IL-10 (-0.44) MYALGIA (-0.37)
IL-4 (-0.69)
IL-10 (-0.51)
IFN-B IL-4 (-0.73) ND ND ND MYALGIA (-0.37)
IL-10 (=0.44) CHIKV-IGM (-0.50)
IL-4 (-0.68)
IL-10 (-0.51)
IFN-C – – DOLOR DE CABEZA (-
0.27)
– –
CXCL-10/IP-10 TOTAL DE LEUCOCITOS (-
0.51)
– – – –
MCP-1 (-0.54)
IL-4 (20.52)
IL-1B IL-4 (-0.86) ND ND ND CHIKV-M (-0.69)
IL-10 (-0.56) IL-4 (-0.77)
CHIKV-IGG (-0.49) IL-10 (-0.62)
TNF-A HEMOGLOBINA (-0.47) TOTAL DE
LEUCOCITOS(20.
56)
– EDA ≥ ANO (-0.49) –
MYALGIA (-0.48)
MCP-1 RECUENTO DE PLAQUETAS(-
0.54)
– – – –
GENERO (-0.51)
IL-6 (-0.45)
IL-4 IL-6 (-0.42) ND ND ND –
IL-10 IL-6 (-0.45) ND ND ND –

17. Tabla 5
Comparación del perfil de citoquinas en los casos CHIKV con controles sanos en diferentes
estudios informó.
citocinas/
quimiocinas.
aguda
(n = 23)
Subaguda
(n = 22)
Sintomatico
extendido(n =
65)
2–19 dias
(n = 10)
aguda
(n = 35)
aguda (n
= 6)
RA(n = 105)
IFN-a 8.9 3.6 3.0 15 ND ND 2.8
IFN-b 8.4 3.5 2.9 ND ND ND ND
IFN-c 50.1 17.2 15.8 + 0.9 ND 2.7
CXCL-10/IP-10 26.9 23.3 25.0 1000 2.3 33.9 1.2
IL1-b 2.3 1.7 1.7 + 0.82 ND 4.9
TNF-a 4.4 4.6 5.2 + 1.5 ND 3.7
MCP-1 49.0 37.9 33.2 ND ND 1.9 1.1
IL-4 108.7 392.6 170.5 + 0.07 ND 6.5
IL-6 3.8 7.0 7.5 4.0 2.0 196.7 9.3
IL-10 6.4 23.1 38.5 15 0.4 1.9 3.3
IL-13 3.3 2.5 3.2 + ND ND 10
estudio actual (HC=80 NG et al
2009 (HC=
9)
Kelvin et al
2011
(HC=10)
chaaithanya
etal. 2011(HC=6)
el-gabalawy etal
2012 (HC=200)
(HC=200)
Los valores expresados como proporción de las medianas de los casos a los controles.
IFN-interferón; Factor de Necrosis Tumoral TNF =; CXCL-10 / IP-10 = inducida por interferón gamma Protein-10; IL = interleucina; MCP =
quimiotáctica de monocitos proteína. HC = controles sanos; ND = No Hecho; + = Más alto que los controles sanos; Nota: En el estudio actual,
el IFN-α, IFN-β, IL-1β, MCP-1, IL-4 e IL-10 se pusieron a prueba en 4 temas de sub- fase aguda y de extenderse fase sintomática. Todas
las otras citoquinas se probaron en 23, 22 y 65 sujetos de la fase sintomática aguda, sub-aguda y extendida, respectivamente

18. CONCLUSIONES
 Un intenso numero de citoquinas fue evidente en la fase aguda y
persistente en sujetos recuperados .
 En la fase sintomática temprana persistente IgM y menor cantidad IgG
a anti- CHKV.
 intenso fenotipos de citocinas Th2 parecen ser asociado con el
retraso en la resolución de los síntomas MSK .
 Curiosamente, citocinas como máximo TNF -α, IL- 6 e IL- 13 y baja
IGM anti-CHIKV, la respuesta se encuentra en los sujetos se
recuperados del CHIKV con plazo de un mes con la enfermedad .