Jornadas de arbovirosis: dengue, chikungunya y Zika. Preparación y respuesta de los países del Cono Sur. Buenos Aires, Argentina, 4-5 noviembre 2015.

1. Chikungunya:
Aspectos virológicos que afectan la
epidemiología y la transmisión
Jairo A. Méndez-Rico, PhD
Asesor Regional Enfermedades Virales
OPS/OMS Washington DC
0

2. Enfermedades Emergentes
• Enfermedades emergentes: se
reconocen nuevas enfermedades (p.e. un
nuevo agente patógeno)
• Enfermedades re-emergentes: Ya se
habían controlado pero se activaron
nuevamente (p.e. en un nuevo territorio)
Title of the Presentation1
(Joshua Lederberg & Robert Shope)
Microbial Threats to Health in the United
States
1992, Instituto de Medicina (USA)

3. • Las enfermedades emergentes son parte de un proceso
histórico
• Durante los últimos 15 años, la mayoría de enfermedades
infecciosas nuevas han sido virales
• Gracias a su capacidad de adaptación y rápida evolución
los virus constituyen el mayor reto
Enfermedades Emergentes

4.  Arbovirus (Arthropod-Borne Virus): Transmitted by
hematophagous arthropods (mosquitoes, ticks, fleas,
etc.)
Togaviridae Flaviviridae Bunyaviridae Reoviridae
Enfermedades Emergentes

5.  Arbovirus (Arthropod-Borne Virus): Transmitted by
hematophagous arthropods (mosquitoes, ticks, fleas,
etc.)
Togaviridae Flaviviridae Bunyaviridae Reoviridae
Enfermedades Emergentes
Dos géneros:
• Rubivirus (Rubeola)
• Alphavirus

6. Alphavirus
Mas de 30 virus en 7
complejos
Semliki Forest (SFV)
O´nyong-nyong (ONNV)
Mayaro (MAYV)
Ross River (RRV)
Chikungunya (CHIKV)
Sindbis
WEEV
VEEV
EEEV

7. • Virus con
envoltura lipídica
• Simetría
icosahédrica y
forma esférica
• Todos
compuestos por
ssRNA
Alphavirus
Cortesía, Ann Powers, CDC Fort Collins

8. Alphavirus

9. Alphavirus
RNA (+): Se traduce directamente en ribosomas
RNAdRNAp: Replicación RNA(-)
RNA (-)
RNA (genómico)
La RNA pol no tiene acción “correctora”: mutaciones
(deletéreas, silentes pero constantes, adaptativas)

10. • gp Envoltura
(E1 + E2)
• Expuesta a mayor
presión
adaptativa
o Responsable de unión
a receptores celulares,
escape del endosoma
o Determinantes
antigénicos
Alphavirus
Cortesía, Ann Powers, CDC Fort Collins

11. Chikungunya (CHIK)
(J Hyg (Lond). 1956 Jun;54(2):177-91.)

12. Chikungunya (CHIK)
(J Hyg (Lond). 1956 Jun;54(2):177-91.)
“…muy aguda aparición de dolores paralizantes en las
articulaciones, fiebre severa y finalmente, la erupción visible.”
“…una variante clínica de dengue clásico que difiere en la
ausencia de dolor de cabeza, de la sensibilidad a la presión a los
globos oculares, y del dolor en los movimientos del ojo"

13. Chikungunya (CHIK)
Las manifestaciones clínicas son un reflejo de los
efectos del virus sobre las células afectadas:
Tropismo celular

14. Chikungunya (CHIK)
Receptores:
• DC-SIGN (CD209)
• L-SIGN (hígado y
nódulos linfáticos)
• Heparan sulfato
• Laminina
• Integrinas
NATURE REVIEWS | Microbiology Vol 8 | July 2010 | 491

15. Chikungunya (CHIK)
• In vitro, se ha demostrado que CHIKV crece en diversas líneas no humanas:
Vero, embrión de pollo, fibroblastos BHK21, L929, y células hepáticas HEp-2
• En cultivos experimentales con células humanas:
Células adherentes (primarias epiteliales y endoteliales), fibroblastos y (en
menor medida) macrófagos.
• También en humanos, se ha visto replicación en células musculares satelitales, pero
no en miotubos diferenciados.
• Las células B y T no son susceptibles a CHIKV (in vitro).
Como otros alphavirus, CHIKV es altamente citopático en cultivo de
células humanas. La infección lleva rápidamente a la apoptosis: efecto en
la fisiopatología

16. Chikungunya (CHIK)
NATURE REVIEWS | Microbiology Vol 8 | July 2010 | 491

17. Chikungunya (CHIK)
Ozden S, Huerre M, Riviere J-P, Coffey LL, Afonso PV, et al (2007) Human Muscle
Satellite Cells as Targets of Chikungunya Virus Infection. PLoS ONE 2(6): e527.
doi:10.1371/journal.pone.0000527
NATURE REVIEWS | Microbiology Vol 8 | July 2010 | 491

18. Emerging Infectious Diseases • www.cdc.gov/eid • Vol. 16, No. 3, March 2010
-Lesiones placentarias en sólo 1 de
624 mujeres infectadas durante el
embarazo
-Se ha demostrado que los
sincitiotrofoblastos humanas son
refractarios a la infección

19. Emerging Infectious Diseases • www.cdc.gov/eid • Vol. 16, No. 3, March 2010
-Lesiones placentarias en sólo 1 de 624 mujeres infectadas durante
el embarazo
-Se ha demostrado que los sincitiotrofoblastos humanas son
refractarios a la infección
-El presunto mecanismo de transmisión viral es el paso directo de la
sangre materna en la circulación fetal a través de pequeñas rupturas
de la placenta durante el parto

20. http://discovermagazine.com/tags?tag=arthropods
Epidemiología

21. http://www.cdc.gov/chikungunya/geo/index.html
Epidemiología

22. Genoma ~ 12Kb
3 genotipos
Epidemiología (molecular)

23. The geographic reach of Chikungunya virus.
National Academy of Sciences PNAS 2011;108:7653-7654
©2011 by National Academy of Sciences

24. Demuestra que la
epidemia en el
Océano Índico fue
por el linaje ECSA
Africano

25. Demuestra que la
epidemia en las
Américas
corresponde a la
introducción del
genotipo Asiático
Epidemiología (molecular)

26. Viruses 2014, 6(11), 4628-4663;
doi:10.3390/v6114628
Epidemiología (molecular)

27. Ciclo similar a Fiebre Amarilla (selvático) y Dengue
Transmisión

28. Transmisión
http://ucanr.edu/blogs/bugsquad//blogfiles/14980_original.jpg
Distribución del vector principal Aedes aegytpi

29. Transmisión
Aedes albopictus como vector de CHIKV

30. PLoS Med. 2006 , 3:1058-70

31. Transmisión
• Cambio de Ala 226 Val (Proteína E1 – pept. de
fusión)
• En SFV el residuo 226 regula la dependencia del
colesterol durante la fusión
• Una mejor adaptación al contenido lipídico de la
membrana puede mejorar la replicación
• Los virus mutantes aumentan notablemente la
diseminación en órganos (secundarios) del mosquito

32. Transmisión
Infección de Aedes albopictus con variantes de
CHIKV
Val
Ala

33. ???
PNH Nuevo
humano?
Transmisión

34. Diagnóstico por laboratorio
• La confirmación etiológica específica de CHIKV sólo es
posible por técncias de laboratorio
• En áreas endémicas, el dengue constituye el principal
diagnóstico diferencial
• Las plataformas para vigilancia de dengue, permitiran la
detección y vigilancia de CHIKV

35. • Los centros colaboradores y laboratorios de referencia
en la región, juegan un papel primordial en la
confirmación (serológica) de los casos
• Una vez demostrada la circulación viral autóctona, no
será necesario confirmar el 100% de los casos
Diagnóstico por laboratorio

36. • Se deben ajustar los protocolos de vigilancia para no sobrecargar los
laboratorios, considerando la confirmación de los casos graves pero
sólo un porcentaje o número limitado de muestras ambulatorias con
fines de vigilancia (no diagnóstico individual)
• El laboratorio juega un papel fundamental para la detección de los
casos iniciales; sin embargo, los programas de vigilancia deben
articular además el componente clínico, epidemiológico, ambiental y
social para lograr una adecuada caracterización y control de brotes
Diagnóstico por laboratorio

37. Gracias!

38. Preparación en la Región
Instituto Conmemorativo Gorgas, junio 2014
Colaboración con el CDC

39. 3-7 días 1-8 días (max)
Fiebre
Virus / Antígeno
Acs. neutralizantes
IgG
Acs. IgM
Incubación Viremia
15-20 días
Adaptado de: Chikungunya overview, Dr. P. Formenty
(Umbral de anticuerpos)
Diagnóstico por laboratorio

40. • Dx. VIROLÓGICO
– Aislamiento viral
BSL 3 (virus emergente)
– Detección de RNA (PCR)
• Dx. SEROLÓGICO
– MAC-ELISA
– HI
– PRNT
1 8 16
Detección viral: días 1 a 5 (máximo 8)
Detección Acs (IgM) : día 5 en adelante
Días tras el inicio de síntomas
Diagnóstico por laboratorio

41. HRPHRP
1. Cubrir con anti-Human IgM
2. Suero del paciente (IgM)
3. Adicionar Antigeno CHIKV
4. Adicionar conjugado HRP anti-grupo
Ensayos serológicos: ELISA IgM
Adaptado de: Laboratory Testing for Chikungunya Virus, Dr. R. Lanciotti, CDC

42. APAP
1. Cubrir con Acs Monoclonales
(anti-grupo)
2. Adicionar antígeno viral (CHIK)
3. Adicionar suero del paciente
4. Adicionar conjugado anti IgG
Ensayos serológicos: ELISA IgG
Adaptado de: Laboratory Testing for Chikungunya Virus, Dr. R. Lanciotti, CDC

43. Ensayos serológicos: Neutralización
No neutralización
Ensayo de Neutralización por Reducción de Placas (PRNT)
Incubar diluciones del suero del paciente + virus
Interpretación:
100 plaques = No hay anticuerpos presentes en la muestra
90% de reducción de placas= anticuerpos presentes
Neutralización
Adaptado de: Laboratory Testing for Chikungunya Virus, Dr. R. Lanciotti, CDC

44. • Los laboratorios deben implementar y fortalecer la
capacidad diagnóstica básica para detección viral
Limitacione
s de las
pruebas
serológicas:
 CDC a validado algunos estuches comerciales
 Detección de IgM/IgG: ELISA in house (CDC)
relativamente compleja, exigente
 Reacción cruzada con otros alpha-virus
(especialmente Mayaro)
 Los ensayos serológicos (única muestra) son
presuntivos
Diagnóstico por laboratorio

45. • Los laboratorios deben implementar y fortalecer la
capacidad diagnóstica básica para detección viral
Limitaciones
de las
pruebas
serológicas:
La confirmación serológica implica muestras
pareadas (10 -14 días de la aguda)
 Seroconversión (Neg a Pos)
 Aumento de títulos (4 veces)
ELISA es CUALITATIVA (no cuantitativa)
Se debe confirmar con técnicas cuantitativas como
HI ó Neutralización (>especificidad)
Las pruebas rápidas presentan muy baja
sensibilidad
Diagnóstico por laboratorio

46. 45
3-7 días 1-8 días (max)
Fiebre
Virus / Antígeno
Acs. neutralizantes
IgG
Acs. IgM
Incubación Viremia
15-20 días
Adaptado de: Chikungunya overview, Dr. P. Formenty
(Umbral de anticuerpos)
IgM = POS
IgG = POS
Diagnóstico por laboratorio

47. CHIKV Diagnóstico por laboratorio46
CDC CHIK Real-Time RT-PCR
Ensayo confirmativo
recomendado:
• Diseño original: 4 iniciadores/2 sondas (actualizado, 2014)
• Detecta todos los genotipos de CHIK (WA, SCEA, & Asia)
• 25 copias/reacción (alta sensibilidad)
Diagnóstico por laboratorio

48. CHIKV Diagnóstico por laboratorio47
CDC CHIK Real-Time RT-PCREnsayo confirmativo
recomendado:
• Actualizado 2014: 5 iniciadores + 3 sondas
• Detecta todos los genotipos de CHIK (WA, SCEA, & Asia)
• 25 copias/reacción (alta sensibilidad)
Diagnóstico por laboratorio

49. • Los centros colaboradores y laboratorios de referencia
en la región, juegan un papel primordial en la
confirmación (serológica) de los casos
• Una vez demostrada la circulación viral autóctona, no
será necesario confirmar el 100% de los casos
Diagnóstico por laboratorio

50. • Se deben ajustar los protocolos de vigilancia para no sobrecargar los
laboratorios, considerando la confirmación de los casos graves pero
sólo un porcentaje o número limitado de muestras ambulatorias con
fines de vigilancia (no diagnóstico individual)
• El laboratorio juega un papel fundamental para la detección de los
casos iniciales; sin embargo, los programas de vigilancia deben
articular además el componente clínico, epidemiológico, ambiental y
social para lograr una adecuada caracterización y control de brotes
Diagnóstico por laboratorio