Este documento describe la cromatografía en papel, incluyendo sus antecedentes históricos y cómo funciona el proceso de separación de compuestos mediante la migración diferencial en una fase estacionaria de papel y una fase móvil de disolvente orgánico. También resume los pasos básicos para realizar un experimento de cromatografía en papel utilizando extractos de hojas de remolacha y cloroformo como disolvente.

1. Cromatografía
en papel
Quinto Semestre
Química Biológica
Universidad Galileo

2. ANTECEDENTES
 Las experiencias en cromatografía se
remontan a 1850, cuando Runge
describió para el análisis de mezclas de
colorantes, aplicando gotas de
colorantes en papel y notando la
separación en diferentes colores.

3. ANTECEDENTES
 Sin embargo, el crédito del
descubrimiento de la cromatografía se la
da al botánico Tswett, quien en 1906
efectuó la separación de pigmentos
vegetales en un tubo conteniendo
material adsorbente solido finamente
dividido,.

4. Se basa en….
 En el coeficiente de partición liquido-
liquido de los compuestos.

5. CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
 Fue desarrollada por Martin en 1944.
 Consiste en colocar en tiras de papel
como soporte de una fase estacionaria
acuosa mientras una fase móvil orgánica
se desplaza en la tira. Se utilizan gotas de
la sustancia a separar cerca del punto
donde partirá el desplazamiento de la
fase orgánica

7. CROMATOGRAFÍA
BIDIMENSIONAL
 Es una variante de considerable poder
de separación, ya que se emplean dos
diferentes solventes aplicados
secuencialmente para desplazar un solo
compuesto.
 La gota del compuesto (generalmente
un aminoácido o un péptido) se “revela”
como una mancha en papel. Y el
material revelador es usualmente
ninhidrina o permanganato de potasio.

8. CROMATOGRAFÍA EN CAPA
FINA
 Utiliza el mismo principio de la cromatografía
en papel, el soporte utilizado es silica gel o
celulosa colocadas en una hoja de vidrio o
plástico en forma de capas muy finas.
 En la cromatografla de capa fina, un
adsorbente está depositado formando una
delgada capa sobre una placa de vidrio,
papel de aluminio u otros materiales, por la
que ascienden, arrastradas por un disolvente
(eluyente), una o más sustancias que se
pretenden separar o identificar.

9. RELACIÓN DE FRENTES
 La relación de la distancia recorrida por
el compuesto entre la distancia que
recorre el frente del solvente desde el sitio
de aplicación se conoce como valor Rf
(relación de frentes)
 El Rf es una constante importante para
propósitos de identificación.
RF=(distancia recorrida por el compuesto)
(distancia recorrida por el disolvente)

10. RELACIÓN DE FRENTES
 Naturalmente, los valores de RF para un
determinado compuesto varían
ampliamente con los cambios de
disolvente.
El valor de RF para un compuesto dado
depende de su estructura y es una
constante física de éste, lo mismo que lo
es su punto de fusión.

11. DISOLVENTES DE ELECCIÓN
 Cuanto mayor es la polaridad de los
compuestos, más intensamente se ven éstos
atraídos por el adsorbente. Se puede
establecer el orden aproximado de
polaridad:
ácidos carboxílicos < aminas < alcoholes y
tioles < aldehídos, cetonas y ésteres <
halogenuros de alquilo y arilo <
hidrocarburosno saturados < hidrocarburos
saturados

12.  La polaridad del disolvente influye
asimismo en la velocidad de ascensión
del soluto a lo largo de la capa de
adsorbente. A mayor polaridad del
disolvente, mayor grado de ascensión del
soluto por la placa, pudiéndose
establecer un orden orientativo de
polaridad creciente de los disolventes:
éter de petróleo < tetracloruro de
carbono < ciclohexano < éter etílico
< acetona < benceno < acetato de
etilo < cloroformo < etanol < metanol <
agua < piridina < ácido acético
DISOLVENTES DE ELECCIÓN

13. MATERIALES
Bata, guantes.
Tubos capilares
Frasco con tapadera hermética
2 tiras de papel filtro de 3 x 8 cm
Regla , lápiz y tijera
Cloroformo
Hojas de remolacha
Mortero con pistilo

14. PROCEDIMIENTO

15. Paso no. 1
 Macerar las hojas de remolacha en el
mortero con pistilo hasta extraer el
pigmento color purpura fuerte que estas
contienen.

16. Paso no. 2
 Cortar dos tiras de papel filtro de 3 x 8cm.
Hacer una marca con lápiz a 1cm de la
parte inferior.

17. Paso no. 3
 Con la ayuda de un capilar de vidrio
colocar una gota de la mezcla sobre la
línea trazada en el cromatofolio. Dejarla
secar y repetir el procedimiento 10 veces

18. Paso no. 4
 Dejar secar las placas. Colocar en el
frasco aproximadamente 15mL de
cloroformo, tapar bien para que los
vapores ocupen la atmosfera del frasco y
evitar que se escapen.

19. Paso no. 5
 Colocar las placas de papel con la muestra
dentro del frasco con cloroformo, dejar que el
eluyente suba por capilaridad.

20. Paso no. 6
Cuando el nivel de disolvente se
situé a unos pocos milímetros de la
parte superior del cromatofolio,
extraer éste y dejarlo secar al aire.
Marcar con un lápiz el nivel que ha
alcanzado el disolvente.

21. Paso no. 7
 Medir la distancia a la que llego cada
mancha y calcular el Rf.