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Microbiología Anaerobia Dra. Florina Ramírez Vives Laboratorio de Tratamiento de Aguas Residuales Departamento de Biotecnología Universidad Autónoma Metropolitana  Iztapalapa CURSO
¿Sabías que los microorganismos ayudan a limpiar las aguas residuales?
Características diferenciadoras de los tres dominios  (Madigan  et al ., 1998) Característica Bacteria Archaea Eukaria DNA circular Presente Presente Ausente Núcleo encerrado en una membrana Ausente Ausente Presente Pared celular Ácido murámico Ausencia del ácido murámico Ausencia del ácido murámico Lípidos de membrana Uniones éster Uniones éter Uniones éster RNA polimerasas 1 (4 subunidades) Varias (de 8 a 12 subunidades c/u) 3 (de 12 a 14 subunidades c/u) Sensibilidad al cloramfenicol, estreptomicina y kanamicina Sí No No Metanogénesis No Sí No Reducción de S 0  a H 2 S Sí Sí No Desnitrificación Sí Sí No Quimiolitotrofía (Fe, S, H 2 ) Sí Sí No
RESPIRACIÓN ANAEROBIA ,[object Object]
Relación de los microorganismos con el Oxígeno Anaerobios Aerotolerantes Obligados Obligados Facultativos Microaerofílicos Aerobios
Reducción del oxígeno hasta agua mediante la incorporación secuencial de electrones   O 2  +  e -     O 2 - O 2 -  +  e -  + 2  H +     H 2 O 2 H 2 O 2  +  e -  +  H +      H 2 O  + OH - OH -  +  e -  +  H +      H 2 O O 2  + 4  e -  + 4  H +     2  H 2 O
Enzimas   que actúan sobre especies moleculares derivadas del oxígeno   Catalasa H 2 O 2  + H 2 O 2     2 H 2 O + O 2 Peroxidasas H 2 O 2  + NADH + H +     2 H 2 O + NAD + Superóxido dismutasa O 2 -  + O 2  + 2 H +     H 2 O 2  + O 2 Superóxido dismutasa/catalasa 4 O 2 -  + 4 H +     2 H 2 O + 3 O 2
Grupos representativos de las  bacterias anaerobias Bacteria Archaea Anaerobias Aerotolerantes Bacterias del ácido láctico Anaerobias Obligadas Clostridios Homoacetogénicas Bacterias intestinales Sulfatoreductoras Extremófilas Metanogénicas Extremófilas
Degradacion Anaerobia de la materia organica Materia orgánica AGV H 2  + CO 2 acetato Hidrólisis, fermentación Acetogénesis Metanogénesis Metanogénesis CH 4  + CO 2 H 2 S   + CO 2 Fermentativas,  acetogénicas y  BSR  Metanogénicas y BSR Metanogénicas y BSR
HIDRÓLISIS- FERMENTACIÓN Polímeros complejos (carbohidratos, proteínas, lípidos ) Oligómeros (azúcares, aminoácidos, péptidos )  1 Propionato, Butirato,  (AG de cadena larga) 1 CO 2  + H 2 S H 2 , CO 2 ACETATO 1 1 CO 2  + H 2 S 5 5 5 CH 4 , CO 2 CH 4 , CO 2 4 3 2 HIDRÓLISIS y FERMENTACIÓN ACIDOGÉNESIS ACETOGÉNESIS METANOGÉNESIS ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],SO 4 2- SO 4 2- 2
Bioprocesos anaerobios ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
[object Object],Sustrato hidrolizado Microorganismo 1. Celulosa Acetovibrio cellulolyticus,  Bacteroides succinogenes. Butyrovibrio fibrisolvens, Cillobacterium cellulosolvens, Ruminococcus albus, Ruminococcus flavifaciens, Clostridium thermocellum  2. Hemicelulosa Bacteroides ruminonicola, Butyrovibrio fibrisolvens 3. Almidón Bacillus spp, Bacteroides spp, Clostridium butyricum. Clostridium  spp , Lactobacillus  spp , Micrococcus  spp , Pseudomonas  spp Clostridium thermohydrosulfuricum 4. Pectinas Costridium butyricum, Clostridium thermohydrosulfuricum 5. Lípidos Anaerovibrio lipolytica, Bacillus  spp 6. Compuestos nitrogenados Costridium acidiurici, Clostridium cylindrosporum, Micrococcus aerogenes Micrococcus lactilycus 7. Proteínas Bacillus  spp , Clostridium  spp , Bifidobacterium  spp , Peptococcus anaerobus, Staphylococcus  spp
Bacterias Fermentativas Microorganismos Productos formados Acetobacterium woodii, Clostridium aceticum, Clostridium formiaceticum Clostridium thermoaceticum,  Acetogenium kivui (termófila) Acetato Butyrobacterium methylotrophicum Eubacterium  sp , Acidaminococcus  sp   Acetato, butirato Clostridium  sp . Acetato, butirato, etanol Propionibacterium  sp ., Anaerovibrio  sp ., Veillonella  sp . Acetato, propionato Lactobacillus  sp ., Thermoanaerobium brockii  Acetato, etanol, lactato,  Bifidobacterium  sp . Acetato, lactato Ruminococcus  sp . Acetato, lactato, formiato Leptotrichia  sp ., Streptococcus  sp. Lactato Succinivibrio  sp . Succinato Butyrivibrio sp., Fusobacterium  sp . Butirato Megasphaera  sp . Butirato, isobutirato, valerato, isovalerato, caproato Thermobacteroides acetoethilicus Etanol, acetato, butirato, isobutirato Thermoanaerobacter ethanolicus Etanol, acetato, lactato, isobutirato, isovalerato Clostridium thermosaccharolyticum Etanol, acetato, lactato, butirato, formiato
Bacterias homoacetogénicas  (Madigan  et al ., 1998) I. La síntesis de acetato es el resultado del metabolismo energético Acetoanaerobium noterae Acetobacterium woodii Acetobacterium wieringae Acetogenium kivui Acetitomaculum ruminis Desulfotomaculum orientis Sporomusa paucivorans Eubacterium limosum II. Síntesis de acetato en el metabolismo autotrófico  Bacterias homoacetogénicas autotróficas Bacterias reductoras de sulfato autotróficas
Algunas características de las bacterias reductoras de sulfato  (Madigan  et al ., 1998) Género Morfología Gram Especies reportadas Desulforidina y otras características Grupo I. Reductores de sulfato: no oxidantes de acetato Desulfovibrio Desulfomicrobium Desulfobotulus Desulfotomaculum Desulfomonile Desulfobacula Desulfobulbus Thermodesulfobacterium Bacilos curvos Bacilos móviles Vibrios Bacilos rectos o curvos Bacilos Ovales o cocos Ovoides  Bacilos - - - - - - - - 14 2 1 4 1 1 3 1 + - - - - - - + Grupo II. Reductores de sulfato: oxidantes de acetato Desulfobacter Deulfobacterium Desulfococcus Desulfonema Desulfosarcina Desulfoarculus Desulfacinum Desulforhabdus Thermodesulforhabdus Bacilos Bacilos Cocos Filamentos Cocos en paquetes Vibrios Cocos u ovales Bacilos Bacilos - - - + - - - - - 4 3 2 2 1 1 1 1 1 - - + + - - - - -
Algunas características de las bacterias metanogénicas  (Holt  et al ., 1994) Género Morfología Gram Especies reportadas Sustratos Grupo I Methanobacterium Methanobrevibacter Methanosphaera Methanothermus Bacilos alargados Bacilos cortos Cocos Bacilos + ó – + + + 13 3 1 2 H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato Metanol + H 2 H 2  + CO 2 Grupo II Methanococcus Methanomicrobium Methanogenium Methanospirillum Methanoplanus Methanoculleus Methanocorpusculum Methanolacinia Cocos irregulares Bacilos cortos Cocos irregulares Espiral Células en forma de placa Cocos irregulares en agregados Cocos irregulares Cocos grandes - - - - - - - - 7 2 4 1 2 4 5 1 H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2  y formiato H 2  + CO 2 Grupo III Methanosarcina Methanolobus Methanohalobium Methanococoides Methahalophilus Methanotrix (Methanosaeta) Cocos grandes e irregulares en paquetes Cocos irregulares Cocos irregulares Cocos irregulares Cocos irregulares Bacilos alargados o filamentos + - - - - - 6 3 1 2 4 2 Acetato, Metanol, Mono, di ó trimetil aminas Metanol, mono, di ó trimetil aminas Metanol, mono, di y trimetil aminas Metanol, mono, di y trimetil aminas Metanol, mono, di y trimetil aminas Acetato
Sustratos tipo CO 2 Dióxido de carbono (con electrones derivados de H 2 , algunos alcoholes o piruvato) Formiato (HCOO - ) Monóxido de carbono (CO) Sustratos de metilo Metanol (CH 3 OH) Metilamina (CH 3 NH 3 + ) Dimetilamina [(CH 3 ) 2 NH 2 + ] Trimetilamina [(CH 3 ) 3 NH + ] Metilmercaptano (CH 3 SH) Dimetilsulfuro [(CH 3 ) 2 S] Sustratos acetotróficos Acetato (CH 3 COO - ) Sustratos convertibles a metano (Madigan  et al ., 1998)
Lodos Anaerobios Granulares
Estructura del gránulo
Kato  et al ., 1997 Aerobios Facultativos Metanótrofos Sulfatorreductores Acidogénicos Acetogénicos Hidrogenotrofos Metanogénicos Sulfatorreductores SUSTRATO CH 4 CO 2 H 2 S O 2
Biodegradación anaerobia
 
 
 
AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS
Análisis Microbiológicos Feed Biogas 10 -1 10 -2 -----------------10 -9 10 -10 Microbial counts (R2A, WWA) Strain isolation Strain identification Sherlock® Microbial Identification System (CFA analysis) 16S rDNA sequencing  Unidentified strains Carbon sources Anaerobic growth Morphology, Gram, etc
Reactores Anaerobios ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object]
TIPOS DE REACTORES TIPO DE REACTOR CARACTERÍSTICAS Discontinuo Alto rendimiento en la eliminación de componentes individuales Tanque agitado de flujo continuo  CSTR Digestión anaerobia de lodos y aguas concentradas, balsas aireadas, estabilización de estanques, tratamiento de lodos Flujo pistón Tratamiento de lodos activados, tratamiento de balsas aireadas, estabilización de estanues, nitrificación, alta eliminación de componenetes individuales Lecho empacado  Tratamiento aerobio y anaerobio, nitrificación y desnitrificación Lecho fluidificado Tratamiento aerobio con baja concentración de DBO, biodegradación de compuestos orgánicos tóxicos, Tratamiento anaerobio con baja DBO, desnitrificación Contacto biológico rotatorio (RBC) Tratamiento aerobio, eliminación de productos orgánicos, nitrificación
Reactores UASB  V  T = 35ºC TRH Inóculo
Reactores empacados con soporte de PVC colonizado
Reactor EGSB
Disposición de los Reactores Con recirculación (de células sedimentadas, del influente después de la sedimentación) Tratamiento aerobio y anaerobio En serie Nitrificación, desnitrificación, remoción de fosfato, Eliminación de DBO, anaerobio en etapas. En paralelo En plantas con elevados flujos de aguas Híbridos Tratamientos combinados para la remoción completa de contaminantes: DBO, nitrificación, desnitrificación  Discontinuo secuencial Eliminación de productos orgánicos biodegradables peligrosos, procesos aerobios-anaerobios, eliminación de materia orgánica , nitrógeno y fósforo
GRACIAS Dra. Florina Ramírez Vives Departamento de Biotecnología, UAM-Iztapalapa San Rafael Atlixco 186, Col. Vicentina 09340 México, D.F. Tel/Fax: (55) 50804-4723 E-mail: frav@xanum.uam.mx

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Curso microanaerobia22222

  • 1. Microbiología Anaerobia Dra. Florina Ramírez Vives Laboratorio de Tratamiento de Aguas Residuales Departamento de Biotecnología Universidad Autónoma Metropolitana Iztapalapa CURSO
  • 2. ¿Sabías que los microorganismos ayudan a limpiar las aguas residuales?
  • 3. Características diferenciadoras de los tres dominios (Madigan et al ., 1998) Característica Bacteria Archaea Eukaria DNA circular Presente Presente Ausente Núcleo encerrado en una membrana Ausente Ausente Presente Pared celular Ácido murámico Ausencia del ácido murámico Ausencia del ácido murámico Lípidos de membrana Uniones éster Uniones éter Uniones éster RNA polimerasas 1 (4 subunidades) Varias (de 8 a 12 subunidades c/u) 3 (de 12 a 14 subunidades c/u) Sensibilidad al cloramfenicol, estreptomicina y kanamicina Sí No No Metanogénesis No Sí No Reducción de S 0 a H 2 S Sí Sí No Desnitrificación Sí Sí No Quimiolitotrofía (Fe, S, H 2 ) Sí Sí No
  • 4.
  • 5. Relación de los microorganismos con el Oxígeno Anaerobios Aerotolerantes Obligados Obligados Facultativos Microaerofílicos Aerobios
  • 6. Reducción del oxígeno hasta agua mediante la incorporación secuencial de electrones O 2 + e -  O 2 - O 2 - + e - + 2 H +  H 2 O 2 H 2 O 2 + e - + H +  H 2 O + OH - OH - + e - + H +  H 2 O O 2 + 4 e - + 4 H +  2 H 2 O
  • 7. Enzimas que actúan sobre especies moleculares derivadas del oxígeno Catalasa H 2 O 2 + H 2 O 2  2 H 2 O + O 2 Peroxidasas H 2 O 2 + NADH + H +  2 H 2 O + NAD + Superóxido dismutasa O 2 - + O 2 + 2 H +  H 2 O 2 + O 2 Superóxido dismutasa/catalasa 4 O 2 - + 4 H +  2 H 2 O + 3 O 2
  • 8. Grupos representativos de las bacterias anaerobias Bacteria Archaea Anaerobias Aerotolerantes Bacterias del ácido láctico Anaerobias Obligadas Clostridios Homoacetogénicas Bacterias intestinales Sulfatoreductoras Extremófilas Metanogénicas Extremófilas
  • 9. Degradacion Anaerobia de la materia organica Materia orgánica AGV H 2 + CO 2 acetato Hidrólisis, fermentación Acetogénesis Metanogénesis Metanogénesis CH 4 + CO 2 H 2 S + CO 2 Fermentativas, acetogénicas y BSR Metanogénicas y BSR Metanogénicas y BSR
  • 10.
  • 11.
  • 12.
  • 13. Bacterias Fermentativas Microorganismos Productos formados Acetobacterium woodii, Clostridium aceticum, Clostridium formiaceticum Clostridium thermoaceticum, Acetogenium kivui (termófila) Acetato Butyrobacterium methylotrophicum Eubacterium sp , Acidaminococcus sp Acetato, butirato Clostridium sp . Acetato, butirato, etanol Propionibacterium sp ., Anaerovibrio sp ., Veillonella sp . Acetato, propionato Lactobacillus sp ., Thermoanaerobium brockii Acetato, etanol, lactato, Bifidobacterium sp . Acetato, lactato Ruminococcus sp . Acetato, lactato, formiato Leptotrichia sp ., Streptococcus sp. Lactato Succinivibrio sp . Succinato Butyrivibrio sp., Fusobacterium sp . Butirato Megasphaera sp . Butirato, isobutirato, valerato, isovalerato, caproato Thermobacteroides acetoethilicus Etanol, acetato, butirato, isobutirato Thermoanaerobacter ethanolicus Etanol, acetato, lactato, isobutirato, isovalerato Clostridium thermosaccharolyticum Etanol, acetato, lactato, butirato, formiato
  • 14. Bacterias homoacetogénicas (Madigan et al ., 1998) I. La síntesis de acetato es el resultado del metabolismo energético Acetoanaerobium noterae Acetobacterium woodii Acetobacterium wieringae Acetogenium kivui Acetitomaculum ruminis Desulfotomaculum orientis Sporomusa paucivorans Eubacterium limosum II. Síntesis de acetato en el metabolismo autotrófico Bacterias homoacetogénicas autotróficas Bacterias reductoras de sulfato autotróficas
  • 15. Algunas características de las bacterias reductoras de sulfato (Madigan et al ., 1998) Género Morfología Gram Especies reportadas Desulforidina y otras características Grupo I. Reductores de sulfato: no oxidantes de acetato Desulfovibrio Desulfomicrobium Desulfobotulus Desulfotomaculum Desulfomonile Desulfobacula Desulfobulbus Thermodesulfobacterium Bacilos curvos Bacilos móviles Vibrios Bacilos rectos o curvos Bacilos Ovales o cocos Ovoides Bacilos - - - - - - - - 14 2 1 4 1 1 3 1 + - - - - - - + Grupo II. Reductores de sulfato: oxidantes de acetato Desulfobacter Deulfobacterium Desulfococcus Desulfonema Desulfosarcina Desulfoarculus Desulfacinum Desulforhabdus Thermodesulforhabdus Bacilos Bacilos Cocos Filamentos Cocos en paquetes Vibrios Cocos u ovales Bacilos Bacilos - - - + - - - - - 4 3 2 2 1 1 1 1 1 - - + + - - - - -
  • 16. Algunas características de las bacterias metanogénicas (Holt et al ., 1994) Género Morfología Gram Especies reportadas Sustratos Grupo I Methanobacterium Methanobrevibacter Methanosphaera Methanothermus Bacilos alargados Bacilos cortos Cocos Bacilos + ó – + + + 13 3 1 2 H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato Metanol + H 2 H 2 + CO 2 Grupo II Methanococcus Methanomicrobium Methanogenium Methanospirillum Methanoplanus Methanoculleus Methanocorpusculum Methanolacinia Cocos irregulares Bacilos cortos Cocos irregulares Espiral Células en forma de placa Cocos irregulares en agregados Cocos irregulares Cocos grandes - - - - - - - - 7 2 4 1 2 4 5 1 H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 y formiato H 2 + CO 2 Grupo III Methanosarcina Methanolobus Methanohalobium Methanococoides Methahalophilus Methanotrix (Methanosaeta) Cocos grandes e irregulares en paquetes Cocos irregulares Cocos irregulares Cocos irregulares Cocos irregulares Bacilos alargados o filamentos + - - - - - 6 3 1 2 4 2 Acetato, Metanol, Mono, di ó trimetil aminas Metanol, mono, di ó trimetil aminas Metanol, mono, di y trimetil aminas Metanol, mono, di y trimetil aminas Metanol, mono, di y trimetil aminas Acetato
  • 17. Sustratos tipo CO 2 Dióxido de carbono (con electrones derivados de H 2 , algunos alcoholes o piruvato) Formiato (HCOO - ) Monóxido de carbono (CO) Sustratos de metilo Metanol (CH 3 OH) Metilamina (CH 3 NH 3 + ) Dimetilamina [(CH 3 ) 2 NH 2 + ] Trimetilamina [(CH 3 ) 3 NH + ] Metilmercaptano (CH 3 SH) Dimetilsulfuro [(CH 3 ) 2 S] Sustratos acetotróficos Acetato (CH 3 COO - ) Sustratos convertibles a metano (Madigan et al ., 1998)
  • 20. Kato et al ., 1997 Aerobios Facultativos Metanótrofos Sulfatorreductores Acidogénicos Acetogénicos Hidrogenotrofos Metanogénicos Sulfatorreductores SUSTRATO CH 4 CO 2 H 2 S O 2
  • 22.  
  • 23.  
  • 24.  
  • 26. Análisis Microbiológicos Feed Biogas 10 -1 10 -2 -----------------10 -9 10 -10 Microbial counts (R2A, WWA) Strain isolation Strain identification Sherlock® Microbial Identification System (CFA analysis) 16S rDNA sequencing Unidentified strains Carbon sources Anaerobic growth Morphology, Gram, etc
  • 27.
  • 28. TIPOS DE REACTORES TIPO DE REACTOR CARACTERÍSTICAS Discontinuo Alto rendimiento en la eliminación de componentes individuales Tanque agitado de flujo continuo CSTR Digestión anaerobia de lodos y aguas concentradas, balsas aireadas, estabilización de estanques, tratamiento de lodos Flujo pistón Tratamiento de lodos activados, tratamiento de balsas aireadas, estabilización de estanues, nitrificación, alta eliminación de componenetes individuales Lecho empacado Tratamiento aerobio y anaerobio, nitrificación y desnitrificación Lecho fluidificado Tratamiento aerobio con baja concentración de DBO, biodegradación de compuestos orgánicos tóxicos, Tratamiento anaerobio con baja DBO, desnitrificación Contacto biológico rotatorio (RBC) Tratamiento aerobio, eliminación de productos orgánicos, nitrificación
  • 29. Reactores UASB V T = 35ºC TRH Inóculo
  • 30. Reactores empacados con soporte de PVC colonizado
  • 32. Disposición de los Reactores Con recirculación (de células sedimentadas, del influente después de la sedimentación) Tratamiento aerobio y anaerobio En serie Nitrificación, desnitrificación, remoción de fosfato, Eliminación de DBO, anaerobio en etapas. En paralelo En plantas con elevados flujos de aguas Híbridos Tratamientos combinados para la remoción completa de contaminantes: DBO, nitrificación, desnitrificación Discontinuo secuencial Eliminación de productos orgánicos biodegradables peligrosos, procesos aerobios-anaerobios, eliminación de materia orgánica , nitrógeno y fósforo
  • 33. GRACIAS Dra. Florina Ramírez Vives Departamento de Biotecnología, UAM-Iztapalapa San Rafael Atlixco 186, Col. Vicentina 09340 México, D.F. Tel/Fax: (55) 50804-4723 E-mail: frav@xanum.uam.mx