El ensayo mide la concentración efectiva de una muestra que reduce la emisión de luz de la bacteria Photobacterium phosforeum en un 50%. La bacteria es anaeróbica facultativa y muy sensible a sustancias tóxicas. Uno de los parámetros importantes para el análisis es mantener el pH entre 6 y 8 para evitar falsos resultados de toxicidad.