El documento describe los diferentes tipos y controles de calidad de las formas farmacéuticas, incluyendo formas estériles y no estériles. Explica los métodos para evaluar la esterilidad, incluyendo la inoculación directa y filtración por membrana. También describe los ensayos para detectar endotoxinas/pirógenos, como la prueba de respuesta febril en conejos y el ensayo de lisado de amebocitos de Limulus (LAL), que incluye métodos gel-clot, turbidimétric

1. BENEMERITA UNIVERSIDAD
AUTÓNOMA DE PUEBLA
INSTITUCIÓN
ENDOTOXINAS
TEMA
CONTROL DE FORMAS
FARMACEUTICAS
MATERIA
CESAR TECOZAUTLA VERELA
DOCENTE
ALEXIA DEL ROSARIO GONZALEZ
ESPINOSA
PONENTE

2. TIPOS DE FORMAS FARMACEUTICAS
 FORMAS FARMACEUTICAS ESTERILES: Exentos de contaminantes bacterianos.
 Preparados estériles líquidos:
 De pequeño volumen (hasta 100 ml).
 De gran volumen (mayor a 100 ml).
 Polvos estériles
 Para reconstruir (antibióticos).
 Ungüentos estériles
 Oftálmicos.
 Gotas estériles
 Oftálmicos.
 FORMAS FARMACEUTICAS NO ESTERILES: Aquellos preparados que permiten la presencia
de una carga bacteriana en cantidad limitada (de acuerdo en las especificaciones de la
farmacopea).

3. Estos están propensos a contaminarse por bacterias, mohos y levaduras:
• Mala utilización de las buenas prácticas de manufactura (BPM).
• Falta de capacitación por parte del personal.
• Durante su uso.

4. Calidad Microbiológica de las Formas Farmacéuticas
Controles de Calidad en Productos Estériles
 Esterilidad
 Endotoxinas / Pirógenos
Controles de Calidad en Productos no Estériles
 Métodos de recuento microorganismos indicadores.
 Métodos de detección de patógenos:
• Staphylococcus aureus
• Pseudomona aeruginosa
• Salmonella spp
• Escherichia coli

5. ”
“
Esterilidad
Se fundamenta en establecer un procedimiento para establecer la ausencia / presencia de
microorganismos aerobios y/o anaerobios facultativos viables en cada producto final.

6.  Inoculación directa
 Penicilinas o cefalosporinas: Adición de β-lactamasa usando no más de 100 UFC en el volumen apropiado
de Staphylococcus aureus ATCC 6538.
Incubar a la temperatura indicada, un número representativo de
unidades del lote 4% de las unidades de los medios de cultivo por 14
días, con ausencia de desarrollo.
Inoculación directa

7. Filtración por membrana
 Siempre que la naturaleza del producto lo permita: productos acuosos, con base alcohólica, oleosos,
y solubles o miscibles en solventes.
 Tipo de membrana:
 Membranas de nitrato de celulosa: Para soluciones acuosas, oleosas y con bajo contenido
de alcohol.
 Membranas de acetato de celulosa: Para soluciones con alto contenido de alcohol.
1. Antes de efectuar la prueba, se filtra el diluyente apropiado para la muestra.
2. Se transfiere el analito al equipo.
3. Se transfiere la membrana a cada uno de los medios utilizados.
Incubar a la temperatura indicada, un número representativo de
unidades del lote 4% de las unidades de los medios de cultivo por 14
días, con ausencia de desarrollo.

10. Toxinas bacterianas
Componentes que dañan directamente los tejidos o bien ponen en marcha actividades biológicas destructivas.

12. • Las EB se liberan continuamente en el medio en que se encuentran las bacterias, en pequeñas
cantidades durante su división y en mayoría, durante su lisis. Por esto, un producto estéril no
necesariamente estará libre de EB/piretógenos.
• Se define como piretógeno a toda sustancia que, cuando es inyectada en sangre o LCR en humanos o
en animales de experimentación, produce fiebre.
• La importancia de las EB radica en su naturaleza ubicua.
• Mayor toxicidad en relación a otros piretógenos
• Estabilidad frente a condiciones extremas de tratamiento
• Su tamaño demasiado pequeño para ser retenidas por filtros esterilizantes convencionales.
Importancia

13. Respuesta febril en conejos
• Vigencia por más de 40 años.
• En la prueba se inocula un conejo con una muestra del
producto para determinar la presencia o ausencia de
pirógenos.
• La presencia de un pirógeno en la solución , causará el
aumento de la temperatura corporal del animal.
• Los conejos tienen respuestas de temperatura ante las
endotoxinas similares a los seres humanos.

14. La farmacopea de EEUU
Todos los materiales, diluyentes y
soluciones utilizados deben
esterilizarse y liberarse de pirógenos.
Se seleccionan 3 conejos adultos y
sanos ( por solución a analizar) y se
albergan a una temperatura entre 20
y 30 °C, además de aislarlos de todo
tipo de disturbio o excitación
La temperatura basal del conejo se
mide dentro de los 30 minutos
anteriores a la prueba. No debe
exceder los 39.8 °C
Los conejos se analizan en
temperaturas similares a su hábitat y
se los mantiene en ayunas durante
toda la prueba, aunque en algunos
casos pueden ingerir agua.
La solución de prueba se administra
por vía intravenosa en la oreja del
animal, después de ser calentadas de
35 a 39 °C
Tasa de administración no debe
exceder los 10 ml/kg durante 10
minutos
Las lecturas de temperatura se toman
en intervalos de 30 minutos durante
las siguientes 1 a 3 horas
Un conejo solo puede estar sujeto a
una solución de prueba una vez cada
48 horas y después de 2 semanas si la
TC aumenta por encima de los 0.6 °C
por encima del VN.
Una prueba negativa:
• Un aumento de la temperatura del conejo menor a 0.5 °C.
• En consecuencia, la solución de la prueba se considera libre de pirógenos.
• Un aumento de temperatura de 0.5 °C o mayor exige la repetición de la prueba en 5 animales
modelo más.
• Un resultado negativo es un aumento de temperatura de 0.5 grados o mayor en solo 2 de 8
conejos o si la temperatura total aumenta en los 8 conejos no excede 3.3 °C.

15. Ensayo de lisado de amebocitos de Limulus
(LAL)
 Los amebocitos, en el caso del cangrejo Limulus
polyphemus, son equivalentes a los leucocitos en
los vertebrados, teniendo una función protectora
frente a patógenos que pueden dañar al animal.
 Los amebocitos poseen enzimas que
desencadenan una cascada de reacciones cuyo
producto final es un gel compuesto por proteínas
coaguladas.
 LAL es el ensayo de referencia para la detección
de pirógenos en la industria, debido a que las
endotoxinas bacterianas son los pirógenos más
abundantes.

17. Método Gel-clot
 Consiste en determinar la presencia de un gel en el
lisado: el proceso de gelificación se debe a la
coagulación de las proteínas que provocan las
endotoxinas.
 Este método es el más utilizado para el ensayo LAL,
siendo el método de elección recomendado por la
FDA.
 Se puede realizar el ensayo, de manera cualitativa,
siendo la aparición del gel el resultado positivo del
test, o de manera semicuantitativa, ya que la cantidad
de gel que se forma es proporcional a la
concentración de endotoxinas

18. Método turbidimétrico LAL
 Mide el cambio de turbidez que acompaña a la formación del gel como resultado de la transformación del
coagulógeno en coagulina.
 Valoración turbidimétrica de punto final: se basa en la relación cuantitativa entre la concentración de
endotoxinas y la turbidez (absorbancia o transmitancia) de la mezcla de reacción al término de un período de
incubación.
 Valoración turbidimétrica cinética: es un método para medir el tiempo necesario para alcanzar una absorbancia
o transmitancia predeterminada de la mezcla de reacción (tiempo de iniciación) o la velocidad de desarrollo de
turbidez. El ensayo se efectúa a la temperatura de incubación recomendada por el fabricante del lisado (por lo
general 37 ± 1o C).

19. Método cromogénico LAL
 La cascada de reacciones enzimáticas que se produce en los amebocitos de Limulus son capaces de romper
enlaces de péptidos que se encuentran unidos a moléculas de p-nitroanilina.
 Añadiendo un péptido unido a p-nitroanilina al lisado de reactivo de LAL, cuando hay endotoxinas en el medio se
desarrolla color en la disolución, por lo que se puede llevar a cabo a detección de las endotoxinas por un método
cromogénico.
 La valoración cromogénica de punto final: se basa en la relación cuantitativa entre la concentración de
endotoxinas y la liberación del cromóforo al término de un período de incubación.
 La valoración cromogénica cinética: es un método para medir el tiempo (tiempo de iniciación) necesario para
alcanzar una absorbancia predeterminada de la mezcla de reacción o la velocidad de desarrollo de color. El
ensayo se efectúa a la temperatura de incubación recomendada por el fabricante del lisado (por lo general 37 ± 1
°C).

20.  http://www.farmacopea.org.mx/Repositorio/Documentos/267.pdf
 https://books.google.com.mx/books?id=W77xBQAAQBAJ&pg=PA73&lpg=PA73&dq=Determinaci%C3%B3n+del
+poder+inhibitorio+intr%C3%ADnseco.&source=bl&ots=IYZWFl0zM4&sig=kSjdeh4nxAXhWeS1JJAswFnMbdI&
hl=es419&sa=X&ved=2ahUKEwjbkJ3ao_HdAhXTIjQIHUHfCOkQ6AEwAHoECAkQAQ#v=onepage&q=Determin
aci%C3%B3n%20del%20poder%20inhibitorio%20intr%C3%ADnseco.&f=false
 http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis251.pdf
 http://www.anmat.gob.ar/webanmat/mercosur/ACTA01-14/AGREGADO_XVI/2-
14/uni_XV/ANEXO_V._Ensayo_de_endotoxinas_bacterianas.pdf
 https://www.wakopyrostar.com/blog-es/post/uso-del-metodo-turbidimetrico-en-el-ensayo-lal/
 http://www.anmat.gov.ar/webanmat/fna/flip_pages/Farmacopea_Vol_I/files/assets/basic-html/page191.html
 http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-75152004000100008