1. Forough L. Nowrouzian
Nahid Karami
Christina Welinder-Olsson
Christina Åhrén
SARA PUERTA CALDERÓN
NICOLÁS RINCÓN
III SEMESTER
VIRULENCEGENETYPING OF METHICILLIN-
RESISTANT STAPHYLOCOCCUS AUREUS AS A
COMPLEMENT IN EPIDEMIOLOGICALTYPING
Journal of Microbiological Methods

2.  GENERALITIES
• Staphylé: “grape”, Coccus:
“granule”
• Gram positive bacteria.
• Diameter of about 0.5-1 um
• Includes at least 40 species, 24
subspecies.
Staphylococcus

3.  GENERALITIES
• Facultative anaerobes.
• Grown in conditions with
high concentrations of NaCl
(10%)
• Temperature 18-40 ° C.
Staphylococcus

4.  GENERALITIES
• Pathogens in humans.
• The non-sporulating
bacteria more resistant to
heat, desiccation and
salinity.
Staphylococcus

5.  GENERALITIES
• Facultative anaerobes
bacteria.
• Gram positive bacteria.
• Production of coagulase,
catalase.
• Stationary and not sporulated.
Staphylococcus aureus

6.  GENERALITIES
• Widely distributed in the
environment.
• Part of the flora of many sites
of the body.
• Well grows on agar at 37 ° C.
• One of the most resistant
microorganisms known.
Staphylococcus aureus

7. Scalded skin
syndrome
Food
poisoning
Toxic Shock
Syndrome
Skin
infections
Bacteremia Endocarditis Pneumonia Osteomyelitis
Diseases for presence of S. aureus.

8.  The factors that influence
virulence are:
•The ability toxigenic pathogen.
•The invasiveness of the
pathogen.
VIRULENCE The ability of a pathogen
to cause infection.

9. Coagulasa. Hemolysin. Leucocidin. Hyaluronidase. Staphylokinase.
Lipases. Enterotoxins.
Exfoliative
toxin.
Protein A.
Penicillinase or
b-lactamase.
Catalase.
Pyrogenic
exotoxin.
Toxic Shock
Toxin (TSST-1).
VIRULENCE S. aureus

10. METHICILLIN
It prevents the formation of
crosslinks between the polymer
chains linear peptidoglycan
It is the major component of the cell wall of
gram positive bacteria
It inhibits the synthesis of
the bacterial cell wall.

11. METHICILLIN
It acts by
Union Competitive inhibition
Trasnpeptidasa the enzyme (protein
binding to penicillin PUP) used by the
battery
To generate crosslinks (D-alanyl-alanine) used in
the synthesis of peptidoglycan

12. Staphylococcus
Pathogens in
humans.
Staphylococcus
aureus
Gram positive
bacteria
Virulence factors
Diseases Resistance
Methicillin

13.  OBJETIVE
• Evaluate and describe the utility of virulence gene
determination as a complementary tool for
epidemiological typing of MRSA in relation to spa
typing and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE).

14.  AISLAMIENTOS
• Almacenados los MRSA con
genotipo PFGE desde 1983 en
Suecia.
• Determinación de patrones
visuales (TENOVER –
BioNumerics 6.6)

15. • Registro de datos para cada
aislamiento.
• Descripción de los
aislamientos.
• Fueron escogidos 63
aislamientos entre 1994-201,
que representaban los MRSA
más frecuentes de área.

16.  PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa)
• Técnica desarrollada por Kary Mullis en los 80’s.
• Su objetivo es la amplificación directa de un gen o un
fragmento de DNA o indirecta de un RNA.
• Aumenta el número de copias de una secuencia de ADN.

17.  FUNDAMENTOS
• Emplear ciclos de altas y bajas temperaturas
alternadas para separar las hebras de ADN
recién formadas entre sí tras cada fase
de replicación.
• Dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse
para poder duplicarlas nuevamente.

18.  METODOLOGÍA
• Desnaturalización del DNA para
dar hebras sencillas
• Hibridación especifica de la
hebra sencilla con un
oligonucleótido
• Replicación de la hebra sencilla
por una DNA polimerasa a partir
de oligonucleótidos anterior
como cebador.

19.  ALGUNOS REACTIVOS
• Buffer
• DNA polimerasa
• MgCl2

20. Comparación entre las cepas para
el propósitos epidemiológicos
Se identificaron 30 genes
relacionados con la virulencia
9 genes de adhesinas 21 genes tóxicos
Relación de los factores de virulencia con los genes

21. Carecieron de los genes lukm, seh, etb, sed, selr, eta, sea, selp, seb y etv.
Presentaron los genes Ipb, cIfA, cifB y fnbB
Todos las S. Aureus aislados

23. • Todos los 7 aislados revelaron
un perfilVF idéntico
ST8 (VF A) recogido
en 7 años
• Todos los 10 aislados revelaron
un perfilVF idéntico
ST80 (VF B)
recogido en 13 años

24. • 17 de los 22 aislados presentaron
un perfilVF idéntico
ST30 (VF C)
recogido en 16 años
• 14 de los 20 aislados presentaron
un perfilVF idéntico
ST45 (VF D)
recogido en 8 años

26.  La elección del método de tipificación molecular depende del
propósito de la investigación
 Los resultados demuestran claramente que ninguno de los
métodos de genotipificación pueden identificar por si solos la
tipificación epidemiológica

27. Investigator´s Principal statement Agree or disagree
Carpaij et al Between different strains of STs the
VF profiles were completely
different
Agree
Fossum Moen et al It is likely that strains belonging to
the same ST demonstrate similarVF
Agree
Peacock et al It is unlikely that strains belonging to
the same ST demonstrate similarVF
Disagree
Cooper and Feil MLST (Multilocus Sequence Typing)
does not have the power to
completely study local epidemic
spread by S. aureus
Agree

28.  The deep understanding and determination about the
virulence factors profile of the MRSA, can have a great utility
for epidemiologic typing
 The identification of the specific genes related with the
virulence factors of the MRSA can help to develop new ways
of genetic treatment for patients infected with this bacteria

29.  When conducting research must keep of the comparison of
strains with epidemiological and clinical purposes, to maintei
infection control.
 With each research project must respect the established
protocols and make a proper selction of molecular
quantification methods for good typing