El documento describe cómo un microscopio de fluorescencia usa filtros y espejos para excitar muestras fluorescentes y observar la luz emitida. Un filtro de excitación solo permite que pase la radiación de la longitud de onda deseada para excitar las moléculas, mientras que un espejo dicroico refleja la luz de excitación e irradia la luz fluorescente emitida, la cual es enfocada a través de un filtro de barrera que bloquea la luz de excitación residual.

1. La luz de una fuente de longitud de onda
múltiple, se mueve a través de un filtro excitador
que solo permite que pase la radiación excitada
de la longitud de onda deseada.

2. Esta radiación es reflejada por el filtro
dicromático y enfocada por la lente del objetivo
sobre la muestra, las moléculas fluorescentes de
la muestra se excitan y emiten luz (por
fluorescencia) de una longitud de onda
específica y mayor.

3. Esta luz es enfocada por el objetivo y la mayor
parte pasa a través del filtro dicromático y no se
refleja. Un filtro de barrera final bloquea toda la
luz residual con la frecuencia de la radiación de
excitación.

4. Filtros: Retienen la radiación ultra-violeta, peligrosa para el
ojo humano, dejando pasar solamente la radiación visible, que
no es peligrosa. Existen un gran número de juegos de filtros
de excitación y de emisión para los diferentes fluorocromos.
1. Primer filtro de excitación: Ubicada entre la fuente de luz y
el preparado. Permite el paso de ondas de luz con longitud
que caiga en el rango azul con el fin que el preparado sea
alcanzado exclusivamente por la luz azul y produzca emisión
de luz fluorescente. En el esquema está seleccionando luz de
longitud de onda entre 450 y 490 nm (azul)

5. 2. Segundo filtro de barrera: Es el filtro que selecciona la luz
de longitud de onda fluorescente. En este caso deja pasar la
luz de longitud de onda 520 a 560 nm. Ubicada antes del
ocular para prevenir daños retinianos que podrían ser
causados por rayos ultravioleta que escapan el espejo
dicrómico. Corta completamente la luz de excitación no
deseada, es decir selecciona la longitud de onda de emisión
del fluorocromo.
3. Espejo dicroico: Refleja la luz de ciertas longitudes de onda
y de dejar pasar otras. En este caso refleja luz de longitud de
onda menos de 510 nm (por ello refleja la luz incidente azul) y
deja pasar la luz de longitud de onda superior a 510 nm,
dejando pasar la luz verde emitida por el fluorocromo .
Permite la separación de la luz de excitación y la
fluorescencia.

7. El microscopio utiliza el rango ultravioleta del
espectro luminoso en lugar del rango visible,
bien para aumentar la resolución con una
longitud de onda menor o para mejorar el
detalle.

8. El vidrio, al no transmitir las longitudes de onda
más cortas de la luz ultravioleta, es sustituido
por cuarzo , fluorita o sistemas de espejos
especializados.