La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que permite amplificar una secuencia de ADN de manera selectiva. Consiste en repetir ciclos que incluyen la desnaturalización del ADN, la unión de cebadores y la extensión de las cadenas por medio de una ADN polimerasa. Esto permite copiar millones de veces la secuencia de interés en unas pocas horas. La PCR se lleva a cabo en un termociclador y requiere diversos insumos como dNTPs, cebadores, tampón y

1. PCR Por: Karla Rocio Gurrola Rodriguez

2. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA Se usa para amplificar una secuencia de DNA 1983 (Rodríguez I y cols., 2004;Torres A y cols., 1995) Con ésta se consigue copiar millones de veces, en un par de horas, una secuencia predeterminada, dentro de una mezcla de ADN tan compleja como el propio genoma humano, donde la secuencia de interés representa tan sólo una diezmillonésima parte.

6. (Lodish y cols., 2006)

8. Mediante un calentamiento a 94°C, el ADN de doble cadena logra que sus cadenas se separen o desnaturalicen Actividad de la enzima decrece de manera muy rápida a partir de los 95ºC (vida media a 92.5ºC = 2h, a 95ºC = 40 min. y a 97.5ºC = 5 min.), por lo que a estas temperaturas o superiores es aconsejable disminuir el tiempo de incubación. Se rompen puentes de hidrogeno. Las bases nitrogenadas quedan expuestas Síntesis de novo. DESNATURALIZACIÓN (Rodríguez I y cols., 2004)

13. PCR DNA de cadena doble Melting 94 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 5’ 3’ 3’ 5’

14. PCR 3’ 5’ Calor DNA de cadena simple Melting 94 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 5’ 3’

15. PCR Hibridación de primers Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ Melting 94 o C

16. PCR Calor Calor 5’ Melting 94 o C Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 30 ciclos 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’

17. PCR Melting 94 o C Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 30ciclos 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’

18. PCR Calor Calor Melting 94 o C Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 30ciclos 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’

19. PCR Melting 94 o C Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 30ciclos 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’

20. PCR Fragmentos de tamaño definido Melting 94 o C Melting 94 o C Annealing Primers 50 o C Extension 72 o C Temperatura 100 0 50 Tiempo 30ciclos 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’

33. DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES

37. DUDAS??