La reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés Polymerase Chain Reaction) es, sin lugar a dudas, la técnica más importante y revolucionaria en biología molecular, debido a que permite obtener in vitro millones de copias de un fragmento de (ADN) a partir de una sola molécula.

1. PCR
reacción en cadena de la
polimerasa
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES IZTACALA
LICENCIATURA EN OPTOMETRIA
Correa Gallegos Jaime Moisés

2. • La reacción en cadena de la polimerasa (PCR
por sus siglas en inglés Polymerase Chain
Reaction) es, sin lugar a dudas, la técnica más
importante y revolucionaria en biología
molecular, debido a que permite obtener in vitro
millones de copias de un fragmento de (ADN) a
partir de una sola molécula.
• La PCR se basa en la replicación celular en la
que actúan varias proteínas para sintetizar dos
nuevas hebras de ADN a partir de otra que
funciona como molde.

3. El inventor de esta interesante técnica fue Kary
Mullis por la cual se le adjudicó el Premio Nobel de
Química en 1993. Utilizó la PCR para la
amplificación del gen de la b-globina humana y el
diagnóstico prenatal de la anemia falciforme desde
entonces la PCR ha revolucionado todos los
campos que estudian y manipula los ácidos
nucleicos.
Mullis se basó en la replicación del ADN en los
organismos eucariotas realizada por la DNA
polimerasa. Estas enzimas realizan la síntesis de
una cadena complementaria de DNA.

4. Partiendo de este principio, la reacción en
Cadena de la Polimerasa se basa en la
repetición de un ciclo formado por tres etapas:
1ª Desnaturalización del ADN doble cadena
*la doble hélice de ADN se separa en dos hebras.
Para ello se realiza una incubación de la muestra a
altas temperaturas (93-97ºC). La renaturalización
se producirá cuando la temperatura disminuya.

5. 2ª Hibridación de los cebadores a la zona 3´
específica de cada una de las hebras
•los cebadores se unen a las zonas 3´
complementarias que flanquean el fragmento que
queremos amplificar. Se realiza gracias a la
bajada de la temperatura (50-65ºC).

6. 3ª Extensión del cebador por actuación de la
DNA polimerasa
• En la tercera etapa (elongación) se produce la
síntesis de una cadena sencilla
(produciéndose un fragmento de doble
cadena por la complementariedad) en la
dirección 5´-> 3´ mediante la enzima DNA
polimerasa, la cual incorpora los
deoxinucleótidos fosfato presentes en el
medio siguiendo la cadena molde.

7. • El proceso se lleva a cabo en un termociclador. Un
aparato que realiza los ciclos en los tiempos y
temperaturas programadas de forma exacta.
•

8. • Como se muestra en la siguiente imagen , observamos que una vez
completado el primer ciclo, disponemos de 2 copias de la muestra
original, al final del segundo ciclo tenemos 4, al final del tercero
8...Si los ciclos se producen un número "n" de veces y suponiendo
que el número de copias de ADN se duplica en cada ciclo,
obtenemos una cantidad de ADN de 2n
, por lo que la amplificación
se realiza en forma de progresión geométrica.

10. • La detección del producto de la Reacción en Cadena de
la Polimerasa se realiza normalmente mediante corrido
electroforético . Dependiendo del tamaño de la
amplificación y de la resolución que deseemos
usaremos diferentes geles (agarosa, poliacrilamida) a
distintas concentraciones. La posterior visualización se
puede realizar con bromuro de etidio (lámpara de luz
UV), tinción de plata, fluorescencia, radiactividad
(radiografía).

12. • Gracias a esta técnica se han podido
realizar estudios genéticos en cualquier
campo de la ciencia. Por ejemplo, se
utiliza diariamente para la identificación de
cadáveres o en el estudio de escenas del
crimen para buscar rastros del culpable.
También se emplea en la biología, para
identificar cadenas genéticas de plantas,
animales o, sobre todo, microorganismos.
En la medicina se reúne la experiencia de
todos esos campos y se usa
principalmente para identificar gérmenes
agresores que se encuentran en nuestro
organismo.