Practica 1. Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té. Practica 2. Extracción y Determinación de Carotenoides a partir de distintos alimentos. Autores: Márcia Silva, Réka Maulide Cane

1. PRÁCTICAS DE INGREDIENTES BIOACTIVOS
MÁRCIA SILVA
RÉKA MAULIDE CANE
28 NOVIEMBRE 2011
INGREDIENTES BIOACTIVOS

2. Cálculo de
los
volúmenes
Ci = 1 g/L = 1000 mg/L
Vf = 100 µL
¿V1, V2, V3, V4,V5?  Ci . Vi = Cf . Vf ↔ Vi = Cf . Vf / Ci
Solución Cf (mg/L) Vi (µL) Vagua destilada añadida (µL)
1 0 0
100
2 100 10
90
3 200 20
80
4 400 40
60
5 600 60
40
EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS
EN HOJAS DE TÉ

3. Preparación de la curva
patrón
Cálculo de la recta patrón
Determinación de
polifenoles en la muestra
PRÁCTICA 1. EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE
COMPUESTOS FENÓLICOS EN HOJAS DE TÉ

4. Cálculo de la
recta patrón
Solución Concentración (mg/L) Absorbancia (A)
1 0 0
2 100 0,294
3 200 1,099
4 400 1,125
5 600 1,379
y = 2.82x
R² = 0.9998
Absorbancia(A)
Concentración (g/L)
Por este motivo se empleó
otra curva de calibrado más
robusta y fiable, donde
eliminamos estos dos puntos.
La ecuación de la recta
obtenida por la pareja fue
y = 2,82x.
EXTRACCIÓN, PURIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DE COMPUESTOS FENÓLICOS
EN HOJAS DE TÉ
La ecuación de la recta obtenida inicialmente no era fiable,
porque la R es inferior a 0,9 y por que los valores de absorbancia
de los patrones 200 y 400 son muy parecidos.

5. A partir de la ecuación de la recta obtenida y las absorbancias de cada fracción, se
calcularon la masa de compuestos fenólicos (por 1 g de extracto) y el porcentaje de
los mismos.
Ecuación de la recta: y = 2,82x y –absorbancias
x -concentraciones las soluciones.
Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té
Fracción Peso secoextracto (mg) Cextracto (mg/mL)
1- extracto inicial 2,2 2,2
2 0,5 0,5
3 1,1 1,1
4 0,4 0,4
Cálculo de las
concentraciones
Peso secoextracto (mg) = meppendorf+extracto - mappendorf
Vfraccións = 1,0 mL
Cextracto (mg/mL) = Peso secoextracto / Vfracción

6. Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té
Csoluciones (g/L) = Abs / 2,82
mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g) = Csoluciones (g/L) (1L / Cextracto (g/L))
% mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g) = (mcompuestos fenólicos (g) / mextracto (g)) 100 en
el extracto inicial
% mcomp. fenólicos (g) / mextracto (g) = [(mcomp. fenólicos (g) / mextracto (g)) / mextracto inicial
(g)] 100 en los fracciones 2, 3 y 4
Fracción Abs. (A) Csoluciones (g/L) Cextracto (g/L)
mcomp. fenólicos
(g) / mextracto (g)
% mcomp. fenólicos
(g) / mextracto (g)
1- extracto
inicial
1,110 0,394 2,2 0,177 17,7 %
2 0,002 7,09 10-4 0,5 1,42 10-3 0,1 %
3 0,774 0,264 1,1 0,240 24,9 %
4 0,418 0,148 0,4 0,370 37%

7. Extracción, Purificación y Determinación de compuestos fenólicos en hojas de té
Fracción
% mcomp.
fenólicos (g) /
mextracto (g)
1- extracto
inicial
17,7 %
2 0,1 %
3 24,9 %
4 37%
Discusión de los
resultados  Fracción extraída con metanol presentaba un mayor
contenido en compuestos fenólicos (37%) frente a las
fracciones extraídas con agua ( 0,1%) y con acetato de
etilo (24,9%).
 Agua es el disolvente menos eficaz para hacer la
extracción: los compuestos fenólicos presentan
polaridades altas.
 En una infusión de té se pierde parte de los
compuestos fenólicos del mismo (el té contiene un
30% /g de peso seco; mientras que la infusión
preparada en esta práctica contenía sólo el 17 % de
estos compuestos).
 Extracción y purificación de los compuestos fenólicos
presentes en las hojas de té empleando disolventes
orgánicos permite obtener una mayor cantidad de
estos compuestos bioactivos (37% y 24,9% ).

8. Extracción con éter de petróleo
Determinación de carotenoides por
cromatografia en capa fina (TLC)
PRÁCTICA 2. EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A
PARTIR DE DISTINTOS ALIMENTOS

9. Desarrollo de la
cromatografía en
capa fina (TLC)
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS
ALIMENTOS
La clorofila a sale más
alta que la clorofila b.
Los carotenoides en
función de la
concentración pueden
presentar un color:
 naranja-rojo (mayor
concentración)
 amarillo (menor
concentración)

10. Extracto de Tomate
liofilizado
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS
ALIMENTOS
 El beta-caroteno fue el que
más migró hacia arriba (fue con
el frente); presentaba un color
naranja con bordes amarillos
(porque hay menos intensidad),
(Rf ≈ 0,99).
 El licopeno también migró
hacia arriba y se encuentra más
cerca del beta-caroteno; La
luteína tiene una polaridad más
alta, migra menos hacia arriba
(Rf ≈ 0,97).

11. Discusión de los
resultados
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS
ALIMENTOS
 Extracto de pimentón – el princiipal
componente es la capsantina (color
rojo).
 Se pudieron distinguir distintas
bandas:
 Las de más arriba pueden
corresponder a una molécula de
capsantina unida a dos ácidos grasos.
 Las demás bandas corresponden a
otros esteres de la capsantina u otros
carotenoides.

12. Discusión de los
resultados
EXTRACCIÓN Y DETERMINACIÓN DE CAROTENOIDES A PARTIR DE DISTINTOS
ALIMENTOS
 Extracto de espinaca: es una fuente
importante de luteína.
En la placa 1, se observa que la espinaca
tiene una mezcla de las clorofilas a y b; las
bandas de color gris que aparecen pueden
deberse a que la clorofila haya perdido el
magnesio en su estructura, convirtiéndose
en feofitina.
 Extracto de zanahoria - bandas de beta-
caroteno, igual que en el tomate, pero
puede que la zanahoria tenga una mezcla
de isómeros.
Beta-caroteno ha migrado con el frente
hacia más arriba;
Alfa y el gamma-caroteno también eluirian
con el frente. La zanahoria también
contiene luteína.

13. PRÁCTICAS DE INGREDIENTES BIOACTIVOS
MÁRCIA SILVA
RÉKA MAULIDE CANE
28 NOVIEMBRE 2011
INGREDIENTES BIOACTIVOS
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