Este documento describe la vitamina A, incluyendo su estructura química, nombres, definición, actividad y unidades de medida. Explica que la vitamina A se presenta principalmente como ésteres como el acetato, propionato y palmitato de retinol. También proporciona detalles sobre las pruebas de identificación, límite de retinol, sustancias relacionadas y actividad para determinar la cantidad de vitamina A.

1. VITAMINA A
CH3
H3C CH3
O
R
CH3 CH3
R=H C20H30O PM: 286,5
R=CO-CH3 C22H32O2 PM: 328,5
R=CO-C2H5 C23H34O2 PM: 342,5
R=CO-C15H31 C36H60O2 PM: 524,9
Sinonimia - Palmitato de Retinol.
Definición - La Vitamina A refiere a un
número de sustancias de estructura muy similar
(incluyendo los isómeros (Z), que se encuentran en
tejidos animales y que poseen actividad semejante).
La sustancia principal y biológicamente más activa
es aquella que posee todos sus enlaces en posición
(E): todo-(E)-3,7-dimetil-9-(2,6,6-trimetilciclohex-
1-enil)nona-2,4,6,8-tetra-en-1-ol (C20H30O). La
vitamina A se emplea en forma de ésteres tales
como acetato, propionato y palmitato. La expresión
éster de retinol sintético se refiere a un éster de
retinol sintético (acetato, propionato o palmitato) o
una mezcla de ésteres de retinol sintético.
La actividad de la Vitamina A se debe expresar
en equivalentes de retinol (ER). 1 mg de ER
corresponde a la actividad de 1 mg de todo-(E)-
retinol. La actividad de los otros ésteres de retinol
se calcula estequiométricamente, de modo que 1 mg
de ER de Vitamina A equivale a la actividad de:
1,147 mg de acetato de todo-(E)-retinol,
1,195 mg de propionato de todo-(E)-retinol,
1,832 mg de palmitato de todo-(E)-retinol.
Se emplean también las Unidades
Internacionales (UI) para expresar la actividad de la
Vitamina A. 1 UI de Vitamina A equivale a la
actividad de 0,300 mg de todo-(E)-retinol . La
actividad de los otros ésteres de retinol se calcula
estequiométricamente, de modo que 1 UI de
Vitamina A equivale a la actividad de:
0,344 mg de acetato de todo-(E)-retinol,
0,359 mg de propionato de todo-(E)-retinol,
0,550 mg de palmitato de todo-(E)-retinol,
1 mg de equivalente de retinol corresponde a
3333 UI.
Caracteres generales - El acetato de retinol se
presenta como cristales de color amarillo pálido,
con un punto de fusión de aproximadamente 60 °C.
Cuando funde, el acetato de retinol, tiende a formar
una masa sobreenfriada.
El propionato de retinol se presenta como un
líquido oleoso pardo rojizo.
El palmitato de retinol es un sólido lipoideo
amarillo claro, o si se funde, un líquido oleoso
amarillo, con un punto de fusión de
aproximadamente 26 ºC.
Todos los ésteres de retinol son solubles o
parcialmente solubles en etanol, miscibles con
solventes orgánicos y prácticamente insolubles en
agua. La Vitamina A y sus ésteres son muy
sensibles a la acción del aire, luz, calor y los
agentes oxidantes y ácidos.
Sustancia de referencia - Ésteres de
retinol SR-FA.
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
[NOTA: efectuar la valoración y todos los
ensayos tan rápidamente como sea posible, evitando
la exposición a la luz actínica y al aire, a los agentes
oxidantes, a los catalizadores de oxidación, como
por ej., cobre, hierro), a los ácidos y al calor.
Identificación
Emplear la siguiente técnica cromatográfica:
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100.
Cromatografía) recubierta con gel de sílice para
cromatografía con indicador de fluorescencia, de
0,25 mm de espesor.
Fase móvil - Ciclohexano y éter (80:20).
Solución estándar - Preparar una solución de
aproximadamente 0,01 mg de Ésteres de
retinol SR-FA por ml (3,3 UI de cada éster por ml)
en ciclohexano. Estabilizar con una solución de
butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Solución muestra - Preparar una solución de
aproximadamente 3,3 UI de Vitamina A por ml en
ciclohexano. Estabilizar con una solución de
butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 3 ml de Solución muestra y 3 ml de Solución
estándar. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
254 nm: el cromatograma obtenido a partir de la
Solución estándar debe presentar las manchas
individuales de los ésteres correspondientes. El
orden de migración debe ser: acetato, propionato y
palmitato de retinol. La composición de la
Solución muestra se debe confirmar por la
correspondencia de la o las manchas principales
obtenidas a partir de la Solución estándar.

2. Límite de retinol
Fase estacionaria y Fase móvil - Proceder
según se indica en Identificación.
Solución muestra - Preparar una solución de
aproximadamente 330 UI de Vitamina A por ml en
ciclohexano. Estabilizar con una solución de
butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Solución estándar - Agitar 1 ml de la Solución
muestra con 20 ml de solución de hidróxido de
tetrabutilamonio 0,1 M en alcohol isopropílico,
durante 2 minutos y diluir a 100 ml con
ciclohexano. Estabilizar con una solución de
butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 3 μl de Solución muestra y 3 μl de Solución
estándar. Dejar secal las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
254 nm: a excepción de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra, ninguna mancha debe ser más intensa que
la mancha principal obtenida con la Solución
estándar (1 %). [NOTA: en el cromatograma
obtenido a partir de la Solución estándar se debe
observar sólo trazas o no se debe observar ninguna
mancha correspondiente al éster de retinol.]
Sustancias relacionadas
Determinar el máximo de absorción de la
solución empleada en el ensayo Actividad (ver 470.
Espectrofotometría ultravioleta y visible). La
solución debe presentar un máximo de absorción
entre 325 y 327 nm. Medir las absorbancias Al a
300, 350 y 370 nm y calcular la relación Al/A326
para cada longitud de onda: ninguna de las
relaciones Al/A326 debe ser mayor de:
0,593 a 300 nm.
0,537 a 350 nm,
0,142 a 370 nm.
ACTIVIDAD
Examinar por espectrofotometría de absorción
ultravioleta (ver 470. Espectrofotometría
ultravioleta y visible). Pesar exactamente entre 25 y
100 mg de Vitamina A, disolver en 5 ml de pentano
y diluir con alcohol isopropílico hasta una
concentración de 10 a 15 UI por ml. Determinar la
absorbancia a la longitud de onda de máxima
absorción, aproximadamente 326 nm. Calcular la
actividad de la Vitamina A en Unidades
Internacionales por g por la fórmula siguiente:
1.900 326
P
A V
100
en la cual A326 es la absorbancia a 326 nm, P es el
peso de Vitamina A en g, V es el volumen total al
que ha sido diluida la Vitamina A para dar una
concentración de 10 a 15 UI por ml y 1.900 es el
factor de conversión de la absorbancia específica de
los ésteres de retinol en Unidades Internacionales
por g.
ROTULADO
En el rótulo se debe indicar el número de
Unidades Internacionales por g y el nombre del
éster o ésteres.