metodo de extraccion del ADN resumen

1. EXTRACCIÓN DE ADN

2. Reactivos
Guisantes
Cloruro de sodio
Agua destilada
EDTA SDS al 20%
Etanol absoluto
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

3. Materiales
Probetas, vaso de precipitado, matraz erlenmeyer y embudo
Vaso de mortero y mortero Espátula
Tubos Eppendorf
Tubos de ensayo de 10 mL
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

4. Materiales
Hielo picado Micropipetas
Puntas de micropipeta
Gasas
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

5. Equipamiento
Balanza Baño de agua
Agitador magnético
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

6. Objetivos
1. Extraer ADN a partir de material biológico (guisantes)
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

7. Protocolo
1. Preparación de la solución de lisis
2. Homogeneización del material biológico
3. Incubación del homogeneizado
4. Filtración del homogeneizado
5. Precipitación del ADN
6. Preparación de la muestra de ADN
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

8. 1. Preparación de la solución de lisis
1.1. Se miden con una probeta 80 mL de agua
destilada y se ponen en un vaso de precipitado
1.2. Se cogen con una micropipeta 2,5 mL de SDS al
20 % y se añaden al agua destilada
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9. 1. Preparación de la solución de lisis
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)
1.4. Se pesan 0,2 g de EDTA en una balanza y se añaden
posteriormente al agua destilada con el SDS y NaCl
1.3. Se pesan 0,5 g de NaCl en una balanza y se añaden
posteriormente al agua destilada con el SDS

10. 1. Preparación de la solución de lisis
1.5. Se mezcla la solución con la ayuda de un agitador magnético, posteriormente se
pone la solución en una probeta y se enrasa con agua destilada hasta 100 mL
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11. 2. Homogeneización del material biológico
2.1. Se pesan 25 g de guisantes y se ponen en el vaso del mortero
2.2. Se homogeneizan los guisantes, se añade la solución de lisis y se continua
homogeneizando con el mortero. Se pasa el homogenizado al vaso de precipitado
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12. 3. Incubación del homogeneizado
3.1. Se incuba el homogeneizado a
55°C en un baño de agua durante 15
minutos
3.2. Se enfría en hielo picado el
homogeneizado durante 5 minutos
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

13. 4. Filtración del homogeneizado
4.1. Se desdobla la gasa y se pone sobre el embudo
4.2. Se filtra el homogeneizado a través de la gasa
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

14. 5. Precipitación del ADN
5.1. Se cogen 2 mL del homogeneizado con una micropipeta y se añaden a un
tubo de ensayo
5.2. Se cogen 5 mL de etanol frío con una micropipeta y se añaden al homogeneizado,
observando la precipitación del ADN
ADN
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)

15. 6. Preparación de la muestra de ADN
6.1. Se corta la punta de una micropipeta y se pasa el ADN a un tubo Eppendorf
6.2. Se centrifuga la muestra en una microcentrífuga para eliminar los restos etanol,
obteniéndose el ADN en la base del tubo Eppendorf
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16. 6. Preparación de la muestra de ADN
6.3. Se eliminan los restos de etanol con una micropipeta y se deja secar
6.4. Se disuelve el ADN en 1 mL de agua destilada
Pedro José Martínez de Paz, Mónica Morales Camarzana, Raquel Martín Folgar Biología (Grado en Física)