El documento trata sobre los temas de esterilización, medios de cultivo y técnicas para el control bacteriológico. Explica diferentes métodos de esterilización físicos y químicos, y describe los requisitos para preparar medios de cultivo que permitan el aislamiento y crecimiento de bacterias, como la disponibilidad de nutrientes, la consistencia, y condiciones como la presencia de oxígeno y la humedad. También resume aportaciones clave de científicos en el desarrollo de la microbiología mé

1. Tema 1.1 Esterilizacion y medios de cultivo.
Tema 1.2 APLICAR TÉCNICAS FÍSICAS Y QUÍMICAS PARA EL CONTROL
BACTERIOLÓGICO.
Tema 1.3 Preparar los diferentes medios de cultivo para el aislamiento de
bacterias.
Tema 1.4 Características morfológicas y taxonómicas de las bacterias
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2. Tema 1.1 Esterilizacion y medios de cultivo.
Es el proceso mediante el cual se alcanza la muerte de todas las formas de vida
microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente resistentes,
hongos y sus esporos, y virus.
Metodos de esterilizacio Fisicos, Son aquellos que no involucran el empleo de
sustancias letales para los microorganismos, si no procedimientos fisicos qu
Metodos de esterilizacion
Calor Humedo Metodo termico de esterilización, mata
microorganismos , por la coagulación de proteinas,
causada por rutura de los puentes de hidrogeno.
Tindalazion Consiste en someter una sustancia a esterilizar a un
proceso seriado de elevación y disminución de la
temperatura, de tal modo que en cada una de esas
etapas se eliminen paulatinamente las forma
vegetativas y esporas
Pasteurizacion §Es el proceso térmico realizado a líquidos
(generalmente alimentos) con el objeto de reducir los
agentes patógenos que pueden contener: bacterias,
protozoos, mohos y levaduras.
Ebullicion La ebullición es el proceso físico en el que un liquido
pasa a estado gaseoso.
Elimina la mayoria de microorganismos en el medio
liquido.
Metodos de esterilización Quimicos: Los métodos químicos de esterilización son
aquellos que involucran el empleo de sustancias letales para los microorganismos.
El uso de este método es muy limitado para la industria alimentaria pero muy
utilizado en otras industrias como la farmacéutica por ejemplo.
OXIDO DE ETILENO
ALDEHIDOS
GLUTARALDEHIDO
FORMALDEHIDO
Medios de cultivo.
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3. Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el
desarrollo de los microorganismos.
Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado ( es decir, se
le añaden organismos) y a continuacion incubado en condiciones que favorezcan el
crecimiento microbiano.
Condiciones para el Desarrollo de los Microrganismos:
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores que en algunos casos son ajenos al medio ambiente.
1.Disponibilidad de nutrientes adecuados.
2.Consistencia adecuada del medio
3.Presencia o ausencia del oxigeno y otros gases.
4.Condiciones adecuadas de humedad.
5.Luz ambiental.
6.Ph.
7.Temperatura.
8.Esterilidad del medio.
Un medio de cultivo adecuado debe de contar como
minimo carbono, nitrogeno,azufre,fosforo,sales
inorganicas y ciertas vitaminas inductoras de
crecimiento.
Tipos de medios para su desarrollo:
Partiendo de un medio liquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albumina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado
semisólido o solido.
Los medios solidificados tienen el gran inconveniente de que muchos no desarrollan
adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión y otros pueden licuarlo.
Clasificación de los medios de cultivo
De acuerdo a su consistencia, los medios pueden clasificarse en:
1. Liquidos: se utilizan para el crecimiento de cultivos
puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no
tienen agar en su formulacion.
2. Semisolido: contiene 0.5% de agar en su formulacion.
Se utilizan para estudiar la mo vilidad de las bacterias
(presencia o ausencia de flagelos)
3. Solido: contiene de 1.5% a 2% agar en su formulacion.
Estos medios inmovilizan a las celulas, permitiendoles
crecer y formar masas aisladas visibles llamadas
colonias.
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4. De acuerdo a su funcion se clasifican en :
1. Medios selectivos: son aquellos que poseen uno o mas componentes
añadidos, los cuales prevendan el crecimiento de cierto tipos de especie
de bacterias deseada ajustando las condiciones fisicas tales como
temperatura, ph, etc.
2. Medios diferenciales: permiten al investigador distinguir las
diferencias entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna
caracteristica observable en su patron de crecimiento en el medio.
3. Medios de enriquecimiento: contiene algun componente que permite
el crecimiento de cierto tipo especifico de bacteria, pero no contienen
sustancias inhibidoras.
4. Medios enriquecidos: se emplean para cultivar microorganismos que
requieren un gran numero de factores de crecimiento. Generalmente
contiene extractos biologicos poco usuales como sangre, suero en polvo,
extracto de cerebro de res, etc.
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5. Tema 1.2 APLICAR TÉCNICAS FÍSICAS Y QUÍMICAS PARA EL CONTROL
BACTERIOLÓGICO.
Aportaciones más importantes de científicos en la microbiología de interés médico
Anthony Van Conocido por introducir a la fabricación de
L. los microscopios y descubrimientos pioneros
sobre los protozoos,los globulos rojos, el sist.
De capilares y ciclo vital de los
insectos.
Lazzaro investigo el origen de la vida la
Spallanzani regeneración tisular la respiración y
otras funciones del ser humano. también
trabajo en la inseminación artificial
Agostino Bassi Realizó la 1era prueba experimental de un
agente biológico
como causa de una enfermedad epidémica
señaló en obras que las enfermedades como
el sarampión, peste bubónica, sífilis, cólera,
rabia y gonorrea también son producidas
por parásitos.
Luis Pasteur La pasteurización proceso de la destrucción de las bacterias
patógenas en un liquido mediante calor. demostró que todo proceso
de fermentación y descomposición orgánica se debe a la acción de
organismos vivos. También vacunas contra enfermedades entre ellas
la rabia.
Walter Reed Realizo importantes investigaciones sobre la etiología, control y
transmisión de enfermedades
epidémicas, la examinación de la fiebre
tifoidea y demostró que la fiebre
amarilla solo se propaga por medio de la
picaduradel m osquito Aede
Paul Ehrlich Descubrió elsalvarsán, derivado
de arsénico activo frente a la sífilis estableció concepto
quimioterapico un fármaco que mataba bacterias respetando las
células del huésped y la teoría de la inmunidad de cadena lateral.
David Bruce Descubrió las causas y vías de transmisión de varias enfermedades
brucelosis y tripanosomiasis africana. Descubrió el fenómeno fiebre
de malta.
Theobald Descubrió el parasito de la llamada "fiebre de Texas" el cual era
Smith transmitido por una garrapata. también hizo un trabajo que
describía la presencia de la brucella en el protoplasma de las células
del epitelio corial.
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6. Medios de esterilización.
Métodos Químicos
Estos métodos provocan la pérdida de viabilidad de los microorganismos.
Hipoclorito de Sodio: Es el más utilizado por su fácil adquisición y por
su efectividad en la desinfección.
Oxido de etileno: Destruye todos los microorganismos incluso virus.
Aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas. Estos compuestos
destruyen las esporas
Glutaraldehído: Este método tiene la ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante
efectivo frío
Formaldehído: Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36
horas.
Gas-plasma de Peróxido de Hidrógeno: Es proceso de esterilización a baja
temperatura la cual consta en la transmisión de peróxido de hidrógeno en fase
plasma.
Alcohol: Esteriliza superficies, pero se evapora fácilmente.
Métodos Físicos
Calor: La utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo
de exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en
distinto grado, a la acción del calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas,
fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en
los microorganismos.
Calor Húmedo: El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de
proteínas.
Autoclave. Se realiza la esterilización por el vapor de agua a presión. El modelo más
usado es el de Chamberland.
Calor seco: El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxico por niveles
elevados de electrolitos, fusión de membranas.
Estufas –Hornos: Doble cámara, el aire caliente generado por una resistencia, circula
por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cámaras, a temperatura de 170º
C para el instrumental metálico y a 140º C para el contenido de los tambores.
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7. Tema 1.3 Preparar los diferentes medios de cultivo para el
aislamiento de bacterias.
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproducción in vitro de las bacterias,
para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioquímico e
inmunológico, al contar con material en cantidad suficiente. Por ello consta de algunas
propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes, condicione de Aero-anaerobiosis, etc.),
que son las más idóneas para la bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una
de ellas en particular, en la bacteriología sistemática.
Se entiende por medio de cultivo la mezcla de
sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite
el crecimiento y la reproducción de microorganismos
o bien que permite mantener su variabilidad.
Un microrganismo se siembra en un medio
líquido o en la superficie de un medio
sólido de agar . Los medios de cultivo
contienen distintos nutrientes que van,
desde azúcares simples hasta sustancias
complejas como la sangre o el extracto de
caldo de carne.
Para aislar o purificar una especie
bacteriana a partir de una muestra
formada por muchos tipos de bacterias, se
siembra en un medio de cultivo sólido
donde las células que se multiplican no
cambian de localización; tras muchos ciclos
reproductivos, cada bacteria individual
genera por escisión binaria una colonia
macroscópica compuesta por decenas de
millones de células similares a la original.
Condiciones requeridas.
Los medios de cultivo para poder ser utilizados y
garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos
sean confiables deben cumplir con los siguientes
requisitos:
1- Disponibilidad de nutrientes adecuados:
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8. Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,
como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas.
En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de
donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.
2- Consistencia adecuada del medio:
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su
consistencia añadiendo productos como albúmina,
gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se
desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidifícate y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
3- Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases:
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microrganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente
anaerobias(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos
tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
En un punto intermedio, los microrganismos microaerófilos crecen mejor en
condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias(tensión de oxígeno muy reducida),
mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a
cualquiera de las citadas condiciones.
•4- Condiciones Adecuadas De Humedad:
• Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos.
Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de
cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el
medio.
5- Luz ambiental:
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos
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9. 6- pH:
La concentración de iones hidrógeno es muy
importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de ellos se
desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios
más o menos ácidos. No se debe olvidar que la
presencia de ácidos o bases en cantidades que
no impiden el crecimiento bacteriano pueden
sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus
procesos metabólicos normales.
7- Temperatura:
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15
y43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los termófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y
los saprofitos tienen rangos más amplios.
8- Esterilidad del medio:
Todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición
de formas de vida que puedan alterar,
enmascarar o incluso impedir el crecimiento
microbiano normal del o de los especímenes
inoculados en dichos medios. El sistema clásico
para esterilizar los medios de cultivo es el
autoclave (que utiliza vapor de agua a presión
como agente esterilizante).
Clasificación de los medios de cultivo.
Para Usos No Selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos
Generales. difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos con
materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina,
u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias.
Selectivos. pueden ser de moderada o de alta selectividad) se añaden
sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de
bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando
las sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad.
Enriquecidos. Algunos microorganismos no son capaces de desarrollarse en
medios de cultivo normales. Para cultivarlos necesitamos añadir
sustancias altamente nutritivas como sangre, suero, extractos de
tejidos animales. Los microorganismos que crecen en ellos son
microorganismos exigentes o fastidiosos.
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10. Para Aislamientos Formulaciones nutritivas especiales que satisfacen
Especializados. requerimientos de grupos específicos de bacterias, ayudando a su
identificación(Lowenstein).
AGAR SANGRE
Medio enriquecido, estándar. El AS al 5% con
base de Tripticasa-Soja es un medio de uso
general que permite el crecimiento tanto de
microorganismos exigentes como no exigentes,
que incluyen bacterias aerobias y anaerobias,
así como los del género Candida.
AGAR POLIVITEX (chocolate)
Medio enriquecido, para bacterias que no crecen en
medios habituales. El Agar chocolate es un medio
destinado principalmente al aislamiento de gonococos y
meningococos, pero en el que pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes.
MACCONKEY
Este medio es ligeramente selectivo ya que la
concentración desales Biliares, que inhiben el
crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es
baja en relación con otros medios similares. Se incluye
también cristal violeta para inhibir el crecimiento de las
bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y
enterococos.
SCHAEDLER
Medio básico enriquecido con sangre. Este medio
reductor está particularmente adaptado al cultivo de
los gérmenes anaerobios.
KANA-VANCO
Con Kanamicina y Vancomicina. Contiene 75 µg/ml de Kanamicina, que
inhibe a la mayoría de los bacilos aerobios, facultativos y anaerobios
excepto Bacteroides, y 7,5 µg/ml de Vancomicina, que inhibe a la
mayoría de los microorganismos Gram Positivos.
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11. Tema 1.4 Características morfológicas y
taxonómicas de las bacterias
BACTERIAS
Las bacterias son microorganismos unicelulares que
presentan un tamaño de unos pocos micrómetros (entre
0,5 y 5 μm, por lo general) y diversas formas incluyendo
esferas (c ocos), barras (bacilos) y hélices (espirilos). Las
bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de
las células eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.).
MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS
En biología, la morfología es la disciplina encargada del estudio de la reproducción y
estructura de un organismo o sistema. La morfología es una ciencia biológica que trata
de la forma y reproducciones de los seres orgánicos.
MORFOLOGÍA BACTERIANA
La morfología bacteriana debe considerarse desde dos puntos de vista:
1) como células individuales observables sólo al microscopio.
2) como colonias bacterianas apreciables a simple vista después de desarrollarse en
la superficie de medios de cultivo sólidos.
Las diferencias en el tamaño, forma y ciertos detalles estructurales son característicos
de los principales grupos de bacterias, y proporcionan las bases fundamentales para
su estudio sistemático e identificación.
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LAS BACTERIAS
Presentan una forma en cocos o bacilos.
Su tamaño es aproximadamente 10 micras 1x10-6m.
Generalmente se reproducen por bipartición.
Son unicelulares.
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12. LA FORMA DE LAS BACTERIAS ADOPTA DISTINTOS TIPOS MORFOLOGICOS LO QUE
SE CONOCE COMO PLEOMORFISMO LOS CUALES SON:
1. Coco : de forma esférica.
2. Diplococo: cocos en grupos de dos.
3. Tetracoco: cocos en grupos de cuatro.
4. Estreptococo: cocos en cadenas.
5. Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo.
6. Bacilo: en forma de bastoncillo.
7. Formas helicoidales:
8. Vibrio: ligeramente curvados y en forma de coma, judía o cacahuete.
9. Espirilo: en forma helicoidal rígida o en forma de tirabuzón.
10. Espiroqueta: en forma de tirabuzón (helicoidal flexible).
TAXONOMÍA DE LAS BACTERIAS
La taxonomía es, en su sentido más general, la ciencia de la clasificación.
Habitualmente, se emplea el término para designar a la taxonomía biológica, la ciencia
de ordenar a los organismos en un sistema de clasificación compuesto por una
jerarquía de taxones anidados.
Objetivo de la Taxonomia
Es dar un ordenamiento de las unidades taxonómicas
básicas (especie).
Especie bacteriana: es un conjunto de poblaciones clonales
que presenta un elevado grado de similitud fenotípica entre
si y que a su ves difiere de otros conjuntos de poblaciones
clonales.
Carac terización
Ideal: Caracterización completa de genotipo (es decir
de su constitución genética)
Real: Caracterización parcial del fenotipo (apariencia)
LOS PRINCIPALES TAXONOMÍAS BACTERIANAS
Dominio Bacteria (Eubacteria)
Reino Proteobacteria
Sección g-Proteobacteria
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13. Clase Zymobacteria
Orden Enterobacteriales
Familia Enterobacteriaceae
Género Escherichia
Especie E. coli
Morfovar propiedades morfológicas
Biovar propiedades bioquímicas
Serovar propiedades antigénicas
Fagovar sensibilidad a fagos
Patovar propiedades patogénicas
Coloración de Gram
Negativo: se observan bacilos aislados de
color rosado (coloración dada por la
safranina).
Positivo: se observan cocos agrupados en
estafilos (estafilococos) de color violeta,
típico de una coloración de Gram (+).
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