1. DETECCION DE CASOS DE TB
DROGORRESISTENTE
JOSÉ GABRIEL CORNEJO GARCIA
MEDICO NEUMOLOGO
HOSPITAL ARZOBISPO LOAYZA

2. Tipos de Prueba de Sensibilidad
Pruebas Fenotípicas Pruebas Genotípicas

3. Fenotípicas Genotípicas
• Modelo viabilidad
celular
• Observación
directa o indirecta
de Mtb en
presencia de
antibióticos
• Presencia de genes
específicos de Mtb
• Secuencias
genéticas
relacionadas a la
presencia de Mtb y
mutaciones
asociadas a
resistencia

4. Pruebas fenotípicas
• El gold estándar
es el método de
proporciones en
medio sólido de
Lowenstein-
Jensen.
• Se evalua la
relación en el
número de
colonias.
<1% susceptible
>1% resistente

5. Tiempo para obtener resultado de
una prueba de sensibilidad
Proporciones Lowenstein-Jensen
INH02-baja Resistente
INH1-alta Resistente
EMB/ETB Sensible
SM-alta Sensible
RIF Resistente
PZA Resistente

6. Es necesario pruebas de
sensibilidad rápidas
• También pueden ser fenotípicas o genotípicas.
• Estas deben tener las siguientes características:
▫ 1. Alta sensibilidad y especificidad.
▫ 2. Bajo costo
▫ 3. Facilidad técnica.
▫ 4. Bajo riesgo en bioseguridad

7. PS rápidas fenotípicas
• Las pruebas disponibles son:
▫ Medios líquidos: BACTEC 460 y BACTEC 960
o MGIT.
▫ Griess.
▫ MODS.

8. • Los medios líquidos tienen mayor sensibilidad
que los medios sólidos ( Lowenstein-Jensen).
• El resultado puede estar en 10-15 días y la PS en
otros 10-15 días.

9. BACTEC TB 460 MGIT

11. GRIESS
• Es una prueba fenotípica desarrollada en el
Instituto Central de Tuberculosis de Moscú.
• Es un método colorimétrico basado en la acción
de la nitrato reductasa.
• Se utiliza medios de L-J al cual se agrega
NaNO3.
• Se requiere que el esputo sea positivo y de un
volumen mínimo de 3 ml.

12. En 2 tubos con medio
de cultivo se agrega
0,2 ml de sedimento
del esputo
En otros 2 tubos a lo
anterior se agrega en
uno H y en el otro R en
concentraciones críticas

13. • Luego de 28 días de incubación se agrega el
reactivo, con la finalidad de detectar la
conversión de nitratos a nitritos, que es la
actividad de la enzima nitrato reductasa.

15. • En el Perú la prueba fue validada en el 2003 por
el Instituto Nacional de Salud y por el
Laboratorio del Estado de Massachusetts.
• Esta disponible desde el 2006.

17. MODS
• El MODS o Microscopic
Observation Drug
Susceptibility, es un
método fenotípico basado
en medio líquido.
• El crecimiento de M.
tuberculosis es mas
rápido en medios
líquidos.
• El crecimiento se observa
por el crecimiento y
formación de cordones.

18. • Por lo tanto puede servir tanto para el
diagnóstico de tuberculosis y al agregar
antibióticos a las muestras y comparando con los
controles también para tuberculosis MDR.
• Requiere el uso de microscopio de luz invertida.
• El resultado se puede dar en 7 días.
• El costo es de 2 dólares por muestra.

22. Pruebas rápidas genotípicas
• Principalmente basadas en la amplificación de
ácidos nucleicos siendo la técnica mas usada la
reacción en cadena de la polimerasa ( PCR ).
• Estas pruebas pueden servir para el Dx y como
prueba de sensibilidad.
• No sirven para monitorizar el tratamiento
porque se puede detectar ácidos nucléicos de
micobacterias no viables.

23. Genotype MTBDRplus
• Se puede usar en cepas aisladas en medios
sólidos o líquidos ( método indirecto ).
• También en muestras de esputo frotis positivo
( método directo ).
• Detecta mutaciones en el gen rpoB ( resistencia
a R ), en el gen katG ( resistencia a altas dosis
de H), y en el gen inhA ( resistencia a bajas
dosis de H).
• Los resultados pueden estar en 72 horas.

24. H R
Sens 91,4% 98,4%
Espf 99,7% 99,1%

25. Genotype MTBDRsl
• Es un método genotípico de utilidad en la
detección rápida de casos XDR.
• Evalúa la resistencia a quinolonas por detección
de mutaciones en el gen gyr A que codifica la
enzima DNA girasa.
• La resistencia a aminoglicósidos es por mutación
en el gen rrs que codifica el RNA 16S.
• Ademas detecta resistencia a E por mutación en
el gen embB que codifica el arabinosil
transferasa.

27. GeneXpert MTB/RIF
• Es una prueba rápida genotípica completamente
automatizada.
• Es un test que sirve para el diagnóstico de TB y
de resistencia a R, por medio de PCR en tiempo
real para amplificar una secuencia específica del
gen rpoB.
• Se puede realizar en muestras con baciloscopía
positiva o negativa.

28. • La monorresistencia a R es poco común, la
presencia de resistencia a R esta asociado en más
del 90% a MDR.
• Por lo que el GeneXpert sirve también para el
diagnóstico temprano de MDR.

29. • Los reactivos necesarios para la lisis bacteriana,
extracción de acido nucléico, y amplificación; así
como la muestra se colocan en un cartucho
plástico.
• El volumen necesario de muestra para el estudio
es de solo 1 ml.

30. • El único paso manual es el agregar un buffer
bactericida a la muestra de esputo antes de
colocarlo en el cartucho.
• El riesgo en bioseguridad es mínimo, debido a
que no se libera aerosol.
• Luego el cartucho es colocado en el dispositivo
GeneXpert.

32. Sensibilidad HIV (+) 93,9%
Sensibilidad HIV (-) 98,4%
P= 0,02

33. CONCLUSIONES:
• Se debe pedir PS rápidas a todos los pacientes.
• En muestras Bk positivas se puede pedir
cualquier tipo de prueba.
• En muestras Bk negativas se puede pedir
BACTEC, MODS, o Xpert; las que también
sirven para Dx de TB.
• Si se requiere un resultado con mucha rápidez se
sugiere Genotype, Xpert, o MODS.

34. • La desventaja de Xpert es que no evalúa la
resistencia a H.