Aquí os dejamos nuestra ficha práctica del labo.

1. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 1
MODELO DE FICHA PRÁCTICA
CICLO FORMATIVO: LACB3 CURSO: PRIMERO
PRÁCTICA DE LABORATORIO:
Objetivo de la práctica:
Aislar el microorganismo de las heces del paciente.
Muestra:
Heces.
Preparación de la muestra:
Emulsión fecal: mezclar en un tubo de ensayo heces con agua destilada. Para esto pinchamos con una varilla en diferentes
zonas.
Material:
Papel de filtro.
Portaobjetos.
Asa de siembra.
Asa de superficie.
Mechero.
Pinzas.
Agua destilada.
Tubos de ensayo.
Placa Petri.
Parafilm.
Varilla.
Pipeta Pasteur.
Aparataje:
Microscopio óptico.
Reactivos:
Cristal violeta.
Safranina.
Lugol.
Oxidasa (TMFD).
Preparación de reactivos:
Ningún reactivo ha requerido preparación previa.
Pictogramas de los reactivos
Pictograma del reactivo de Kovacs (prueba del indol).

2. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 2
Pictograma del rojo de metilo (inflamable).
1er pictograma (inflamable) y 2º pictograma (corrosivo).

3. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 3
Frases R y Frases S / Frases H y Frases P
Frases del reactivo de Kovacs:
Frases R10-22-37-38-41-67: Inflamable / Nocivo por ingestión / Irrita las vías respiratorias / Irrita la piel / Riesgo de
lesiones oculares graves / La inhalación de vapores puede provocar somnolencia y vértigo.
Frases S7/9-13-26-37-39-46: Manténgase el recipiente bien cerrado / Manténgase el recipiente en lugar seco /
Consérvese el recipiente en lugar bien ventilado / Manténgase lejos de alimentos, bebidas y piensos / En caso de contacto
con los ojos, lávense inmediata y abundantemente con agua y acúdase a un médico / Úsense guantes adecuados / Úsese
protección para los ojos/la cara / En caso de ingestión, acúdase inmediatamente al médico y muéstrele la etiqueta o el
envase.
Frases del reactivo A de Voges-Proskauer:
Frases H225-H318: Líquido y vapores muy inflamables / Provoca lesiones oculares graves.
Frases P280-P303-P361-P353-P305-P351-P338-P370-P378-P403-P235-P501: Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de
protección. (El fabricante o el proveedor especificarán el tipo de equipo) / en caso de contacto con la piel o el pelo: Quitarse
inmediatamente las prendas contaminadas. Aclararse la piel con agua o ducharse / Quitarse inmediatamente las prendas
contaminadas / Aclararse la piel con agua / en caso de contacto con los ojos: Aclarar cuidadosamente con agua durante
varios minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando / Aclarar cuidadosamente con agua
durante varios minutos / Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando / En caso de incendio:
Detener la fuga, si no hay peligro en hacerlo / Utilizar (el fabricante o el proveedor especificarán los me dios apropiados, si
el agua hace que aumente el riesgo) para apagarlo / Almacenar en un lugar bien ventilado. (Si el pro ducto es volátil y
puede generar una atmósfera peligrosa) / Mantener en lugar fresco / Eliminar el contenido/el recipiente en (De conformidad
con la normativa local, regional, nacional o internacional (especifíquese)).
Frases del reactivo B de Voges-Proskauer:
Frase R35: Provoca quemaduras graves.
Frase S1-2-20-26-36-37-39: Consérvese bajo llave / Manténgase fuera del alcance de los niños / No comer ni beber durante
su utilización / En caso de contacto con los ojos, lávense inmediata y abundantemente con agua y acúdase a un médico /
Úsese indumentaria protectora adecuada / Úsense guantes adecuados / Úsese protección para los ojos/la cara.
Frases de la safranina:
Frase R10: Inflamable.
Frases S43-60: En caso de incendio, utilizar ... (los medios de extinción los debe especificar el fabricante). (Si el agua
aumenta el riesgo, se deberá añadir: "No usar nunca agua") / Elimínense el producto y su recipiente como residuos
peligrosos.
Normas de seguridad e higiene:
Bata, guantes y pelo recogida.

4. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 4
Desarrollo o procedimiento:
-Dia 1: el primer día cogimos la muestra e hicimos una emulsión fecal. A continuación, con un asa de siembra sembramos
en agar Sangre, Hektoen y MacConkey. Incubamos las placas en la estufa a 37ºC.
-Día 2: Cogemos las colonias que han crecido y hacemos cultivos puros metiéndolas en caldo peptonado. A continuación,
empezamos con la identificación y para ello realizamos la tinción de Gram. Después de teñir vemos que en agar Sangre
han crecido bacterias coco Gram negativos, en Hektoen bacilos Gram negativos y en MacConkey bacilos Gram negativos
también.
Hicimos la prueba de la catalasa que consiste en echar en un portaobjetos una gota de agua destilada y añadirle las
bacterias y después echarle unas gotas de agua oxigenada. Si se crean burbujas la prueba será positivo.
Las bacterias de agar Sangre nos dieron negativo y las de Hektoen y MacConkey positivo.
Después hicimos la prueba de la oxidasa dejando el papel de filtro impregnado con el reactivo de oxidasa y a continuación
dejamos masa bacteriana en las zonas impregnadas con el reactivo. Si la masa bacteriana cambia a un color violeta o
purpura se consideraría positivo. En agar sangre las bacterias fueron positivas y en Hektoen y en MacConkey negativas.
-Día 3: Seguimos con las pruebas de identificación, en este caso IMVIC. Empezamos con indol que sirve para detectar si la
bacteria puede degradar el triptófano dando Indol. Para esto se coge caldo peptonado y se añaden bacterias, después
añadimos el reactivo de indol. Si sale un halo de color rojo la prueba será positivo. En agar Sangre dio negativo, mientras
que en Hektoen y en MacConkey dieron positivo.
A continuación, haremos la prueba de citrato inoculando las bacterias en el medio de citrato en pico de flauta. Esta prueba
consiste en la capacidad que tienen las bacterias de usar como única fuente de carbono el citrato. Después se deberá
meter a la estufa a 37ºC y esperar 24h.
Para hacer las pruebas de rojo de metilo y de Voges Proskauer deberemos antes incubar las bacterias del cultivo puro en
RMVP para después poder hacer las pruebas. Las incubaremos durante 24h a 37ºC.
-Día 4: miramos el resultado del citrato que fue positivo en todos los casos.
A continuación, hicimos la prueba de rojo de metilo cogiendo el tubo con RMVP que incubamos el día anterior y le
añadiremos 4 o 5 gotas del reactivo. Esta prueba sirve para ver la capacidad que tiene las bacterias de actuar sobre la
glucosa. En este caso la prueba salió positiva para las bacterias de agar Hektoen y negativa para Sangre y MacConkey.
Para la prueba de Voges Proskauer también cogimos el RMVP incubado el día anterior y añadimos 0,6 ml de reactivo A y
0,2 ml de reactivo B. Esperamos 10 minutos y leemos el resultado. Si se creara un halo de color rojo la prueba sería
positiva. En este caso todo nos dio negativo.
-Día 5: Hicimos los antibiogramas. Para esto usamos placas de Mueller Hilton donde con el caldo peptonado echamos 100
µm y extendimos con el asa de Digralsky. Esperamos unos 15 minutos a que se secara y colocamos los discos de
antibiogramas. Después lo incubaremos en la estufa a 37ºC durante 24h. Estos son los antibióticos que usamos:
Eritromicina (A), Ciprofloxacina (B), Tetraciclina (C), Gentamicina (D), Fosfomicina (E) y Cefotaxima (F).
-Día 6: Miramos los halos que se han creado alrededor de los discos de antibióticos y medimos su radio o diámetro con una
regla. Si hay halo significa que la bacteria es sensible al antibiótico en el caso contrario significaría que es resistente.
Después miramos la tabla de los antibiogramas para saber de qué bacteria se trataría.
Resultado e interpretación:
-Agar Sangre: De las bacterias que crecieron en agar sangre este es el resultado de las pruebas y que recordamos que
eran CGN.
Oxidasa: +
Catalasa: -
IMVIC: - - - +
-Agar Hektoen: De las bacterias que crecieron en agar Hektoen este es el resultado de las pruebas y que recordamos que
eran BGN.
Oxidasa: -
Catalasa: +
IMVIC: + + - +
-Agar MacConkey: de las bacterias que nos crecieron en agar MacConkey este es el resultado de las pruebas y que
recordamos que eran BGN.
Oxidasa: -
Catalasa: +

5. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 5
IMVIC: + - - +
Después de obtener todos los resultados hemos hecho una aproximación de la bacteria que podría ser, para saberlo más
exactamente se deberían de revisar las tablas de identificación y hacer más pruebas.
Estos fueron los resultados de los antibiogramas:
-Agar Sangre:
A: resistente.
B: 2,5 cm.
C: 2 cm.
D1,5 cm.
E: 1,5 cm.
F: 2,5 cm.
-Agar Hektoen:
A: resistente.
B: 2,5 cm.
C: 2 cm.
D: 1,5 cm.
E: 1 cm.
F: 3 cm.
-Agar MacConkey:
A: resistente.
B: 2,5 cm.
C: 2 cm.
D: 2 cm.
E:1,5 cm.
F: 2,7 cm.

6. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 6
A continuación, os dejamos las fotos de las pruebas y también la tabla de lectura de los antibiogramas.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges-Proskauer:
Citrato:

7. Ficha_Práctica_ActimelTeam Página 7
Tablas de antibiogramas: