bacteriologia

1. PRUEBA DE
IDENTIFICACIÓN PARA
GRAM POSITIVO
ESTUDIANTE: NICOLE DELGADO
4-805-1267

2. INTRODUCCIÓN
• Los cocos gram positivos tienen en común su forma
esférica, su reacción a la tinción de Gram y la ausencia de
endoesporas, estos se podrán identificar mediante varias
pruebas y estas serán puestas en practica en nuestro
laboratorio de microbiología a continuación mostraremos
unas cuentas de la gran variedad de identificación de
estas.

3. CRISTAL VIOLETA
• el agar de soja Trypticase II es el medio base que proporciona nutrientes y se suplementa
con colistina y ácido nalidíxico para suministrar selectividad para las bacterias gram positivas,
Además, el medio contiene cristal violeta, que es un potente inhibidor del crecimiento de
estafilococos, La sangre de carnero y suero de ternero permiten la detección de las
reacciones hemolíticas y favorecen el crecimiento.
• BD Modified CNA Agar with Crystal Violet es un medio selectivo para estreptococos y
enterococos que inhibe el crecimiento de los estafilococos. Se utiliza principalmente para
detectar estreptococos en muestras de zonas corporales en las que estos microorganismos
desempeñan un papel muy importante como agentes infecciosos, por ejemplo,
estreptococos del grupo A (=Streptococcus pyogenes) en muestras de las vías respiratorias
superiores o estreptococos del grupo B a partir de muestras genitourinarias. Asimismo, se
puede utilizar para detectar estos y otros estreptococos y enterococos a partir de otras
muestras clínicas.

4. Procedimiento.
1. Después de recibir la
muestra en el laboratorio,
sembrarla en estrías tan pronto
como sea posible en BD
Modified CNA Agar with Crystal
Violet.
2. La placa sembrada en estrías se utiliza
principalmente para aislar los cultivos puros
de las muestras con flora mixta. Si, por el
contrario, el material se cultiva directamente
empleando una torunda, hacerla girar en una
sección pequeña cercana al borde; realizar
luego la siembra en estrías a partir de este
área inoculada.
3. Dado que los estreptococos
pueden requerir dióxido de carbono
para su aislamiento primario, las
placas deben incubarse en una
atmósfera aerobia que contenga
aproximadamente de un 3 a 10% de
CO2.
4. Incubar las placas a una
temperatura de 35 a 37 °C
durante un tiempo de 18 a 24
horas o más si es necesario.
5. Incubar las placas a una
temperatura de 35 a 37 °C
durante un tiempo de 18 a 24
horas o más si es necesario.
los estafilococos y bacterias gram
negativas presentarán una
inhibición del crecimiento de
parcial a completa, mientras que
los estreptococos y enterococos
producirán crecimiento. Tenga en
cuenta que las colonias adquieren
una coloración azulada debido a la
acumulación del cristal violeta. Es
posible que crezcan otras
bacterias gram positivas,
dependiendo de su sensibilidad a
los inhibidores

5. NOVOBIOCINA
• Es un ATB que inhibe el crecimiento de
Staphylococcus epidermides
• La Novobiocina y los otros antibióticos
aminocumarinas actúan como un inhibidor
competente de la reacción de la enzima
ATPsintasa, catalizada por GyrB.
• La novobiocina es activa frente el
Staphylococcus epidermidis y puede usarse
para diferenciarlo de los otros coagulasa-
negativos, como el Staphylococcus
saprophyticus, que son resistentes a la
novobiocina.

6. Efectuar una siembra
masiva en Agar Mueller
Hinton colocar el disco
de Novobiocina de 5 ug.
Incubar 35ºC por 24h.
Interpretación:
sensible inhibición del
desarrollo menor o
mayor a 16 mm de
diámetro
Staphylococcus R
Micrococcus S

7. GLUCOSIDASA (PGR, PGT)
• La capacidad de un organismo para producir la
enzima glicosidasa especifica .
• Esta enzima se detecta por la descomposición
del complejo p-nitrofenil-carbohidrato,
liberando p- nitrofenol, que es color amarillo
• Positivo: amarillo
• Negativo: transparente

8. INDOXIL FOSFATO (IDX)
• La hidrolisis de indoxil fosfato por enzima indoxil
fosfato
• da lugar a un compuesto azul insoluble
• La mayoría de los estafilococos coagulasa y
DNasa positivos son IDX positivos
• Positvo: azul gris /sedimento
• Negativo: transparente sin sedimento