3. Elementos de un IE:Elementos de un IE:
AnticuerpoAnticuerpo
AntígenoAntígeno
TrazadorTrazador
Clasificación:Clasificación:
Sistema de separaciónSistema de separación
MarcaMarca
DiseñoDiseño
5. Clasificación de los IE:Clasificación de los IE:
Marca:Marca:
1.1.RadiactivaRadiactiva
2.2.EnzimáticoEnzimático
3.3.FluorescenteFluorescente
4.4.QuimioluminiscenteQuimioluminiscente
5.5.ElectroquimioluminiscenteElectroquimioluminiscente Mayor sensibilidad
analítica
6. Clasificación de los IE:Clasificación de los IE:
Diseño:Diseño:
1.1.CompetitivoCompetitivo
2.2.No competitivoNo competitivo
7. + ++ +
IE competitivosIE competitivos
Tubo
recubierto
con el
anticuerpo
F
B
Analito Hormona
marcada
Moléculas
grandes o
pequeñas
detección
de la señal
8. Muestra (con la hormona) o calibrador
hormona marcada radiactivamente
mezcla e incubación
separación
detección
de la señal
9. Tubo sin
anticuerpo
detección
de la señal
separación
sin separación
TUBO INESPECIFICO
TUBO DE CUENTAS TOTALES
Tubo sin
anticuerpo
hormona marcada radiactivamente
11. señal
log dosis
logit (B/B0)
IE competitivosIE competitivos
Parámetros:
Intercepción
Pendiente
D50
Señales del IE competitivo:
Bo (Bmax)
Inespecífico
CT
Control de calidad interno
12. IE No competitivosIE No competitivos
+ ++ +
Tubo
recubierto
con el
anticuerpo
F
B
Analito Anticuerpo
marcado
Moléculas
grandes
detección
de la señal
13. Muestra (con la hormona) o calibrador
anticuerpo marcad0 radiactivamente
mezcla e incubación
separación
detección
de la señal
16. señal
log dosis
log (B)
IE No competitivosIE No competitivos
Parámetros:
Intercepción
Pendiente
D50
Señales del IE no competitivo:
Bo (inespecífico)
Bmax
CT
Control de calidad interno
17. PerformancePerformance analítica de los IE:analítica de los IE:
Especificidad analíticaEspecificidad analítica
Sensibilidad analíticaSensibilidad analítica
Ka
IE competitivo < no competitivo
∆ señal / ∆ concentración
variables ∝ diseño del IE
18. IE competitivos:IE competitivos:
afinidad / especificidad del Acafinidad / especificidad del Ac
eficiencia de separación (U inesp.)eficiencia de separación (U inesp.)
detección de la señaldetección de la señal
IE no competitivos:IE no competitivos:
eficiencia de la separación (U inesp.)eficiencia de la separación (U inesp.)
detección de la señaldetección de la señal
SENSIBILIDAD: IE competitivo < noSENSIBILIDAD: IE competitivo < no
competitivocompetitivo
19. Sensibilidad : conceptos y límitesSensibilidad : conceptos y límites
Sensibilidad analíticaSensibilidad analítica
Sensibilidad funcionalSensibilidad funcional
Sensibilidad diagnósticaSensibilidad diagnóstica
Límite de detección
Límite de cuantificación
Límite de decisión médica
20. Cuestionario de aplicaciónCuestionario de aplicación
1.1. A su laboratorio llega un paciente de sexoA su laboratorio llega un paciente de sexo
femenino de aproximadamente 25 años confemenino de aproximadamente 25 años con
una orden médica que solicita el dosaje deuna orden médica que solicita el dosaje de
LH, FSH y E2 plasmático:LH, FSH y E2 plasmático:
a- ¿Qué datos le preguntaría a la paciente?
b- ¿Qué haría usted si la paciente refiere estar en el día 14 del
ciclo?
c- ¿Qué haría usted si la paciente refiere estar tomando
anticonceptivos orales?
21. 2.2. A su laboratorio llega una paciente deA su laboratorio llega una paciente de
aproximadamente 30 años con una ordenaproximadamente 30 años con una orden
médica en la que se solicita el dosaje demédica en la que se solicita el dosaje de
progesterona:progesterona:
a- ¿Qué datos le parece importante preguntarle a la paciente?
b- ¿Cómo procedería si el médico le solicita el dosaje de LH y
FSH además del dosaje de P4?
c- ¿Con qué anticoagulante tomaría la muestra?
22. 3.3. Llega a su laboratorio un paciente de sexoLlega a su laboratorio un paciente de sexo
masculino de aproximadamente 50 añosmasculino de aproximadamente 50 años
con una orden médica que solicita lacon una orden médica que solicita la
determinación de cortisol matinal y cortisoldeterminación de cortisol matinal y cortisol
libre urinario (CLU) de 24 horas:libre urinario (CLU) de 24 horas:
a- ¿Qué datos le parece importante preguntarle al paciente?
b- ¿A qué hora realizaría la extracción para determinar el
cortisol? ¿Por qué?
c- ¿Qué indicaciones le daria al paciente para recoger la orina?
d- Si el paciente trae la muestra de orina y esta tiene un
volumen de 380 ml, ¿cómo procedería?
23. 4.4. Llega a su laboratorio una paciente paraLlega a su laboratorio una paciente para
realizarse un dosaje de PRL:realizarse un dosaje de PRL:
a- ¿Qué datos le parece importante preguntarle a la paciente?
b- La paciente refiere tener un resultado anterior elevado,
¿cómo procedería?
c- Si la paciente llega al laboratorio a las 11.30 de la mañana,
¿cómo procedería?
24. 5.5. El perfil tiroideo de una paciente (mujer deEl perfil tiroideo de una paciente (mujer de
38 años) presenta los siguientes valores:38 años) presenta los siguientes valores:
T3: 120 ng/dl (VR 70-170 ng/dl)T3: 120 ng/dl (VR 70-170 ng/dl)
T4: < 1.0T4: < 1.0 µµg/dl (VR 4.5-12.5g/dl (VR 4.5-12.5 µµg/dl)g/dl)
TSH : 2.5TSH : 2.5 µµUI/ml (VR 0.4-4.0UI/ml (VR 0.4-4.0 µµUI/ml)UI/ml)
a- ¿Qué le sugiere este resultado?
Interferencia: efecto de una sustancia presente en una muestra
que causa que un resultado de un test sea erróneo. Puede o no
ser dependiente del analito en estudio y la medida realizada
puede ser mayor o menor a la correspondiente por la
concentración de la hormona en la muestra.
25. Interferencias:Interferencias:
¿¿cuándo sospechar??¿¿cuándo sospechar??
Situaciones clínicas asociadas conSituaciones clínicas asociadas con
interferencias conocidasinterferencias conocidas
Incongruencia entre el cuadro clínico delIncongruencia entre el cuadro clínico del
paciente y el perfil bioquímicopaciente y el perfil bioquímico
28. Neuronas GnRHNeuronas GnRH
Producen y secretan el factor liberador deProducen y secretan el factor liberador de
gonadotrofinas: GnRHgonadotrofinas: GnRH
generador de pulsos de GnRH
29. HIPOTALAMO
Neuronas productoras de Gn-RH en HMB
80 días de vida intrauterina
HIPOFISIS
Células gonadotropas en HA
Expresión de receptores de Gn-RH
31. Pulsatilidad de Gn-RH: propiedadPulsatilidad de Gn-RH: propiedad
intrínseca de la neurona Gn-RHintrínseca de la neurona Gn-RH
60-90 minutos60-90 minutos
Frecuencia disminuida
Anovulación y
amenorrea
Respuesta refractaria,
estado de down regulation
Frecuencia aumentada
o
exposición constante
32. Pulsatilidad de Gn-RHPulsatilidad de Gn-RH
Activación de expresión génica subActivación de expresión génica sub αα,,
subsub ββ LH, subLH, sub ββ FSH, dimerizaciónFSH, dimerización αα-- ββ,,
glicosilaciónglicosilación
42. Biosíntesis de esteroides ováricosBiosíntesis de esteroides ováricos
Fuente: Williams Textbook of Endocrinology-11th
edition
43. Efectos del EEfectos del E22 en la faseen la fase
folicularfolicular
Promoción división
celular en CG
E2
Rc de FSH
Aumento de sus
propios Rc
Proliferación del
endometrio
Formación del
antro
44. Fase folicular mediaFase folicular media
*Disminución de FSH por feed-back negativo de E2;
otros folículos de la cohorte no prosperan.
Folículo dominante
> n° de R a FSH
> actividad
aromatasa > produción
estrogénica
> tamaño y índice
mitótico de CG
vascularidad
aumentada
45. Fase folicular tardíaFase folicular tardía
Adquisición de receptores de LH por inducción
de FSH en las células de la granulosa del
folículo pre-ovulatorio
46. Folículo preovulatorioFolículo preovulatorio
LH FSH
Granulosa
Teca
Interna
Andróg Estróg
Sínt. de novo
Colesterol Pregnen.
Progesterona
Andróg Estróg
Sínt. de novo
Andróg Estróg
Colesterol
Sínt. de novo
Andróg Estróg
Pregnen.Colesterol
Sínt. de novo
Andróg Estróg
Progesterona
Pregnen.Colesterol
Sínt. de novo
Andróg Estróg
47. OvulaciónOvulación
*Pico de E2 disparo de GT
*Aumento de P4 sinergiza con E2
favorece ruptura del folículo
*Se produce 18 hs después del pico de LH y 24-36 hs
después del pico de E2
51. Fase lútea tardíaFase lútea tardía
*Luteólisis: menor sensibilidad a LH, apoptosis
MENSTRUACIÓN
*Disminución de esteroides y aumento de FSH
*Agentes luteolíticos: E2, PGF2α y oxitocina
54. Mecanismo de feed-back negativo altamente
sensible (dependiente de esteroides sexuales)
LH/FSH
+
Mecanismo inhibitorio intrínseco del SNC
(independiente de esteroides sexuales)
Inhibición
Generador de pulsos de Gn-RHHIPOTALAMO
Insuficiencia
de Gn-RH
GonadotroposHIPOFISIS
Infancia
55.
56. •Aumento de andrógenos suprarrenales (∆4-A y
SDHEA) entre 6 y 8 años de edad.
•Precede en 1 a 2 años a la activación del
gonadostato.
•Relacionada con crecimiento esquelético y
desarrollo de vello axilar y pubiano (pubarca)
AdrenarcaAdrenarca
57. Modificaciones en pubertadModificaciones en pubertad
*Disminución de la sensibilidad del gonadostato al
control negativo de los esteroides gonadales
aumento de Gn-RH aumento de GT
aumento de E2.
*Gonadarca: aumento de secreción de estrógenos
ováricos y comienzo de los ciclos.
59. Cambios hormonales de la pubertad en niñasCambios hormonales de la pubertad en niñas
• amplitud de pulsos de LH (inicialmente nocturnos)
• respuesta de LH al Gn-RH endovenoso
• secreción de estradiol
• secreción de GH
• concentración sérica de IGF-I
• secreción de prolactina
60. Transición a la MenopausiaTransición a la Menopausia
y Postmenopausiay Postmenopausia
61. Fuente: Yen & Jaffe's Reproductive Endocrinology - 6ºEd - 2009
Variación del número de folículos primordiales con la edad
66. HORMONA ANTIMULLERIANAHORMONA ANTIMULLERIANA
Glicoproteina perteneciente a la superfamilia
de TGFβ (inhibinas, activinas)
• Células de la granulosaCélulas de la granulosa
• Desde semana 36 de gestación hasta la menopausiaDesde semana 36 de gestación hasta la menopausia
67. Acciones de AMH en ovario
•Factor de crecimiento inhibitorio enFactor de crecimiento inhibitorio en
estadíos tempranos de la foliculogénesisestadíos tempranos de la foliculogénesis
•Inhibe el crecimiento folicular estimuladoInhibe el crecimiento folicular estimulado
por FSHpor FSH
68. Visser et al, Reproduction, 2006
Acciones de AMH en ovario
72. Origen de estrógenos en laOrigen de estrógenos en la
postmenopausiapostmenopausia
Cél. Estroma
Andrógenos Arom. Estrógenos
perif.
Cort. Adrenal
Folíc. ovárico
E2 E1
73. •Los estrógenos sintetizados en sitios
extragonadales son biológicamente activos sólo
a nivel local (tejido adiposo, hígado, músculo,
hueso, piel, SNC, mama)
•Estos tejidos dependen de los precursores
androgénicos circulantes.
74. Ayuno de 8 hsAyuno de 8 hs
Muestra: sueroMuestra: suero
Extracción 8 - 9 am , día 3 a 5 del ciclo menstrualExtracción 8 - 9 am , día 3 a 5 del ciclo menstrual
Vigilia de 2 hsVigilia de 2 hs
Reposo de 20-30 minReposo de 20-30 min
Abstinencia sexual en las 48 hs previas a la extracciónAbstinencia sexual en las 48 hs previas a la extracción
Evitar situaciones de estrésEvitar situaciones de estrés
Evitar ejercicio físico intenso en las 24 hs previas a laEvitar ejercicio físico intenso en las 24 hs previas a la
extracciónextracción
PROLACTINA
VARIABLES PRE-ANALÍTICAS
75. Alteraciones del ciclo menstrualAlteraciones del ciclo menstrual
Amenorrea hiperprolactinémicaAmenorrea hiperprolactinémica
GalactorreaGalactorrea
Sospecha de tumores hipofisariosSospecha de tumores hipofisarios
Seguimiento y control de tto con agonistas DASeguimiento y control de tto con agonistas DA
Control de recidivas de tumores hipofisariosControl de recidivas de tumores hipofisarios
PROLACTINA
APLICACIONES CLÍNICAS
HipoprolactinemiaHipoprolactinemia Sindrome de Sheehan, panhipopituitarismoSindrome de Sheehan, panhipopituitarismo
Hiper PRLHiper PRL
76. EJE TIROIDEO
VARIABLES PRE-ANALÍTICAS
Ayuno de 8 hsAyuno de 8 hs
Muestra: sueroMuestra: suero
Pacientes bajo tratamiento: deben tomar laPacientes bajo tratamiento: deben tomar la
medicación después de la extracción de sangremedicación después de la extracción de sangre
77. EJE GONADAL: LH-FSH-E2
VARIABLES PRE-ANALÍTICAS
Ayuno de 8 hsAyuno de 8 hs
Muestra: sueroMuestra: suero
Extracción en fase folicular temprana:Extracción en fase folicular temprana:
día 3 a 5 del ciclo menstrualdía 3 a 5 del ciclo menstrual
día 2 a 3 del ciclo menstrual para evaluar reserva ovárica (FSH)día 2 a 3 del ciclo menstrual para evaluar reserva ovárica (FSH)
78. Alteraciones del ciclo menstrualAlteraciones del ciclo menstrual
Amenorrea primaria y secundariaAmenorrea primaria y secundaria
Falla ovárica precozFalla ovárica precoz
Pubertad precoz y retrasadaPubertad precoz y retrasada
HiperandrogenismoHiperandrogenismo
Patología hipotálamo-hipofisariaPatología hipotálamo-hipofisaria
InfertilidadInfertilidad
Transición a la menopausiaTransición a la menopausia
EJE GONADAL: LH-FSH-E2
APLICACIONES CLÍNICAS
79. Ayuno de 8 hsAyuno de 8 hs
Muestra: sueroMuestra: suero
Extracción en fase lútea media: día 20 a 22 del ciclo menstrualExtracción en fase lútea media: día 20 a 22 del ciclo menstrual
Utilidad clínica
Ovulación Fase lútea adecuada
PROGESTERONA
VARIABLES PRE-ANALÍTICAS
81. EmbarazoEmbarazo
Estado fisiológico normal que seEstado fisiológico normal que se
extiende a lo largo de 40 semextiende a lo largo de 40 sem±15 días±15 días
Embarazo cronológicamente prolongado
Inmadurez o prematurez
82.
83.
84.
85.
86. GONADOTROFINA CORIONICA HUMANA
•Es una glicoproteína heterodimérica de PM 36700 constituida por
dos subunidades α y β, unidas entre sí por uniones no covalentes.
•La subunidad α es idéntica a la de las trofinas hipofisarias LH,
FSH y TSH.
•La subunidad β es diferente y en ella reside la especificidad
hormonal y estructural.
•Hormona producida en el embarazo normal por el
sinciciotrofoblasto, la enfermedad trofoblástica gestacional y
tumores no gestacionales poco diferenciados.
87. •Existe homología entre la subunidad β de hCG y la de las
trofinas hipofisarias: 85% con βLH, 36% con βFSH y 46% con
βTSH.
•La vida media de hCG intacta es de 36 horas.
•Indicador de viabilidad trofoblastica, pero también es un
marcador oncológico.
•Durante las primeras semanas de embarazo sus niveles se
duplican cada 48 hs, aproximadamente.
300.000 mu/ml
88. Utilidad clínica de la determinación de GonadotrofinaUtilidad clínica de la determinación de Gonadotrofina
Coriónica Humana yCoriónica Humana y sus variantessus variantes molecularesmoleculares
Diagnóstico de embarazo.Diagnóstico de embarazo.
Amenaza de aborto.Amenaza de aborto.
Diagnóstico diferencial del embarazo ectópico.Diagnóstico diferencial del embarazo ectópico.
Diagnóstico y control de la Enfermedad TrofoblásticaDiagnóstico y control de la Enfermedad Trofoblástica
Gestacional y oGestacional y ottros tumores productores.ros tumores productores.
89. ¿Como se informa hCG?
Pedido Medico
βhCG cualitativa Positivo (25 mUI/ml)
Negativo (5 mUI/ml)
βhCG cuantitativa
Sem después de la FUM Rango
3.3-4 16-156 mUI/ml
4-5 101-4870 mUI/ml
5-6 1100-31500 mUI/ml
6-7 2560-82370 mUI/ml
7-8 23100-151000 mUI/ml
8-9 27300-233000 mUI/ml
9-13 20900-291000 mUI/ml
13-18 6140-103000 mUI/ml
18-23 4720-80100 mUI/ml
23-41 2700-78100 mUI/ml
91. EMBARAZO ECTOPICOEMBARAZO ECTOPICO
Niveles de hCGNiveles de hCG
a- en descensoa- en descenso
b- constantes y disminuidosb- constantes y disminuidos
c- incremento subnormalc- incremento subnormal
(meno(menorr del 53% en 48 hs)del 53% en 48 hs)
92. EMBARAZO ECTOPICOEMBARAZO ECTOPICO: zona de discriminaci: zona de discriminaciónón
a)a) hChCG (suero): 1500 - 2500 mUI/mlG (suero): 1500 - 2500 mUI/ml
Compatible con la visualización deCompatible con la visualización dell sacosaco
gestacional intrauterino normal, porgestacional intrauterino normal, por
ultrasonografía transvaginal.ultrasonografía transvaginal.
b)b) hCG (suero): 6000 - 6500 mUI/mlhCG (suero): 6000 - 6500 mUI/ml
Compatible con la visualización deCompatible con la visualización dell sacosaco
gestacional intrauterino normal, porgestacional intrauterino normal, por
ultrasonografía transabdominal.ultrasonografía transabdominal.
93. Murray, H. et al. CMAJ 2005;173:905-912
Fig. 2: Transvaginal ultrasound image, showing early intrauterine gestational sac (GS) with
yolk sac (YS)
94. Enfermedad Trofoblástica Gestacional (ETG)
Es un conjunto de desórdenes del embarazo caracterizados por la anormal
proliferación del trofoblasto.
Clasificación
(Por examen histológico)
-Mola hidatiforme (completa o parcial)
-Mola invasora
-Coriocarcinoma gestacional
-
Características
-Cursan con niveles de hCG anormalmente elevados.
-Pueden ser de evolución benigna o en menor proporción,
maligna.
-Si son diagnosticados tempranamente, la mayoría curan.
-Metástasis mas comunes en Hígado y cerebro
95. Mola hidatiforme: 1/1500 embarazos y 1/600 abortos
terapéuticos
Coriocarcinoma gestacional: 1/20.000 a 1/40.000 embarazos
-Después de la evacuación de una mola, aproximadamente el 20% de las
pacientes desarrolla secuelas malignas que requieren quimioterapia.
-El 50% de los casos de coriocarcinoma gestacional se presenta después de un
embarazo de término, el 25% proviene de un embarazo molar y el 25%
restante de otros eventos gestacionales.
Incidencia de la Enfermedad Trofoblástica Gestacional
96. Se considera que una paciente esta curada cuado durante un año presentan
Valores de hCG < a 1 mUI/ml
Iniciar Quimioterapia
98. < 75%< 25%< 25%< 25%xhCG sin péptido
C-terminal
< 25%NR< 25%< 25%xß core fragment
< 25%xxxxhCG nicked
xxxxxhCG
hiperglicosilada
< 25%< 75%xxxSubunidad ß libre
de hCG
xxxxxhCG intacta
Serono
MAIA
clone*
Bayer
ACS180*
Abbott
AxSym*
Beckman
Access*
DPC
Immulite*
Variante
molecular de hCG
* mUI/ml Importante indicar el método
utilizado en el informe
99. ¡MUCHAS GRACIAS!
El aborto y embarazo ectópico cursa con niveles bajos de hCG
Mientras que la enfermedad trofoblastica y los tumores testiculares
Cursan con niveles altos de hCG
Notas del editor
El sincitiotrofoblasto es la capa más externa del trofoblasto embrionario, adosada al citotrofoblasto, cuya función es erosionar los capilares del endometrio materno en el desarrollo de la circulación placentaria.
El sincitiotrofoblasto está compuesto por células multinucleadas provenientes de células mononucleadas del citotrofoblasto. Esta proliferación del sincitiotrofoblasto ocasiona la formación de vellosidades coriónicas y los espacios intervellosos con los que incrementan masivamente la superficie disponible para el intercambio de nutrientes entre la madre y el feto. Al cabo de dos semanas es recubierta por una membrana proveniente del mesodermo llamada lámina coriónica. Las células multinucleadas del sincitiotrofoblasto producen y secretan la gonadotrofina coriónica humana (hCG), que puede ser detectable aproximadamente a partir de la segunda semana de la gestación.