HALOS DE INHIBICIÓN DE TRES TIPOS DE ANTIBIOBIOTICOS EN TRES COLONIAS DIFERENTES

1. Integrantes:
- Leidy Guacanes
- Diana Motta
- Juan David Gutiérrez
- Lorena García
Área: Microbiología
Docente: Julio Blanco
Facultad: Ciencias Agropecuarias
Semestre IV
HALOS DE INHIBICIÓN DE TRES TIPOS DE ANTIBIOBIOTICOS EN TRES COLONIAS
DIFERENTES

2. INTRODUCCION1
• Un antibiograma es un método para probar que tan resistente o susceptible es un
microorganismo (bacteria) ante un o unos antibióticos.
• esta prueba se realiza en los laboratorios, en este caso se realizó en el laboratorio de
microbiología de la Universidad de la Amazonía con tres diferentes antimicrobianos
(antibióticos capaces de contrarrestar una bacteria generadora de infección)(Val, n.d.)
Sobre tres agar sangre (cada uno contaminado con una colonia bacteriana diferente),
para así analizar cuál de estos antimicrobianos tiene una mayor eficacia.
• Para la investigación se requiere de las medidas de los halos de inhibición los cuales
representan la efectividad del antimicrobiano sobre la bacteria utilizada.

3. MATERIALES2

4. MATERIALES3

5. METODOLOGIA4
• se procedió a realizar repiques de un
cultivo anteriormente realizado por otro
grupo de estudiantes en un agar sangre
que contenía 1 siembra de material
biológico extraído de faringe de aves
mediante un hisopado, donde se
observaron 3 tipos de colonias diferentes
desde el punto de vista morfológico
(imagen 18). las 3 colonias estudiadas se
denominaron colonia 1, colonia 3 y colonia
5 respectivamente.
Imagen 18, de colonias, colonia 1, colonia
3 y colonia 5. Autor: paula Pedroza.
Tomada en: laboratorio de biología UDLA

6. 5
• El repique consistió en dividir en 2 partes cada
una de las tres colonias presentes en el cultivo de
agar sangre, donde la mitad de cada una de estas
se diluyó en 0.5 ml de agua destilada en un tubo
de ensayo (imagen 19)
• Como siguiente paso mediante un hisopo se
reubicó la colonia diluida en un nuevo cultivo de
agar sangre para cada colonia, los cuales fueron
denominados con los números 1, 3 y 5 al igual
que su primera denominación (imagen 20).
Imagen 19, dilución de colonias en agua destilada, autor: Paula
Pedroza, Tomada en: laboratorio de biología UDLA
Imagen 20, colonias reubicadas en agar sangre. Autor: Paula
Pedroza, Tomada en: laboratorio de biología UDLA

7. • Siguiendo el proceso, se realiza un
antibiograma el cual consistió en aplicar
sobre cada uno de estos agares (1, 3,5) los
siguientes medicamentos: OXTETRACILINIA,
ENROFLOXAXINA y CEFTIOFUR (imagen 21)
utilizando papel fragmentado e
impregnando para la fácil manipulación y
distinción del medicamento, el cual fue
adherido al agar repicado (imagen 22).
Imagen 21, medicamentos a impregnar. Autor: Paula Pedroza,
Tomada en: laboratorio de biología UDLA
Imagen 22, agregando el medicamento en el agar sangre por medio del
papel fragmentado. Autor: Paula Pedroza, Tomada en: laboratorio de
biología UDLA

8. • El siguiente paso es realizar los extendidos para hacer
la respectiva observación de la morfología de las
bacterias de la otra mitad de la colonia restante.
• Para esto, inicialmente se encendió el mechero y se
manipulo hasta obtener una llama constante (en lo
preferible la llama azul).
• Seguidamente se esterilizó el asa con la llama del
mechero por unos segundos, y se realizó una toma del
material de la colonia Identificada previamente;
• este material se deposita en una lámina portaobjetos
dispuesta con una gota de agua destilada (imagen 23)
y debe ser puesta aplicando leves golpes sin rayar la
lámina con el asa.
• Posteriormente esta lámina debe ser secada con ayuda
del mechero (imagen 24).
Imagen 23, agregando una gota de agua destilada,
autor: Juan David Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de
biología UDLA.
Imagen 24, secado de la lámina, autor: Juan David
Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de biología
UDLA.

9. • El siguiente paso es realizar la tinción para clasificar las
bacterias de acuerdo al protocolo de gram (gram + o gram
-); la tinción se realiza con 4 reactivos diferentes (imagen
11).
• Inicialmente se toma el primer reactivo, violeta de genciana
(imagen 25).Este se utiliza para teñir las bacterias, se une a
componentes celulares de carga negativa.
• Al1 minuto sobre las láminas y luego del tiempo límite se
retiró con agua destilada.
• se aplicó Lugol en el extendido de la placa (imagen 26),
este se utiliza para reafirmar la tinción.
• Posteriormente se aplica el alcohol cetona. Este se utiliza
con el fin de debilitar la capa de peptidoglucano de las
bacterias
• Por último, se aplicó el reactivo safranina (imagen 27), con
el fin de realizar la misma función que el primer reactivo, el
cual es teñir las bacterias.
Imagen 25, tinción con violeta de giancina, autor: Juan
David Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de biología
UDLA.
Imagen 26, tinción con Lugol, autor: Juan David Gutiérrez.
Tomada en: laboratorio de biología UDLA.
Imagen 27, tinción con safranina, autor: Juan David
Gutiérrez. Tomada en: laboratorio de biología UDLA.

10. • A continuación, se procede a identificar a
simple vista las bacterias gran + y gran -
(imagen 28) y posteriormente se hace la
observación correspondiente en el microscopio
para identificar la morfología de cada bacteria
observada (ver en resultados).
• El siguiente paso es realizar el antibiograma
con las tres colonias identificadas para obtener
su reacción frente a los medicamentos
utilizados (imagen 29).
• Todo este procedimiento permite realizar un
análisis profundo y acertado de la especie de
microorganismo y su patogenicidad.
Imagen 28, terminado de tinción, autor: Paula
Pedroza. Tomada en: laboratorio de biología UDLA
Imagen 29, colonia 1, colonia 3 y colonia 5. autor: Diana
Motta. Tomada en: laboratorio de biología UDLA

11. RESULTADOS
• CEFTIOFUR:ejerce su acción antibacteriana
modificando la integridad de la pared celular,
mediante el bloqueode la transpeptidasa.
• ENROFLOXACINA:Es un bactericida absoluto, es
decir que actúa aún en fase de reposo de las
bacterias, esta es una característica común de las
fluoroquinolonas.
• OXITETRACICLINA:Actúa sobre los gérmenes
susceptibles inhibiendo la síntesis de proteína en la
fracción 50 del ribosoma. Tiene actividad contra
bacterias Gram (+), Gram (–).

12. Cultivo 1
• La colonia se presenta con
bordes enteros y elevación
baja convexa, de color
blanco grisáceo.
Imagen 30, colonia con bordes enteros y
elevación baja convexa, autor: Paula
Pedroza. Tomada en: laboratorio de
biología UDLA.
• La morfología del
extendido observado al
microscopio se relacionó
con cocobacilos gram -.
Imagen 31, Cocobacilos gram-, autor:
Paula Pedroza. Tomada en: laboratorio
de biología UDLA.
• En el antibiograma que se realizó,
los diámetros de los halos de
inhibición fueron diferentes,
presentando mayor eficacia el
Ceftiofur.
Imagen 32, 1. Oxitetraciclina, 3,5cm, 2. Ceftiofur, 4.2cm,
3. Enrofin, 3cm.-, autor: Paula Pedroza. Tomada en:
laboratorio de biología UDLA.
El microorganismo que más se relaciona a la
morfología observada de cocobacilos gran –
es la pasteurella multocida.

14. Cultivo 3
• La colonia se presenta
con bordes enteros y
elevación baja convexa,
de color amarillo dorado.
Imagen 33, colonia con bordes enteros y
elevación baja convexa, color amarillo
dorado. autor: Paula Pedroza.
Imagen 34, Staphilococcus gram
positivo, autor: Paula Pedroza.
• La morfología del
extendido observado al
microscopio se relacionó
con cocobacilos gram -.
• En el antibiograma que se
realizó, los diámetros de los
halos de inhibición fueron
diferentes, presentando mayor
eficacia la Enrofloxacina.
El microorganismo que más se relaciona a la
morfología observada de Staphilococcus gram +,
es Staphilococcus Aureus.

15. • Staphilococcus Aureus.
Resistente a:
meticilina, la amoxicilina y la penicilina

16. Cultivo 5
Imagen 38. Colonias con bordes redondeados
y color blanco traslucido.
• La colonia se presenta
con bordes redondeados
• La morfologia observada em
el extendidococos de tamaños
irregulares organizados en
racimo o estafilococcus Gram
postivivo.
Imagen 37. Staphilococcus gram +
El microorganismo que más se relaciona a la
morfología observada de Staphilococcus gram +,
es staphylococcus epidermidis.
• En el antibiograma que se realizó, los diámetros de los
halos de inhibición fueron diferentes, presentando
mayor eficacia la Enrofloxacina.

17. staphylococcus epidermidis
• La colonia se presenta con bordes redondeados
Sensibilidad a vancomicina: positivo.
epidermidis, Flora normal de piel y mucosas y
faringe, esófago, ampliamente distribuido sobre
toda la superficie corporal.
MORFOLOGÍA: son cocos
Gram positivos, se observa
asociación en racimos
irregulares (similar aún
racimo de uvas

18. Conclusiones
• La importancia que tiene conocer los antibiogramas como
futuros Médicos Veterinarios es realmente importante, ya
que con este simple método podemos hacer un
diagnóstico más certero frente a las distintas bacterias que
puedan presentar nuestros pacientes.
• De acuerdo a los resultados vemos que en general los
halos de inhibición fueron bastante grandes lo que quiere
decir que hay algunas bacterias que son muy sensible a los
diversos antibióticos usados en este trabajo.

19. Conclusiones
• El antibiótico Ceftiofur tuvo una mejor acción de control en
la colonia uno debido a que su mecanismo de acción es
más activo en bacterias gram -, aunque la bacteria
encontrada tuviera alta resistencia ante antimicrobianos, era
el mejor calificado para contrarrestarla.
• El antibiótico Enrofloxacina enfocado al uso veterinario de
bacterias gram – y en el caso de bacterias gram + como son
los Estafilococos, tuvo más efectividad debido a sus
condiciones de acción.