Indicaciones e Interpretación de pruebas inmunológicas

1. Indicaciones e interpretación de las pruebas
inmunológicas en Reumatología

2. Objetivos:
• Conocer generalidades e indicaciones de las pruebas inmunológicas
utilizadas en Reumatología.
• Describir las principales técnicas de detección y utilidad de las
pruebas inmunológicas en enfermedades autoinmunes.
• Introducir a la interpretación correcta de los patrones de HEp-2
básicos.

3. Introducción
• Los autoanticuerpos encontrados en enfermedades autoinmunes
son el resultado de errores en los mecanismos de regulación o de un
aumento considerable en los autoantígenos.
Rol importante como
marcadores de autoinmunidad
y diagnóstico
Pocos como indicadores
de actividad de la
enfermedad
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

4. Generalidades
• La diversidad de manifestaciones clínicas en lupus eritematoso
sistémico está acompañado por un gran número de anticuerpos.
• Aproximadamente 116 anticuerpos reportados en Lupus.
1948, Malcolm Hargraves, hallazgo
de células LE.
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

5. Indicaciones de las pruebas inmunológicas
• Apoyar el diagnóstico de enfermedades reumáticas. Su uso siempre debe ser basado
en un conjunto de criterios clínicos.
• Clasificar fenotipos de una patología autoinmune.
• Evaluar la actividad de la enfermedad.
• Definir pronóstico.
En la investigación científica para comprender la fisiopatología de diversas
enfermedades reumáticas y explicar la contribución genética a la
autoinmunidad.
Hani Almoallim and Mohamed Cheikh. Skills in Rheumatology. Springer. 2021.

6. Células HEp-2
• Los anticuerpos reconocen macromoléculas integradas en la estructura
del núcleo celular y algunos componentes citoplasmáticos.
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.
En 1970 se comenzó a utilizar las células HEp-2,
líneas epiteliales humanas derivadas de
carcinoma laríngeo.

7. Patrones por Inmunofluorescencia indirecta
Células HEp-2:
• Facilidad de crecimiento
• Núcleo grande
• Permiten detectar
anticuerpos contra
antígenos que dependen
del ciclo celular.
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

8. Técnicas
• La detección de ANA mediante IFI es un tamizaje, que tras ser positivo
requiere una segunda prueba que aumente su especificidad.
ELISA, Radioinmunoanálisis, Western blot,
Quimioluminiscencia
Título Porcentaje en personas sanas
1:40 32%
1:80 13%
1:160 5%
¡Siempre asociarlos a la clínica
que presenta el paciente!
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.
Pueden ser positivos en infecciones y neoplasias (<).

9. Anticuerpos Antinucleares (ANA)
• Son autoanticuerpos contra antígenos nucleares o componentes citoplasmáticos
• No tienen valor en evaluar
actividad.
• Un resultado negativo
puede descartar LES.
Hochberg, Marc y colaboradores. Rheumatology. Séptima edición. 2019.

10. Cinco patrones básicos de ANA:
• Periférico
• Homogéneo
• Moteado
• Centrómero
• Nucleolar
No reportado en
HEp-2

11. https://www.anapatterns.org/index.php

12. AC-1 - Nuclear homogéneo
Sinónimo Difuso
Descripción
Las células en mitosis tienen
la cromatina intensamente
fluorescente de manera
homogénea.
Antígenos
asociados
dsADN, nucleosomas,
histonas.
Enfermedades LES, lupus inducido por
fármacos, hepatitis
autoinmune.
https://www.anapatterns.org/index.php

13. Anti- DNA
Reconocen el DNA de cadena
doble o simple.
• DNA ss: muy sensible pero
poco específico.
• DNA ds: muy específico.
Alta asociación con la actividad de la enfermedad, especialmente con nefritis lúpica,
compromiso hepático y neurológico.
https://www.anapatterns.org/index.php

14. Tinción positiva del cinetoplasto
Especificidad (97,2%)
Sensibilidad (33,6%)

15. AC-3 - Centrómero
Sinónimo Cinetocoro
Descripción
Gránulos dispersos en
interfase y alineados en la
cromatina de las células
mitóticas.
Antígenos
asociados
CENP-B
Enfermedades
Esclerosis sistémica cutánea
limitada, colangitis biliar
primaria.
< en LES y Sjögren
https://www.anapatterns.org/index.php

16. Anticuerpos dirigidos contra proteínas nucleares no histonas que pueden extraerse del
núcleo con soluciones salinas de baja fuerza iónica.
Anticuerpos antiantígenos extraíbles del núcleo (ENA)
SSA
(Anti-Ro)
SSB
(Anti-La)
Anti-RNP Anti-Sm
Anti-Scl70 Anti-Jo 1
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

17. Sinónimo Nuclear punteado fino
Descripción
Gránulos diminutos finos a
través de todo el
nucleoplasma.
Antígenos
asociados
SS-A/Ro (52 kD y 60 kD)
SS-B/La (45 kD)
Implicaciones
Sjögren, LES, Lupus cutáneo
subagudo, lupus neonatal,
bloqueo cardíaco congénito
AC-4 - Nuclear granular fino
https://www.anapatterns.org/index.php

18. AC-5 - Nuclear granular grueso/ grande
https://www.anapatterns.org/index.php
Sinónimo Nuclear punteado grueso
Descripción Gránulos gruesos a través de
todo el nucleoplasma.
Antígenos
asociados
hnRNP, U1RNP, Sm, ARN
polimerasa III.
Enfermedades EMTC, LES, ES

20.  U1, U2, U3, U4, U5 y U6 forman complejos denominados ribonucleoproteínas
nucleares pequeñas (snRNP).
 Sm- sitios de unión para snRNP.
Sm y RNP
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

21. Anti-RNP Títulos altos de U1 RNP (1:
1600)
Enfermedad
mixta del tejido
conectivo
Sinovitis
Miositis
Manos
edematosas
(puffy)
Fenómeno
de
Raynaud
Esclerodactilia
Títulos bajos
25% en LES
U3 RNP (anti- fibrilarina)
Esclerosis sistémica
Riesgo de hipertensión
arterial pulmonar
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

22. AC-29 – DNA topoisomerase I like
https://www.anapatterns.org/index.php
Nuevo patrón
Descripción
Tinción nucleolar o
perinucleolar puntiforme en
las células en interfase.
Antígenos
asociados
Scl-70-like, Scl-86, DNA
Topo I
Enfermedades Esclerosis sistémica
cutánea difusa

23. Patrones citoplasmáticos
AC-19 Citoplasmático granular fino denso (LES, LES juvenil, LES neuropsiquiátrico,
nefritis lúpica, enfermedad hepática).
Antígeno: proteína P ribosomal.
• Se detectan en el 12-16% de pacientes
con LES.
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

24. Inmunofluorescencia indirecta
ANA Hep-2 Positivo
Dilución
1: 80
1: 160
Patrón
AC-1 Difuso
Quimioluminiscencia
DNAds
Resultado Valor de referencia Unidades
200 CU
Negativo
Intermedio
Positivo
Siempre seguir un orden de lectura…

25. Tabla 1. Sensibilidad y especificidad de los anticuerpos en el
diagnóstico de LES.
Mayor
especificidad
Elena Kokuina y colaboradores. Anticuerpos antinucleosoma frente a marcadores inmunológicos convencionales en el diagnóstico de la actividad del lupus
eritematoso sistémico. Revista cubana de medicina vol.53 no.4 Ciudad de la Habana sep.-dic. 2014.

26. Hipocomplementemia (C3, C4)
• Se pueden utilizar para monitorear la actividad lúpica, en especial nefritis.
*Enfermedades reumáticas: LES, crioglobulinemia, poliarteritis nodosa y vasculitis urticarial.
Inmunodeficiencia hereditaria
• Decremento en la producción
Inmunodeficiencia adquirida
• Incremento en el consumo
• Infecciones
• Glomerulonefritis
• Pérdida urinaria
• Enfermedades reumáticas*
• Decremento en la producción
• Disminución de la síntesis hepática
Hani Almoallim and Mohamed Cheikh. Skills in Rheumatology. Springer. 2021.

27. Tabla 2. Sensibilidad de los anticuerpos y el complemento para la
actividad lúpica.
Elena Kokuina y colaboradores. Anticuerpos antinucleosoma frente a marcadores inmunológicos convencionales en el diagnóstico de la actividad del lupus
eritematoso sistémico. Revista cubana de medicina vol.53 no.4 Ciudad de la Habana sep.-dic. 2014.

28. Anticuerpos antifosfolípidos
• Grupo heterogéneo de anticuerpos de isotipo
IgG, IgM e IgA dirigidos contra fosfolípidos o
proteínas de unión a fosfolípidos.
• Localizados en la membrana de células
endoteliales, plaquetas y células involucradas
en la cascada de la coagulación.
• Implicación en inflamación, trombosis,
vasculopatía y complicaciones del embarazo.
SAF secundario
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

29. Indicaciones
• Todo paciente con LES (30% de positividad).
• Pérdidas fetales recurrentes.
• Trombosis venosa o arterial sin causa aparente.
• Hallazgo incidental de prolongación del tiempo parcial
de tromboplastina en pacientes asintomáticos.
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

30. • El primer antígeno blanco de los aPL que se identificó fue la cardiolipina en 1941.
• En 1990 se reportó que los aCL están dirigidos contra el complejo
B2GPI/cardiolipina.
Positivos en el 80% de los pacientes con SAF.
También se pueden encontrar en enfermedades infecciosas, como
sífilis, fiebre Q e infección por VIH.
Anticuerpos persistentes en < 1% de personas sanas.
Incluidos en los criterios clasificatorios, la presencia de aCL de isotipo IgG e IgM, en
títulos medio o altos (> 40 GPL).
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

31. Antígenos reconocidos por los anticuerpos antifosfolípidos
• Beta-2-glucoproteína I
• Cardiolipinas
• Protrombina
• Fosfatidilserina
• Fosfatidilinositol
• Anexina V
• Proteína C
• Proteína S
• Activador del plasminógeno tisular
• Factor VII
• Factor XI
• Factor XII
• Componente del complemento C4
• Factor del complemento H
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

32. Anticoagulante lúpico
• El término se utilizó por primera vez en el año 1972.
• La medición es una prueba funcional que utiliza plasma en lugar de suero y
requiere un proceso de 4 pasos:
1. Prolongación de TPT
2. No corrección de la prueba de coagulación prolongada, al
adicionar plasma normal pobre en plaquetas.
3. Corrección de la prueba de coagulación prolongada, al
adicionar plasma rico en plaquetas.
4. Se deben excluir otros inhibidores.
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

33. Presencia de anticuerpos antifosfolípidos Síndrome antifosfolípido
R. Cáliz, et al. Recomendaciones de la Sociedad Española de Reumatología sobre síndrome antifosfolípido primario. Parte I: Diagnóstico, evaluación y
tratamiento. Reumatología clínica. 2020; 16(2): 71–86.

34. Factor reumatoideo y anti CCP
• Los títulos altos tienen un mayor valor predictivo positivo en AR.
• Pueden experimentar una enfermedad articular más agresiva, erosiva y con
manifestaciones extraarticulares.
• El cambio en el valor no refleja cambios en la actividad de la enfermedad.
Indicarlos en el contexto de pacientes con rigidez matinal prominente, con síntomas secos, o
con artralgias/ artritis en una distribución simétrica de pequeñas articulaciones.
Hani Almoallim and Mohamed Cheikh. Skills in Rheumatology. Springer. 2021.

35. Factor reumatoide
Sensibilidad: 50-85%
Positividad en ancianos sanos: 10-25%,
Jóvenes sanos: 2-4%
Técnicas: aglutinación, nefelometría,
ELISA, Quimioluminiscencia
Hani Almoallim and Mohamed Cheikh. Skills in Rheumatology. Springer. 2021.

36. A. Gómez Centeno. Anticuerpos antipéptidos citrulinados en la artritis reumatoide. Revista Española de Reumatología.
Elsevier. 2004.
Marcadores en artritis reumatoide

37. Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos (ANCA)
• Indicarlos ante la sospecha de vasculitis sistémica.
• Pueden ser positivos en patología renal aislada.
• Se han asociado a vasculitis inducida por fármacos o uso de drogas.
Patrones en inmunofluorescencia indirecta
Tatiana Mendez-Rayo y colaboradores. Interpretación de los autoanticuerpos en enfermedades reumatológicas. Revista Colombiana de Reumatología. 2018.

38. • Los ANCA pueden pertenecer a cualquiera de las clases de inmunoglobulinas
IgG, IgM e IgA, pero predominantemente son de tipo IgG en la fase activa de la
enfermedad.
• Generalmente desaparecen durante la remisión y reaparecen en las recaídas.
Controversial para evaluar actividad.
• Patrón atípico: Enfermedad inflamatoria intestinal, hepatitis autoinmune
La ocurrencia de ambos anticuerpos en un mismo paciente es extremadamente raro y puede
deberse a infecciones o vasculitis inducida por fármacos.
Turki Al-Hussain and cols. Pathophysiology of ANCA-associated Vasculitis. Anatomic Pathology 2017.

39. Tabla 1. Prevalencia de anticuerpos en las vasculitis ANCA
Los ANCA también ocurren en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal, y se detectan por
inmunofluorescencia indirecta en 60% de los pacientes con colitis ulcerativa y 20% de aquellos con enfermedad de
Crohn.
Borja Quiroga y Jose Luño. Glomerulonefritis Rápidamente progresivas. Sociedad Española de Nefrología 2021.

41.  Fuerte asociación entre autoanticuerpos y distintos fenotipos clínicos.
 60 al 70% de los pacientes con Miopatía inflamatoria idiopática tienen un autoanticuerpo conocido.
 Muchos anticuerpos asociados a miositis son citoplasmáticos.
Petros Efthimiou. Absolute Rheumatology Review. Springer. 2020.

42. Utilidad de los anticuerpos miositis específicos
• Contribuir al diagnóstico limitando la necesidad de procedimientos invasivos
• Definir subgrupos de pacientes según fenotipos clínicos
• Indicar pacientes con mayor riesgo de malignidad
• Apoyar la predicción de resultados basados ​​en su presentación clínica
• Orientar el tratamiento en casos específicos
Petros Efthimiou. Absolute Rheumatology Review. Springer. 2020.

43. Otros anticuerpos
Anti-neutrófilos Anti-linfocitos
Anti-
plaquetarios
Anti-
trombopoyetina
Anti-receptor de
trombopoyetina
Anticuerpos
calientes de tipo
IgG
Carlos León Céspedes, Rafael Rojas Sáurez, Fabiola Fuentes Alfaro, Andrea Hernández Valverde. Las citopenias en el lupus eritematoso sistémico. Revista Clínica de la Escuela de Medicina UCR-HSJD.
Octubre 2019.

44. Luisa Servioli y colaboradores. Citopenias hematológicas en enfermedades autoinmunes sistémicas. Arch Med Interna 2014; 36(3):101-109.

45. HLA-B27 en espondiloartritis seronegativa
• Alelo del MHC de clase I
• Forma parte de los criterios ASAS
• 80- 95% en espondilitis anquilosante
• 59- 81% en artritis reactiva
• 56% en EII- compromiso axial
• 25% en artritis psoriásica
Petros Efthimiou. Absolute Rheumatology Review. Springer. 2020.
Indicarlo en pacientes menores de 45 años con
dolor lumbar inflamatorio por más de 3 meses.

46. Puntos claves:
• Las pruebas inmunológicas apoyan el diagnóstico en enfermedades reumáticas.
• Los anticuerpos con capacidad de negativizarse durante la remisión y aumentar en
recaídas tienen valor en la evaluación de la actividad de la enfermedad; sin
embargo, son pocos, la mayoría sólo ayudan al diagnóstico.
• En la actualidad algunos anticuerpos tienen utilidad pronóstica principalmente en
miopatías y esclerosis sistémica.
• Los patrones de ANA en HEp-2, son identificados por inmunofluorescencia indirecta
y de ser positivos, deben complementarse con pruebas cuantitativas específicas
para los antígenos detectados.