Diagnosis Test in inflammatory bowel disease.

1. José Antonio Castellano del Toro
FIR-1 Análisis Clínicos
H.U.G.C.D.N.
Abril 2014

2. .
• EII: Enfermedad de Crohn (EC), Colitis Ulcerosa
(CU) y Colitis Indeterminada.
• Edades tempranas (15-35 años), evolución crónica,
brotes y tendencia a la NO CURACIÓN¡¡¡
• Etiología desconocida
• Lesión asociada a respuesta inmunológica de
extensión variable.
• Objetivo: Búsqueda de biomarcadores que
ayuden en el diagnóstico y monitorización de la
enfermedad.

3. 1. Incidencia en poblaciones occidentales:
5-10 casos/ 100.000 habitantes
•Colitis Ulcerativa: 1/1000 habitantes
•Enfermedad de Cröhn: 1/1500 habitantes
•España: 8-16 casos / 100.000 habitantes
(CU > 2 veces EC)
2. Prevalencia:
-Distribución Norte > SUR
( Caucásicos y judíos > raza negra, asiática)
-Sexo: Sin predominio significativo
Ligeramente aumentado en mujeres
-Edad: 15-35 años y 60-80 años (CU)
-Predominio urbano: Dieta alta en grasas
y pobre en fibras sobretodo en CCR.
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4. E
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5. FACTORES GENÉTICOS
RESPUESTA INMUNOLÓGICA
(innata/adquirida)
FACTORES AMBIENTALES
MICROFLORA
INTESTINAL
( patógena vs comensal)
EII
(CU/EC)
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6. • Fiebre 1er síntoma
• Enfermedad contínua
• Dolor abdominal
contínuo, espontáneo
(cuadrante inferior derecho)
empeoramiento en la palpación
• Diarrea ( 3-4 movimientos
intestinales / día ) consistencia
semilíquida/acuosa y no sangre
visible, aunque de sangre oculta
es frecuente
• Alteración de la
absorción sales biliares
(esteatorrea)
En ocasiones fiebre y
pérdida de peso (10-15
kg/casos grave)
 Enfermedad intermitente.
 Dolor abdominal tipo
cólico , a veces grave
( no confundir con apendicitis ).
Diarrea recurrente ≠ nº
de deposiciones/día, con o sin
sangrado o con moco rectal.
 Tenesmos
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7. Manifestaciones extradigestivas:

8. Todo el Tubo Digestivo Sólo Colon
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9. Colonoscopia+ biopsia (gold stándard)
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COLITIS ULCEROSA
ENFERMEDAD DE CRÖHN

10. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS
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- Técnica de imagen : gammagrafía con leucocitos marcados
-“Marcadores Biológicos de Actividad” o Reactantes de Fase
Aguda : Anemia, leucocitosis, PCR, Velocidad de Sedimentación
Globular (VSG), Alfa-1-glicoproteína ácida (Orosomucoide),
calprotectina fecal.
-Marcadores serológicos de autoinmunidad: pANCA (más frecuentes
en CU 60%, 10-15% EC) y pASCA (más frecuente en EC 50-80%)

11. OTROS MARCADORES
SEQC (Bioquímica de las heces) 2008
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12. 1. Aminosalicilatos:
- 5-ASA = mesalazina (inhibe la 5-Lipooxigenasa)
- Sulfasalazina (5-ASA+ sulfapiridina) “profármaco” (comprimidos, supositorios o enemas
500 mg)
2. Glucocorticoides:
- Prednisona, Budesonida, 6m-prednisona (comprimidos, enemas, espumas rectales, viales
i.v.) 35-50 mg/24h. v.o.
3. Inmunosupresores:
- Azatioprina, 6-mercaptopurina, metotrexato, ciclosporina.
ADEMÁS: Metronidazol. (E. Cröhn ileal, EII severa)
¡OJO! No pautar antidiarreicos opiáceos o anti-Colinérgicos
MEGACOLON TÓXICO: deshidratación, hipotensión,shock, distensión y dolor abdominal,
fiebre, taquicardia, leucocitosis…

13. Terapia Biológica y nuevos agentes:

15. CALPROTECTINA
FECAL

16. CALPROTECTINA
• Proteína (S100A8) 36 Kda fijadora de Ca2+
y Zn2+
.
• Citoplasma de neutrófilos (60%) y monocitos + macrófagos
reactivos.
• Propiedades bacteriostáticas y fungistáticas.
• Interviene en mecanismos de defensa e inflamación.
• Efecto antiproliferativo tumoral. (in vitro)
• Concentración en heces 6:1 frente a la plasmática ( saliva, orina y
LCR).
 Ventajas:
a)Elevada resitencia a la degradación enzimática y bacteriana
(desarrollo del test)
b)Gran estabilidad en heces: hasta 7 días a temperatura ambiente.
Si almacenamiento > 7 días (congelar -20ºC)

17. TIPOS DE ENSAYOS
1- Enzimoinmunoanálisis (ELISA): “gold estándar”.
-placas (96 pocillos de reacción) (Eurospital®)R*
-monotest (1-10 pocillos de reacción individual) (Alegría®)
T’= 2 horas.
2- Fluoroenzimoinmunoensayo(ELiA/FIA): (Thermofischer-Phadia®)
Fluorimetría aumenta “sensibilidad”. T’=2 horas.
3- Inmunocromatografía:(Quantum Blue- Bühlmann®)
Interpretación de los resultados:

18. + -
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19. RANGOS DE REFERENCIA
Determinación
de Calprotectina
en heces
<50 µg/g 50-200 µg/g >200 µg/g
Enfermedad Funcional
Síndrome del Intestino o
Colon Irritable
Baja actividad Inflamatoria
EII en remisión
Enfermedad Orgánica activa
EII
Endoscopia, técnica de imagen,
muestra histológica,
exclusión de CCR
Diferenciar CU/EC;
Serología:ASCA
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20. RANGOS DE REFERENCIA
Concentraciones de CPF en los diferentes grupos (p < 0,001).
CPF media (DE), mg/kg
113,72 (113,15)
158,30 (155,81)
726,61 (533,18)
2.171,12 (2.133,61)

21. 1. ELISA
•En 1992 Roseth y cols. (2) primeros en determinar CF
10 μL
90 min = Resultado
LD=(15-1000 μg/g)
LD=(15-500 μg/g)

22. 2. Fluoroenzimoinmunoenzayo (ELiA/FIA)
LD=(15-3000 μg/g)
1. Antígenos de la FS únen
anticuerpos CF de la muetra
2. Se eliminan AC no
específicos y se unen AC
marcados al AC diana
formando un complejo.
3. Período de incubación:
-Elimina AC marcados no unidos.
-Complejo se incuba con agente de desarrollo.
4. Medimos Fluorescencia.
A mayor Fluorescencia, mayor % de AC
= Mayor concentración de CF

23. 3. Inmunocromatografía
Resultados:
Cuantificación
LD=(30-300 μg/g)

24. R
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Técnica BÜHLMANN ALEGRIA PHADIA Eurospital
Nº Muestras 33 21 37 ?
Sensibilidad 100% 100% 87,50% 95%
Especificidad 57,10% 92,30% 95,20% 93%
Concordancia
(K) 0,492 0,901 0,834 -
Eficacia 72,70% 95,20% 91,90% -
VALORACIÓN DEL ÍNDICE KAPPA
Valor de K Fuerza de concordancia
< 0.20 Pobre
0.21 - 0.40 Débil
0.41 - 0.60 Moderada
0.61 - 0.80 Buena
0.81 - 1.00 Muy buena
(www.medcalc.org ) MedCalc Software- Belgium

25. 1. Diferenciar Síndrome de Intestino Irritable (SII) vs EII
Niveles superiores de CF en EII. (Sensibilidad= 81,7% y Especificidad = 83,5%) Tibble et al. 2002
Identificar EC con Sensibilidad= 100% y Especificidad =97% ( cut-off = 30 μg/g)
Inconveniente: Necesidad de estudios multicéntricos con gran volúmen poblacional ¡¡¡¡
2.Cáncer colorectal: cribado y vigilancia de sujetos de alto riesgo.
(Poco estudiado) Marcadores más empleados: CEA, CA 19.9 y Sangre Oculta en Heces.
3. Monitorización de fármacos (sintomatología, índices clínicos)
-Aminosalicilatos, prednisona y azatioprina (tras 8 semanas colonoscopia)
- Infliximab y Adalimumab (niveles TNF-α) Sipponen T et al. 2008
4. Enteropatías inducida por AINES (niveles anormales CF)
5. Enfermedad Celíaca (no existen estudios concluyentes)
6. Otras patologías: Fibrosis quística, enteritis infecciosas, quimioterapia,
inmunosupresión.

26. CONCLUSIONES
• La CF es un marcador fiable de inflamación de la mucosa
intestinal.
• Económico y fácil de realizar (ELISA)
• Permite discriminar pacientes en riesgo de presentar una EII.
• Utilidad en la diferenciación de la EII del SII o SCI.
• Buena correlación con método de referencia (colonoscopia)
• Monitorización de la respuesta al tratamiento
• Predicción del riesgo de recidivas.

27. G
R
A
C
I
A
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En el hombre hay una serpiente: el
intestino, que tienta, traiciona y castiga.
Victor Hugo