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1. 1,5hs
a 37°C
24hs
a 37°C
Cultivo o.n.
MRS caldo
a 37°C en
microaerofilia
NUEVAS CEPAS DE LACTOBACILLUS SP. INHIBEN LA FORMACIÓN DE BIOFILM DE
CANDIDA SP. IN VITRO
Padilla Franzotti,CL1; Müller, MF1; Vizoso Pinto, MG1,2
1INSIBIO (UNT-CONICET). Lab. Central de Cs. Básicas. Fac. De Medicina-UNT.2 Cátedra de
Micología.Fac. de Bioqca, Qca. y Farmacia, UNT, Tucumán, Argentina.
mgvizoso@fm.unt.edu.ar
Cándida sp. (Ca) es un patógeno oportunista que causa infecciones superficiales y sistémicas, siendo la formación de biofilm un importante factor de virulencia por
conferirle mayor resistencia a los antifúngicos y las defensas del huésped en comparación con sus contrapartes planctónicas. Bacterias probióticas como Lactobacillus
sp. (Lb) surgen como una alternativa profiláctica y terapéutica para el tratamiento de candidiasis en nichos compartidos (superficies mucosas urogenitales,
gastrointestinales y orales).
CHROMagar Cándida Spider agar
FILAMENTACIÓNIDENTIFICACIÓN
Cepas Lactobacillus sp.
IBL: 034, 035, 031, 038 (L. fermentum), 027 (L. rhamnosus), 032,
033, 030, 037 (L. vaginalis), 029 y 028
Bacilos Gram positivos
•Homofermentativos IBL: 035, 027 y 032
•Heterofermentativos IBL:031, 038, 033, 030, 037, 029 y 028
Catalasa negativos
Cepas Cándida sp. IBL: 001, 002, 007, 009, 010, 015
Cepa
IBL
Resultado
001 C. albicans
002 s/ID
007 s/ID
009 C. albicans
010 s/ID
015 C. tropicalis
FORMACIÓN DE BIOFILM
Sin Inhibición con Sob. de Lb
7dias
a 37°C
48hs
a 37°C
Candida sp.
1x107 CFU/ml
ENSAYOS DE INHIBICIÓN (EI)
TRATAMIENTO DE
SOBRENADANTES
(Sob.)
Sob.
Sin trat.
• Neutralizado con NaOH 1N
• Calentado 5min a 96°C
• Neutralizado y Calentado
Cepas
IBL 031 y 035
Todos los Lb
Cuantificación con Cristal violeta
0,1% (Abs 595nm) con Técnica de
O’Tolle & Kolter
Curvas de Crecimiento de Biofilm a 37°C
CONCLUSIÓN
MATERIALESYMÉTODOSRESULTADOS
OBJETIVOS Aislar, seleccionar y caracterizar cepas de Lb con capacidad de inhibir el crecimiento planctónico y la formación de biofilm de 6 cepas de Ca aisladas
de vaginitis.
Abs595nm
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
Abs595nm
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
IBL015IBL007
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49
Abs595nm
Lecturas (c/30 min por 24hs)
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49
Abs595nm
Lecturas (c/30 min por 24hs)
IBL 031 IBL 035
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
1 4 7 101316192225283134374043464952555861646770737679828588919497
Abs595nm
Lecturas (c/ 30 min por 48hs)
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
1 4 7 101316192225283134374043464952555861646770737679828588919497
Abs595nm
Lecturas (c/30 min por 48hs)
Calentado 5 min 96°C
Calentado y Neutralizado
Sin Tratamiento
Neutralizado NaOH 1N
Sob.
Control 027 031 035 033 030 038 032 028 037 029
Control 027 031 035 033 030 038 032 028 037 029
Control - MRS
Sin tratamiento
Neutralizado NaOH 1N
EI
Etapa de
adherencia
Etapa de Formación de Biofilm
Cepas Lb IBL
Cepas Lb IBL
La actividad sobre biofilm de Ca de los Sob. de Lb IBL 031 y 035 se mantuvo después de ser neutralizados y tratados con calor, indicando la presencia
de otras moléculas inhibidoras además de los ácidos orgánicos. La sensibilidad de Ca IBL 007 y C. tropicalis frente a los Sob. de Lb fue variable según
la especie. Se requieren más estudios para identificar las moléculas responsables de la actividad antifúngica y anti-biofilm observada. Se sugiere que
la presencia de ciertos Lb en nichos mucosos compartidos con Ca, podrían contribuir a controlar el desarrollo de este patógeno oportunista.