Este documento resume las principales técnicas y metodologías utilizadas para el diagnóstico, prevención y control de enfermedades en acuicultura en Chile. Describe los procedimientos de muestreo, necropsia, siembra en medios de cultivo, pruebas bioquímicas, inmunoensayos como IFAT, PCR, ELISA e histología para identificar patógenos. También cubre la realización de antibiogramas y determinación de CMI para guiar el tratamiento antimicrobiano. El documento provee una visión general

1. Diagnóstico, prevención y control de
Enfermedades en Acuicultura, la experiencia de
Chile una situación a considerar.
Relator invitado: Dr. Juan Battaglia Aljaro DMV
Unidad de Microbiología de peces
Veterquimica S.A. Chile
jbattaglia@veterquimica.cl
Puno, Marzo del 2015.

2. Enfrentando las patologías en acuicultura.
1 • Diagnóstico
2 • Muestreo
3 • Veterinario
4 • Laboratorio
5 • Autoridad
6 • Historial

3. Mortalidad.
Indicadores de crecimiento:
Factor de condición
FCR
SGR
GF3
¿Qué ve el productor?
Deterioro Sostenido

4. La observación del comportamiento de los peces y la aparición de
anomalías externamente son las primeras señales que el productor
debe pesquisar para tomar las medidas necesarias.
Observación de sintomatología.

5. Necropsia.
Actividad que se realiza para analizar la sintomatología de los peces, que
consta de un análisis anatomopatológico externo e interno.
Aquí además se toman las muestras necesarias para los análisis posteriores
que pueden incluir:
Siembra en medios.
Sistema miniaturizados Api®.
Frotis para tinción.
Frotis para IFAT.
Muestras para PCR.
Muestras para CC.
Muestras para ELISA.
Muestra para histología.
Antibiograma y MICs.

6. Necropsia.

7. Existen diversas metodologías de tinción de frotis, las más utilizadas son:
Tinción de Gram.
Tinción de AOS.
Tinción de Giemsa.
Frotis para tinción.

8. Existe una gran variedad de pruebas bioquímicas que se realizan a las
bacterias pero existen algunas que son sumamente importantes, entre
las que se pueden destacar:
Forma celular
Motilidad
Gram
Oxidasa
Catalasa
Crecimiento a diferentes Tº y Salinidades.
Crecimiento en diferentes medios
Métodos convencionales en tubo y placa

9. Comercialmente existen una serie de medios de cultivos que pueden ser
divididos en tres categorías:
Generales
Selectivos o específicos
Metabólicos
Cultivos bacterianos.

10. Estos medios se caracterizan por presentar los nutrientes necesarios para el
desarrollo de una gran variedad de bacterias, sin embargo, no todas las bacterias
crecen en este tipo de medio.
Medios generales.

11. Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están:
TSA con y sin suplemente de NaCl. En este medio se puede crecer bacterias como Vibrio
anguillarum, V. ordalii, Aeromonas salmonicida y Yersinia ruckeri.
Agar Nutritivo: de amplio espectro.
Agar Chocolate: es un medio sumamente rico en nutrientes y se ocupa ampliamente en la
microbiología. En la acuicultura se utiliza para el crecimiento de P. salmonis.
Agar Marino (2216 de Zobbels): Agar para el aislamiento de bacterias marinas.
Medios generales

12. Estos medios se utilizan para aislar los patógenos de otras bacterias
ambientales.
También don usados para aislar bacterias de fastidioso crecimiento,
como Flavobacterium psychrophilum ,Tenacibaculum maritimum o
Renibacterium salmoninarum.
Medios Selectivos o específicos

13. Entre los más utilizados en el diagnóstico en acuicultura están:
TCBS: Selectivo para Vibrios.
MacConkey: Selectivo para Enterobacterias (Yersinia ruckeri y Aeromonas
salmonicida).
Columbia Blood Agar: Bacterias β Hemoliticas (Streptococcus spp).
TYES / AOA: selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de FW.
FMM: Selectivo para bacterias de la familia Flavobacteriacea de SW.
KDMC / KDM2: Selectivo para el patógeno de peces Renibacterium
salmoninarum.
Medios Selectivos o específicos

14. Medios Selectivos o específicos

15. Estos medios sirven para determinar actividades enzimáticas, degradación de
azucares y aminoácidos principalmente.
Entre los más utilizados para la caracterización de patógenos bacterianos
podemos encontrar:
Medio Descarboxilasa de Moller (Aminoácidos).
OF (Azucares).
Citrato de Simmons.
Medios metabólicos

16. Medios metabólicos

17. Immuno Florescent Antibody Technique.
Está técnica sirve para detectar al patógeno directamente en frotis de
órganos y lesiones mediante el uso de anticuerpos específicos que están
marcados con fluoróforos.
Existen una gran variedad de Kits comerciales para la realización de esta
herramienta diagnóstica.
IFAT.

18. La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una herramienta altamente utilizada para la
detección de patógenos bacterianos y virales principalmente.
Existen 2 tipos de PCR
PCR Convencional.
PCR en Tiempo Real.
PCR.
PCR convencional encontramos 3 tipos de protocolos:
PCR de Detección
PCR de Tipificación
RT–PCR.

19. En la literatura existe una gran cantidad de protocolos de PCR para la
detección de patógenos bacterianos de peces, entre los que podemos
encontrar:
Aeromonas salmonicida.
Yersinia ruckeri.
Flavobacterium psychrophilum.
Flavobacterium columnare.
Tenacibaculum maritimum.
Piscirickettsia salmonis.
Vibrio anguillarum.
Streptococcus phocae
Streptococcus iniae.
PCR convencional (Detección)

20. PCR en tiempo real.

21. PCR de tipificación.

22. Cultivo Celular

23. Enzyme Linked Immuno Sorbet Assay.
Ensayo Inmuno–Enzimatico.
Existen dos tipos:
Detección de antígenos.
Detección de anticuerpos.
ELISA

24. Histología

25. Antibiograma y MICs

26. Antibiograma y MICs
20 µL de Inoculo bacteriano
80 µL de medio cultivo
100 µL de medio de cultivo con
Ab
8 C+164210,50,250,1250,063C- 0,031
X XXXXXXXXX32 X

27. Antibiograma y MICs.
16% 4%
4%
4%
8%
8%
36%
20%
CMI FLU Flavobacterium
psychrophilum
0,031 ppm
0,063 ppm
0,125 ppm
1 ppm
4 ppm
8%
32%
16%
32%
8% 4%
CMI FFC Flavobacterium
psychrophilum
0,125 ppm
0,25 ppm
0,5 ppm
1 ppm
4 ppm
16% 4%
4%
12%
24%
32%
4% 4%
CMI OT Flavobacterium
psychrophilum
0,031 ppm
0,063 ppm
0,25 ppm
0,5 ppm
2 ppm
4 ppm
8%
8%
4%
8%
4%
68%
CMI AO Flavobacterium
psychrophilum
0,063 ppm
0,125 ppm
2 ppm
8 ppm
16 ppm
32 ppm

28. Sistemas minuaturizados Api®.

29. Aglutinación en porta objetos y Dot–Blot.

30. Western–Blot.

31. Secuenciación de genes.

32. Muchas gracias por la atención….