ESTUDIOS UTILIZADOS EN GENÉTICA

1. TÉCNICAS MOLECULARES Y SU APLICACIÓN AL DIAGNÓSTICO DE LAS
ALTERACIONES GÉNICAS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS DE
ANÁLISIS DE PCR Y PCR-RFLP
Universidad Veracruzana
Fac. de Medicina Cd. Mendoza
Experiencia educativa
Genética clínica
Nombre del docente
Dr. Miguel Varela Cardozo
EQUIPO 2
Neda Montserrat Domínguez Reyes
Nayeli Alejandra Córdova López
Nizzaye Vazquéz Santiago
Iván Domínguez Moreno
Misael Castro Gallegos

2. UTILIDAD CLÍNICA DE
LA METODOLOGÍA
CITOGENÉTICA

3. CROMOSOMAS Y BANDAS CROMOSÓMICAS
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL CROMOSOMA METAFÁSICO
Waldeyer: acuña en 1888 el término
CROMOSOMA (cuerpo coloreado).
Heitz: en 1928 nota en núcleo en interfase diferencia
en intensidad de tinción.
Cromatina
Heterocromatina
(más condensada)
Constitutiva: se
encuentra durante
toda la vida de un
organismo
Facultativa: pudo
haber sido
eucromatina de
acuerdo a desarrolloEucromatina
Estado genético
inerte y se replican
en etapas tardías
(fase S del ciclo
celular)
Durante la metafase, el DNA está fuertemente empacado que ocupa una longitud 10
000 veces menor que DNA extendido.
Función: Segregar de manera adecuada el material genético de una célula a otra o a los gametos.

4. Serie ordenada de interacciones del ADN con proteínas histonas y no histonas.
NIVELES DE CONDENSACIÓN DE LA CROMATINA
HASTA CROMOSOMA METAFÁSICO

5. FUNCIONES DEL CROMOSOMA METAFÁSICO
Empacar material genético y mantener su integridad
durante estrés mecánico de división celular
La condensación cromosómica es una fuerza física que
separa las cromátidas hermanas después de la
actividad de topoisomerasa II de desconcatenación
del DNA en fase S.
Permitir una adecuada distribución de
material genético hacia las células hijas.
Proveer un sitio tridimensional de cromatina que
permita a CLIP e INCENP mantener a las cromátidas
hermanas unidas hasta anafase y ensamblaje de
cinetocoro funcional.
Superficie cromosómica sirve como sitio de
reconocimiento para la formación de la envoltura
nuclear en célula hija.
a
b
c
d
e

6. CARACTERÍSTICAS DE LAS PRINCIPALES
BANDAS CROMOSÓMICAS
Bandas Regiones que identifican Contenido de bases, tipo de ADN o ambos
Q Patrón cromomérico básico en positivo.
Eucromatina y heterocromatina.
Rico en AT. DNA no satélite: isocoros L1 y L2.
G Patrón cromomérico básico en positivo.
Eucromatina y heterocromatina.
Rico en AT. DNA no satélite: isocoros L1 y L2.
R Patrón cromomérico básico en negativo.
Eucromatina.
Rico en GC. DNA no satélite: principalmente
isocoros H1 y H2, pobre en isocoro H3. Rico Alu.
T Regiones subteloméricas de todos los
cromosomas.
Eucromatina.
Muy rico en GC. DNA no satélite: isocoros H1 y
principalmente H3. Rico en Alu.
C Centromérica de todos los cromosomas y no
Centromérica de 1, 9, 16 y Y.
Heterocromatina constitutiva.
Rico en AT. DNA satélite α. DNA satélites I, II y III.
NOR Regiones de organizadores nucleolares de los
cromosomas acrocéntricos.
Rico en GC. DNA que codifica RNA ribosomal.

7. BANDAS C
Regiones que no contienen
genes activos y por su
naturaleza inerte actúan con
proteínas diferentes de la
eucromatina y dan mayor
resistencia a la extracción de
DNA que el resto.
BANDAS Q
Revelaron existencia de composición
de bases no homogéneas a lo largo
del cromosoma
BANDAS R
• Obtenidas con
pretatamiento de
calor. GC es mas
resistente a la
desnaturalización por
temperatura.
BANDAS T
• Resisten temperaturas
más altas para su
obtención que las
bandas R, se
encuentran hacia los
telómeros
BANDAS G
Bandas oscuras se
relacionan con
regiones ricas en
adeninas y timinas
15% del genoma
65% de los genes
mapeados
74% de oncogenes
mapeados
Manifestaciones reciprocas del mismo fenómeno
cromosómico.Pueden ser polimórficas, tener deleciones o duplicaciones
sin repercutir en fenotipo del individuo.
Traslocaciones, deleciones en pequeños segmentos
subtelómericos causan daños clínicos graves.

8. CITOGENÉTICA
CLÁSICA

9. UTILIDAD DEL BANDEO
CROMOSÓMICO
• LEJEUNE
Descubrimiento del primer síndrome
cromosómico en 1959. En 1968
disminuye la aparición.
• CASPERSSON
En 1970 confirma síndromes estable-
cidos por otras técnicas de bandeo
mediante la identificación de meca-
nismos de rearreglos cromosómicos.
Se conocen nuevos síndromes
Identificación de la estructura y función del genoma
El descubrimiento de las técnicas de
bandeo cromosómico ha significado un
considerable progreso tanto en
citogenética humana como en
citogenética general dispone una
herramienta de identificación de cada
cromosoma humano.

10. BANDAS Q
• Primera técnica en utilizarse para la diferenciación de cromosomas.
• Mostaza de quinacrina.
• Serie de regiones brillantes y oscuras a lo largo de los cromosomas.
• Región distal Yq, regiones centroméricas de 3 y 4 y satélites y regiones centroméricas de cromosomas
acrocéntricos.
Patrones de tinción
• Regiones cromosómicas ricas en adenina – timina (AT) son fluorescentes y las que son ricas en guanina –
citosina (GC) son opacas.
Mecanismo
• Excelente en la investigación de polimorfismos cromosómicos en regiones ricas en heterocromatina .
• Identificacion del origen parental de cromosomas acrocéntricos.
• Identificacion especifica de Y, pruebas de paternidad y trastornos de origen parental (trisomía de
cromosomas acrocéntricos: cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22).
Aplicaciones

11. 1. Introducir las laminillas en un vaso de Koplin que contenga
una solución de mostaza de quinacrina al 0.5% en agua
destilada, durante 20 min a TA. La solución se debe mantener
en refrigeración y protegida de la luz, se puede reutilizar
durante seis meses.
2. Enjuagar en agua destilada agitando
durante 5 min a TA, dejar secar protegida de
la luz, poner sobre la laminilla 100 μL de
solución amortiguadora de Sörensen,
observar bajo objetivo de inmersión y con la
ayuda de la fluorescencia con filtro verde
FITC. Capturar las imágenes y guardarse en la
memoria de la computadora, ya que la
fluorescencia es muy corta y no permite que
se analicen las metafases directamente.
TÉCNICA DE LABORATORIO

12. BANDEO G
• Bandas claras y oscuras a lo largo, numero de
bandas depende de grado de desespiralización
Patrón de
bandeo
• Tinción con Giemsa con pretratamiento
controlado con tripsina (GTG) o con calor (GHG)
que degrada las proteínas hitonas (octámero y
H1) y rearregla la cromatina produciendo bandas
claras y oscuras. A las oscuras se las llama G+.
Mecanismo
• Corroborar alteraciones cromosómicas previstas
por el cuadro clínico.
• Identificar cromosomas o regiones
cromosómicas implicadas en rearreglos
evidentes con tinción homogénea para dar un
asesoramiento genético adecuado.
• Detectar aberacciones estructurales.
• Hacer correlación cariotipo fenotipo y delinear
nuevos síndromes cromosómicos.
• Localizacion y mapeo de genes en cormosomas
y bandas especificas.
• Referencia de diferenciación longitudinal de los
cromosomas.
Aplicaciones
Técnica de bandeo más utilizada por ser permanente y puede analizarse con microscopio de luz.

13. BANDAS G CON TRIPSINA
• Observar bajo microscopio utilizando el objetivo seco fuerte para ver calidad de bandeo, si no se observa
bandeo se destiñe la laminilla con alcohol del 70% o solución de Carnoy, dejar secar al aire e intentar desde el
paso 1.
Sumergir las laminillas ya maduradas, en 50 mL de solución de fosfatos (solución amortiguadora de
Sörensen), a la cual se le adiciona 75 a 100 ul de tripsina 1:250 de una concentración 0.01%, la solución
de fosfatos es mantenida a 37 ± 1 °C, en baño María. Mantener la laminilla sin agitación durante 55 a 90
segundos, según la calidad de las metafases y el tiempo de maduración de la laminilla.
Sumergir la laminilla en un Koplin que contiene 50 mL de solución isotónica de
cloruro de sodio 0.9%, a TA durante 12 segundos.
Pasar a otro Koplin que contiene 50 mL de una solución de colorante de Wrigth al 20% en
solución amortiguadora de Sörensen, durante 6 a 12 segundos, agitando y teniendo cuidado de
quitar en cada ocasión el espejo que del mismo sobre el material a observar; realizar a TA.
Pasar de inmediato a un Koplin con una solución de Giemsa al 8% en solución de
Sörensen durante 2.15 a 3.30 min a TA, quitar el espejo que se forme antes de
sumergir la laminilla.
Lavar durante 1 minuto en agua destilada a TA dejar secar.
1
2
3
4
5

14. BANDEO C• Colorante Giemsa, produce tinción oscura
selectiva sobre heterocromatina constitutiva.
• Bandas se encuentran en regiones
centroméricas, parte distal de los brazos largos
de Y y en la región pericentromérica de los
cromosomas 1, 9 y 16.
Patrón de
bandeo
• Implica tratamiento secuencia de ácido y álcali,
incubación en solución salina, citrato caliente y
tinción Giemsa.
• Retención selectiva de ADNen bandas y
pérdida en el resto del cromosoma.
Mecanismo
• Polimorfismos o heteromorfismos en
bandas C (sirven como marcadores
genéticos poblacionales)
• Pruebas de paternidad y visualización
de roturas cercanas a la región
centromérica o traslocaciones que
implican inactivación por efecto a
posición contigua de esta región.
• Determinar el origen de las trisomías de
cromosomas polimórficos.
Aplicaciones

15. TÉCNICA DE LABORATORIO
Esta técnica es relativamente fácil
se basa en la desnaturalización y
renaturalización del DNA, se
emplea una solución de ácido
clorhídrico y de hidróxido de bario,
seguida de soluciones salinas
citratadas a altas temperaturas, por
último la tinción con Giemsa
Las laminillas pueden madurarse
según la técnica anterior o
utilizarse de inmediato, tener en
cuenta que si son de inmediato el
tiempo de acción de la solución de
ácido clorhídrico es menor.
Teñir con Giemsa al 8% en solución
amortiguadora de Sörensen a TA,
iniciar con 5 min, enjuagar en agua
destilada, observar el contraste de
la tinción en el objetivo de seco
fuerte y si es necesario aumentar el
tiempo de tinción en otra laminilla.

16. BANDAS NOR• Las regiones cromosómicas que forman y mantienen el nucléolo en núcleos en interfase se
llaman organizadores nucleolares (NOR) y consisten en cientos de copias de rADN
• Se localizan en tallos de constricciones
secundarias de los cromosomas acrocéntricos
humanos. Hay 10 regiones NOR (seis en
cromosomas D y cuatro en cromosomas g)
aunque no siempre se ven las 10. ya que varía
en personas y células. (5 a 10).
Patrón de
bandeo
• Desaparecen en pretratamiento con enzimas
en proteínas, la plata se deposita
específicamente en las proteínas.
Mecanismo
• Determinación de puntos de rotura en
rearreglos que implican cromosomas
acrocéntricos (marcaje de pequeños
cromosomas)
• Estudio de la actividad de los genes
ribosomales en condiciones normales y
en presencia de mutágenos, así como
en diferentes tipos y estadios de
diferenciación celulares.
Aplicaciones

17. BANDAS DE ALTA RESOLUCIÓN
• Obtenidas por primera vez en 1976 , con numero aproximado de 2000 bandas.
• Sistema Internacional de Nomenclatura para Citogenética Humana contempla de 400, 550 y 850.
APLICACIONES
No se aplica como método
de rutina, sólo cuando ya se
ha identificado por
citogenética de rutina de un
cromosoma candidato, por
microalteración cromosómica
o puntos exactos de rotura
MECANISMO
Detener las células en profase o
prometafase durante la división
celular, más utilizado bloqueo en
fase S por medio de un exceso de
timidina o por exposición a
metotrexato y una vez obtenido el
bloqueo, este se anula con medio
fresco, se obtienen bandas R y G.Microdeleciones como
retinoblastoma, tumor
de Wilms con aniridia,
síndrome de Di
George o Miller
Diecker.

18. INTERCAMBIO DE CROMÁTIDAS HERMANAS
(ICH)
• Tinción anormal de cromátidas en cromosomas mitóticos con bromodesoxiuridina (BrDU) por dos
ciclos celulares constitutivos y después se somete a fotodegradación. Una se observa clara y la otra
oscura.
Son intercambios simétricos entre dos
segmentos idénticos de las cromátidas
hermanas de un cromosoma posintético
y que no dan lugar a cambios en la
morfología cromosómica.
Cuando el número basal se
rebasa, puede haber inducción
por daño al proceso de
replicación.
En la mayor parte de las
células se encuentra un
número basal de ICH que se
relaciona con el daño al
ADN pues un nucleótido
anormal lo genera.
Síndrome de Bloom ( significativa de ICH espontáneos)
Diagnóstico diferencial de otras entidades cromosómicas
inestables como ataxia, telangiectasia, anemia de Fanconi y
xeroderma pigmentoso (no ICH)
# de ciclos celulares y sensibilidad a mutágenos

19. TÉCNICA DE LABORATORIOSe realizan cultivos de linfocitos de sangre periférica utilizando la técnica de siembra antes descrita, a las 24 h
de cultivo adicionar en condiciones de esterilidad 80 μL de una solución de bromo deoxiuridina (BrdU), al 1%
en agua destilada, dejar en cultivo durante 48 h más a 37 °C, cosechar y gotear.
Lavar en un Koplin con 50 mL de agua destilada, 1 min a TA.
Teñir las laminillas en una solución de Sörensen-Giemsa al 8%, durante 5min a TA.
Lavar las laminillas en un Koplin que contenga 50 mL de agua destilada durante dos minutos con agitación a
TA.
Se exponen las laminillas a la acción de UV en un Koplin que contenga 50 mL de solución amortiguadora de Sörensen, a 37 °C, a una altura
de 20 cm, de donde se encuentre la fuente de luz UV, durante 1 h. Se puede utilizar también la luz solar.
En tres diferentes Koplin que contengan cada uno 50 mL de agua destilada lavar con agitación durante 1
min a TA.
Introducir cuatro laminillas en un vaso de Koplin que contenga 50 mL de una solución de Hoechst 33 258 al
0.005%, durante una hora a TA, protegido de la luz.

20. SITIOS FRÁGILES
Presencia de un sitio no teñido o
rotura en región específica de un
cromosoma; implica ambas
cromátidas.
Se heredan de manera mendeliana
(3%)
Poco usuales: (<1%) mendeliano
codominante
28 sitios poco usuales, casi todos
CGC normal  repeticiones de
2 – 60/anormal >200.
No se expresa proteínas
adecuadamente y hay
metilación de las islas cercanas
a CpG (inestables y susceptibles
a síndrome) y no se expresan
(premutaciones por tripletes
Síndrome de X frágil: retraso
mental, microorquidismo,
perímetro cefálico aumentado,
orejas, frente y mandíbula
prominentes, hiperflexibilidad
y alteraciones cardíacas

21. CITOGENÉTICA
MOLECULAR

22. HIBRIDACIÓN IN SITU CON FLUORESCENCIA
(FISH)
• Se basa en la propiedad de apareamiento de las bases AT y GC de los ácidos nucleicos,
utiliza una secuencia de nucleótidos marcada como molécula reportera (sirve como sonda)
para localizar un ADN complementario blanco, puede darse en cromosomas metafásicos o
células en interfase.
Ventajas
• Mejor velocidad de análisis al microscopio
(a comparación de los isotopos
radiactivos).
• Mayor sensibilidad.
• Seguridad personal
• Menor tiempo de preparación
• Utilización de varios colores
•Síndrome del maullido (cri-du-chat) •Síndrome de Kallman
•Síndrome de Miller-Dieker •Síndrome de Williams
•Síndrome de Smith-Magenis •Síndrome de Wolf-Hirschhorn
•Deficiencia de esteroide-sulfatasa •Síndrome de Prader-Willi/Angelman
•Síndrome de DiGeorge, velocardiofacial (VCFS), CATCH 22 o de Shprintze
DETECTA

23. SONDAS
• Se incorpora dUTP marcado con biotina o digoxegenina en vez de timina a un
nucleótido de manera covalente incluyendo la extensión del cebador al azar. Cuando
esta marcada se utiliza una marca fluorescente (fluoresceína, rodamina o rojo Texas).
• Cuando esta marcada como biotina se utiliza avidina – FITC y la señal puede
amplificarse con anticuerpos específicos.,
MARCAJE
INDIRECTO
DE SONDAS
• Se agrega fluorocromo unido covalentemente al ADN (FITC, rodamina y tintes ciano).
• Proporcionan alta resolución e intensidad en la señal.
• Diversos colores.
MARCAJE
DIRECTO DE
SONDAS
Son segmentos de ADN modificadas químicamente para servir como moléculas reporteras

24. FISH EN CÉLULAS EN INTERFASE
FISH EN CÉLULAS EN METAFASE
• Permite el análisis de células antes innacesibles a la citogenética e incrementa el número de células
analizadas hasta miles.
• Detección de trisomía 21 en células de la mucosa bucal.
• En espermatozoides se han identificado compuestos (in vitro, in vivo) inducen alteraciones
cromosómicas numéricas y estructurales o bien determinar la composición cromosómica de la
población espermática que produce un portador de traslocación balanceada.
• Con sondas especificas para cromosoma completo o para centrómeros específicos permitiendo un análisis con rapidez.
• Permite la caracterización de aberraciones cromosómicas, que facilita la interpretación de uno o más cromosomas implicados en el
rearreglo.
• Precisa diagnóstico citogenético
• En traslocaciones, deleciones o duplicaciones muy pequeñas, confirma o descarta el descarta el diagnostico o sospecha clínica
• Herramienta importante en el mapeo de genes (ha contribuido al avance en el proyecto del genoma humano).
DESVENTAJA: LA CÉLULA NO SIEMPRE SE ENCUENTRA EN DIVISIÓN.

25. TÉCNICA DE LABORATORIO
• Se realiza en células de las que pueden
obtenerse mitosis (linfocitos, fibroblastos,
amniocitos, vellosidades coriónicas, células
de aspirado de médula ósea o tumores
sólidos).
• Se considera el “estándar de oro” debido a
que las señales se observan de manera
directa en el cromosoma y en la posición
exacta; al menos deben ser analizadas 10
células para proporcionar el diagnóstico
citogenético y si es posible, documentar
una imagen. De acuerdo a la alteración
observada en el cariotipo o sugerida por la
clínica, se emplea la sonda específica para
el FISH.

26. REACCIÓN EN CADENA DE POLIMERASA IN SITU
FLUORESCENTE (PRINS)
• Técnica empleada como como complemento ya que se considera de metodología
rápida para la detección de diferentes regiones cromosómicas.
Hibridación in situ
Se escoge una secuencia
nucleótida especifica (24
– 60 nucleótidos) que no
esta marcada y al
hibridar con su secuencia
blanco complementaria a
la cromatina (sirve como
iniciador de
polimerización in situ
catalizada por
polimerasa
termoestable).
DNA cromosómico es
molde para la
elongación y se
emplea trifosfato de
como sustrato y un
competidor (hapteno
o fluorocromo).
Se ve
inmunofluorescencia
CULTIVOS DE
Linfocitos
Amniocitos
Núcleos de esperma
Células transformadas

27. ASESORAMIENTO GENÉTICO;
DIAGNOSTICO PRENATAL

28. A tres décadas de su aparición, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una de las
herramientas tecnológicas más innovadoras para el estudio de los ácidos nucleicos. Se
caracteriza por ser una técnica de alta sensibilidad, reproducibilidad y eficiencia, que genera
resultados confiables en poco tiempo y fáciles de analizar.

29. Hoy en día, la PCR se aplica en
diferentes áreas de las ciencias
biológicas y de la salud, formando
parte del que hacer científico de
muchos laboratorios de investigación
que la utilizan principalmente para
expresión génica, genotificación,
detección de patógenos y análisis de
mutaciones.

30. PCR
Debemos
realizar in
vitro lo que
hacen las
células in vivo.
Se trata de
replicar una y
otra vez un
mismo
fragmento de
ADN y,
La técnica de
amplificación in
vitro de un
fragmento de
ADN
específico.

31. • PCR
Identifica en menos de 24
h las anomalías
Utilizan varios marcadores
polimórficos por
cromosoma
Alta fiabilidad, rapidez,
bajo costo y
automatización
No detecta anomalías
estructurales,
mosaicismos de bajo nivel

32. COMPONENTES PARA UNA PCR

33. CICLOS DE LA PCR
La PCR se realiza en ciclos y cada uno comprende 3 pasos.

34. DESNATURALIZACIÓN
Se eleva la temperatura del ADN hasta los 95° este se calienta
hasta que se separa las cadenas simples de ADN.
Se rompen los puentes de
hidrogeno

35. Las cadenas se aparean con un par de oligonucleotidos sinteticos
especificos, de los cuales uno es complementario al extremo 5’ del gen
fragmentado o del ADN que se desea amplificar y el otro extremo se aparea
con el 3’ del mismo pero en la cadena opuesta.
APAREAMIENTO

36. EXTENSIÓN
Los oligonucleotidos actuan como iniciadores para que la AND polimerasa termoestable
sintetice a partir de los cuatro desoxirribonucleotidos (dNTP) que usa como sustrato, las dos
nuevas cadenas de AND complementarias a las cadenas originales.
Este ciclo se repite de 20 a 30 veces lográndose en cada ciclo doblar la cantidad de ADN
blanco.

38. ¿CUÁNDO HACER UNA PCR?
 Diagnóstico microbiológico: En esos casos la PCR puede detectar material
genético del microorganismo que sea necesario detectar.
 Detección de mutaciones genéticas: las enfermedades genéticas están
causadas por una mutación focal en una región del ADN concreta, por eso se
opta por multiplicar primero todo el ADN de la muestra y hacer estudios con
base más amplia.
 Estudios de medicina legal: Se usa en la identificación de cadáveres, el
estudio de pruebas de escenas del crimen, investigación de casos de abuso
sexual, estudios de paternidad. Todas ellas se basan en la amplificación del
ADN para estudiar su secuencia con facilidad.
 Revisiones de VIH o hepatitis víricas: Se deben estudiar sus niveles
periódicamente para conocer la gravedad de la enfermedad y para ello se
utiliza la detección de ADN con PCR.

39. PCR EN EL DIAGNOSTICO
PRENATAL
El procedimiento
para extraer la
muestra fetal para
estudio
Tipo de técnica
utilizada para
analizar las
muestras obtenidas
En el diagnóstico
prenatal de
cromosomopatías
hay dos aspectos
importantes

40. PCR EN DIAGNOSTICO PRENATAL
QF-PCR es una técnica utilizada en el
diagnóstico prenatal rápido de algunas
anomalías cromosómicas numéricas o
aneuploidías.
Fue desarrollada a principios de los años
90 (Mansfield, 1993) y actualmente se
ofrece de forma rutinaria en función del
riesgo fetal de anomalías cromosómicas
en muchos centros de Europa, Asia y
América.
QF-PCR es una técnica basada en una
reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) que consiste en la amplificación de
secuencias genómicas repetitivas
localizadas en los cromosomas de
interés.
Se analizan el número de alelos por
cromosoma y la intensidad relativa
fluorescente, permitiéndonos conocer el
número de cromosomas presentes en las
células fetales.
La QF-PCR permite el diagnóstico
prenatal de aneuploidías relacionadas
con el cromosoma 13, 18, 21, X e Y en
24-48 horas, con una exactitud cercana al
100 %.

41. PCR-RFLP

42. POLIMORFISMO DE LONGITUD DE
FRAGMENTOS DE RESTRICCIÓN
• Secuencias especificas de nucleótidos en el ADN que son reconocidas y cortadas por
enzimas de restricción (endonucleasas de restricción).
• Las enzimas de restricción siempre cortan en la misma secuencia de bases
nitrogenadas debido a que no hay dos ser humanos con la misma secuencia de ADN.
• Mediante electroforesis se separan aíslan las secciones de ADN recortadas para su
examinación.

43. CASOS
CLÍNICOS

44. • ¿Es una técnica que consiste en la amplificación in vitro de un fragmento de ADN
específico que replica una y otra ves el fragmento de ADN?
Respuesta: Reacción de Cadena de Polimerasa
La PCR se lleva acabo en 3 etapas ¿En que consiste la etapa conocida
como desnaturalización ?
Respuesta: Consiste en la separación de las cadenas simples de ADN por
medio de la ruptura de puentes de hidrogeno elevando la temperatura a 95°
¿En que casos podemos utilizar la PCR para diagnostico?
Respuesta: Diagnostico microbiológico, detección de mutaciones genética, medicina legal.

45. CASO CLÍNICO NO. 01:
• Nelia Hurtado de 36 años, se encontró una pequeña masa
irregular después de su palpación mamaria rutinaria ya que su
madre había sufrido una mastectomía. El diagnóstico fue cáncer
de mama.
• El oncólogo consiste en preguntar sobre el cáncer en la historia
familiar.
• Después de consultar con su madre, observamos que la familia
paterna está libre de cáncer mientras que en la familia materna
se observa que ha habido varios casos de cáncer.
• Nelia proporciona una muestra de sangre y biopsia del tumor
para realizar un análisis del ADN.

46. 1.¿Cual es el síndrome del que se puede sospechar?
2.¿Que estudio es el mas adecuado para detectar el gen responsable de este síndrome?
3. ¿Cuál es el gen responsable que se buscara en los estudios para confirmar este
síndrome?
Nelia tiene 3 niños menores de 15
años, si se detecta la presencia del
síndrome de LFO, ¿Será conveniente
hacer un estudio en los hijos para ver
si lo padecen?

47. CASO CLÍNICO NO. 02
• Se presenta el caso de un nacido muerto con deformidades
en miembros inferiores de una gestante de 32 años. Se
realizó estudio y descripción clínica del hábito externo y se
detectaron las anormalidades siguientes: Cráneo: fontanelas
amplias; Cara: ojos con órbitas poco profundas, escleróticas
azules, puente nasal deprimido y deformidades en miembros
inferiores. En el estudio radiográfico se observaron múltiples
fracturas en las costillas (imagen arrosariada) y fémur (imagen
de acordeón).
• El estudio clínico de los padres fue normal. Se planteó el
diagnóstico de una osteogénesis imperfecta tipo II, que
probablemente tenga como causa una mutación fresca en el
material hereditario de uno de los padres.

48. • El diagnóstico prenatal de la OI tipo II es posible por medio de la ecografía a partir de
las 17 semanas, también analizando la síntesis de procolágeno en células del líquido
amniótico y por radiografías.
• Actualmente se reportan en el mundo casos con diagnóstico prenatal de OI tipo II. Su
frecuencia se calcula en aproximadamente 1: 55 000 nacidos vivos. El trastorno es
heterogéneo desde el punto de vista de la patogenia.
• La OI de este tipo es el resultado de mutaciones heterocigóticas en los genes COL 1A1
y COL 1A2 que codifican las cadenas alfa 1 (I) y alfa 2 (I) de la colágena tipo I.
• La historia natural de esta enfermedad es invariablemente fatal en el período neonatal.

49. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Moderno; 2012.
 Guízar Vázquez J. Genética clínica: diagnóstico y manejo de enfermedades hereditarias. 3ª ed. Ciudad
de México: El Manual Moderno; 2001.
 McDonal D, FISH: Fluorescent In Situ Hybridization[sede Web]. Cytogenetics Information Site;
[actualizada en diciembre de 2014; acceso en abril de 2018]. Disponible en:
http://biomodel.uah.es/citogene/dynacare/fishinfo.htm
 Nussbaum L. Robert. Genética en Medicina. 8va ed. California: ELSEVIER; 2016
 Human Reproduction Update, Volume 10, Issue 6, 1 December 2004, Pages 541- 548. Disponible en:
https://doi.org/10.1093/humupd/dmh046.
 McGraw Hill. Animación del proceso de PCR. Disponible en: http://highered.mcgraw-
hill.com/olc/dl/120078/micro15.swf
 Jones K. Smith’s Recognizable Patterns Of Human Malformation W.B. 6th Ed. Philadelphia: Elsevier
Saunders; 2006.
 Sillence DO, Senn A, Canks DM. Clinical heterogeneity in osteogenesis imperfecta. J Med Genet
1979;16:101-16.
 Van Gutetal. Prenatal Medicine. Ed. Taylor y Francis. 2006