Este documento describe una serie de pruebas bioquímicas para caracterizar microorganismos (MO), incluyendo pruebas relacionadas con la respiración celular, fuente de carbono, compuestos nitrogenados, y pruebas IMViC para diferenciar bacterias entéricas. Explica procedimientos como la prueba de la catalasa, agar hierro de Kliger, ureasa, indol, rojo metilo, Voges Proskauer y citrato.

1. Laboratorio 4 Microbiología 2011

2. Caracterización de MO Observación macroscópica Observación microscópica Pruebas Bioquímicas

3. Pruebas Bioquímicas Relacionadas con la respiración celular Relacionadas con la fuente de C Relacionadas con compuestos nitrogenados

4. PB relacionadas con respiracion celular O 2 + e - O 2 - O 2 - + e - + 2H + H 2 O 2 H 2 O 2 + e - + H + H 2 O + OH OH + e - + H + H 2 O Enzimas que protegen a los MO del efecto tóxicos de estos compuestos

5. Prueba de la Catalasa H 2 O 2 + H 2 O 2  catalasa  2H 2 O + O 2 Cultivo de 24-48 h Medio sólido Agregar H 2 O 2 Burbujas (+)

6. Rel. con la fuente de C: Prueba del Agar Hierro Kliger Utilización de glucosa, lactosa, producción de H 2 S y gas. Tiosulfato y sulfato férrico H 2 S MO lactosa+ glucosa glucosa ninguno con o sin liberación de gas aerobio o anaerobio

7. Posibles Resultados

8. PB relacionados con compuestos nitrogenados Prueba de la ureasa: CO(NH 2 ) 2 + H 2 O -> 2 NH 3 + CO 2 Indicador de pH: Rojo fenol Amonio alcaliniza el medio Fucsia

9. Pruebas del IMViC Indol Rojo Metilo Voges Proskauer Citrato Diferenciar bacterias entéricas

10. Prueba del Indol MIO: Motility Indol Ornithine Medio semisólido Motilidad Indol triptófanasa + Reactivo de Kovacs Anillo rosa Ornitina Ornitina decarboxilasa Ornidina decarboxilasa (+) morado (-) amarillo

11. Prueba de Rojo Metilo Producción y mantención de ác. estables de la fermentación ácido mixta de glucosa. Se agrega rojo metilo a cultivo suplementado con glucosa (+) Medio se mantiene ácido (rojo) (-) ácidos formados continuan degradandose hasta CO 2 Alcalinización del Medio (Amarillo)

12. Prueba Voges Proskauer Fermentación butanodiolica de la glucosa Mismo medio que Prueba Rojo Metilo Glucosa Ácido pirúvico Acetoína + α naftol + KOH (+) coloración rojiza 2,3 – butanodiol

13. Prueba Citrato Citrato como única fuente de Carbono Sales de amonio como fuente de Nitrógeno Azul de bromotimol como indicador de pH Sólido o líquido

14. Agar McConkey Sales Biliares: Enterobacterias Cristal Violeta: Gram (-) Indicador de pH Rojo neutro Bacterias fermentadoras de lactosa (+) Violeta

15. Agar Sangre Detectar hemolisis: α, β. α- hemólisis: Incompleta, halo verde alrededor. β- hemólisis: Completa.