Utilizacion de-carbohidratos
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Este documento describe varias rutas metabólicas de carbohidratos en microorganismos y pruebas bioquímicas para identificarlas. Explica procesos como la glucólisis, fermentación y ciclo del ácido cítrico. También detalla pruebas como Durham, Rojo de Metilo, Voges-Proskauer y Kligler para detectar la fermentación de azúcares y producción de ácidos, gas y H2S. Los resultados experimentales muestran los perfiles de fermentación de varias bacterias como E. coli, S.
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- 1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL. ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. UTILIZACIÓN DE CARBOHIDRATOS. MICROBIOLOGÍA GENERAL (LABORATORIO).
- 2. METABOLISMO Es el conjunto de reacciones bioquímicas y procesos fisicoquímicos que ocurren dentro de un individuo. Los cuales permiten las diversas actividades de las células: crecer, reproducirse, mantener sus estructuras y responder a estímulos , etc. El metabolismo se divide en dos procesos conjugados: Catabolismo. Anabolismo.
- 3. RUTAS DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA Fermentación Obtención de ATP por fosforilación a nivel de sustrato. Respiración Obtención de ATP por fosforilación oxidativa. Fotosíntesis Obtención de ATP por fotofosforilación.
- 4. Glicólisis (EMP) Fermentación Ruta de las Pentosas Fosfato Ciclo del ácido Tricarboxílico RUTAS METABÓLICAS DE CARBOHIDRATOS
- 5. FERMENTACIÓN Es un proceso anaeróbico en el cual tanto los donadores como los aceptores de electrones son compuestos orgánicos (carbohidratos, ácidos orgánicos, aminoácidos, etc.).
- 6. GLUCOLISIS Reacción 1 Reacción 2 Reacción 3 Reacción 4
- 7. GLUCOLISIS Reacción 5 Reacción 6 Reacción 7 Reacción 8
- 9. OBJETIVOS Realizar pruebas bioquímicas para poner de manifiesto las actividades metabólicas que llevan a cabo los microorganismos sobre algunos azucare, que son útiles en la identificación.
- 10. PRUEBAS DE FERMENTACIÓN Los carbohidratos son moléculas compuestas fundamentalmente de carbono y agua que poseen enlaces glicosídicos, pueden dividirse en: Monosacáridos Disacáridos Oligosacáridos Polisacáridos LAS PRUEBAS A REALIZAR SON: Durham Rojo de Metilo Voges-Proskauer Kligler
- 11. FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS EN TUBOS DURHAM CALDO BASE ROJO DE FENOL. COMPOSICIÓN CLORURO DE SODIO 5.0 g/L PEPTONA DE CASEÍNA 10.0g/L ROJO DE FENOL 0.018g/L Indicador de pH: Rojo de Fenol pka = 7.8 pH ácido = 6.8 pH alcalino = 8.4
- 12. REACCIONES Rojo de fenol Carbohidrat o + Ácidos orgánicos + Vire de color [ H2 + CO2] Bacteria Glucólisis C12H22O11 H2O C6H12O6+ C6H12O6+
- 13. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS T1: Prueba negativa para producción de ácidos T2: Prueba positiva para producción de ácidos. T3: Prueba positiva para produccion de ácidos y producción de gas.
- 14. Fermentación de la Glucosa Izquierda: Bacillus subtilis Derecha: Shigella flexneri Fermentación de la Sacarosa Izquierda: Shigella flexneri Derecha: Bacillus subtilis Fermentación del Manitol Izquierda: Bacillus subtilis Derecha: Shigella flexneri RESULTADOS EXPERIMENTALES
- 15. RESULTADOS PRUEBA Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Bacillus subtilis Salmonella typhi Glucosa Ac T + P + T + P + T + P + T + P + Gas T + P + T + P + T - P T + P + Sacarosa Ac T + P + T - P - T + P + T - P - Gas T + P + T - P - T - P T - P - Manitol Ac T + P + T + P + T - P - T - P + Gas T + P + T - P - T - P T - P +
- 16. RESULTADOS PRUEBA Shigella flexneri Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Glucosa Ac T + P + T + P T - P T + P + Gas T - P T - P T - P T + P + Sacarosa Ac T + P - T + P T P T - P - Gas T - P T - P T P T + P + Manitol Ac T + P + T + P T P T + P + Gas T - P T P T P T + P +
- 17. FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS EN MEDIO DE KLIGLER Agar en tubo, Kligler Composición: 6.8 8.4
- 18. La lactosa es un disacárido formado por dos unidades de monosacáridos: glucosa y galactosa FUNDAMENTO (fermentación de Glucosa y Lactosa) Si el MO no es capaz de fermentar la lactosa o ninguno de los 2 CH este utilizara las peptonas como fuente de nutrientes.
- 19. FUNDAMENTO (fermentación de Glucosa y Lactosa)
- 20. COMO SE VE (fermentación de Glucosa y Lactosa) Para los fines de identificación es esencial que se interprete la fermentación de los HC, al termino de 18 a 24 h de incubación.
- 21. PRODUCCIÓN DE GAS Los gases producidos como producto terminal del metabolismo de los HC son CO2 y H2. La bacteria que lo produce se denomina aerogénica, lo que se manifiesta por la rotura o desplazamiento del agar. La no producción de gas se denomina anaerogénica
- 22. PRODUCCIÓN DE H2S Otro sistema de diferenciación es la presencia de indicadores de acido sulfhídrico en el medio, una sal, el citrato de férrico de amonio y una sustancia química, el tiosulfato de sodio. El H2S es un gas incoloro; por lo tanto es necesario un segundo indicador para detectar en forma visible su producción.
- 23. La producción de H2S, se manifiesta por la presencia de un precipitado negro (sulfuro ferroso) se manifiesta por Un color negro distribuido por toda la capa profunda y que enmascara la acidez.
- 25. RESULTADOS EXPERIMENTALES PRUEBA Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Bacillus subtilis Salmonella typhi KLIGLER Glucosa + + - + Lactosa - + - + Gas - + - - H2S - - - + PRUEBA Shigella flexneri Staphylococcus Aureus Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris KLIGLER Glucosa + - Lactosa - - Gas - + H2S - +
- 26. FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS. PRUEBA DE ROJO DE METILO Indicador de pH: Rojo de metilo pka = 5.0 pH ácido = 4.4 pH ácido = 6 CALDO GLUCOSADO COMPOSICIÓN POLIPEPTONA 7.0 g/L DEXTROSA 5.0 g/L FOSFATO DE POTASIO 5.0 g/L
- 27. REACCIONES Fermentación ácido mixta: Glucosa + H2O Ácido láctico, acético, fórmico y succínico + CO2 + H2 + Etanol Glucosa + ½ O 2,3-butanediol+ H2O 2CO2+
- 28. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS Prueba RM positiva: el cultivo es lo suficientemente ácido y permite que el reactivo rojo de metilo mantenga un color rojo en la superficie del medio. Prueba RM negativa: color amarillo en todo el tubo, no hay formación de anillo rojo en la superficie
- 29. RESULTADOS EXPERIMENTALES Izquierda: Shigella flexneri Derecha: Bacillus subtilis
- 30. RESULTADOS PRUEBA Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Bacillus subtilis Salmonella typhi Rojo de metilo T - P - T + P + T - P - T P + PRUEBA Shigella flexneri Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Rojo de metilo T + P + T + P T P T - P -
- 31. FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS PRUEBA DE VOGES PROSKAUER. Caldo glucosado Composición: Indicador:
- 33. Enzimas responsables de la oxidación- reducción de la acetoina y el 2,3-butanediol
- 34. CICLO PARA LA DESCOMPOSICIÓN DEL del 2,3-BUTANEDIOL, LA ACETOINA Y EL DIACETILO. Comenzando con 2 mol de 2,3-butanediol, 1mol del mismo es regenerada y se forman 2 molde ácido acético , por lo tanto hay un aumento en la acidez.
- 35. El alfa-naftol se combina con el producto de la reacción del diacetilo y el compuesto de tipo guanidina, arginina, que se encuentra en la peptona. Después de agregar el alfa-naftol y el KOH debe agitarse suavemente.
- 36. COMO SE VE
- 38. RESULTADOS EXPERIMENTALES PRUEBA Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Bacillus subtilis Salmonella typhi Voges Proskauer + - - - PRUEBA Shigella flexneri Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Proteus vulgaris Voges Proskauer - -
- 39. REFERENCIAS https://books.google.com.mx/books?id=FYWSzy7EjR0C&pg=PA41 4&lpg=PA414&dq=ciclo+de+juni+y+heym&source=bl&ots=RNQMU eNdSl&sig=wjWcEIkrfcZKepDuL7qzFiG9nD4&hl=es- 419&sa=X&ved=0ahUKEwi395DKzeXPAhWD2yYKHeN8BrAQ6AE IHTAA#v=onepage&q=ciclo%20de%20juni%20y%20heym&f=false http://es.slideshare.net/SusanaGG/pruebas-bioqumicas http://es.slideshare.net/mmmmmruiz/atlas-medis-de-cultivos- microbiologia1 http://wiki.ubc.ca/Course:PATH417:2015W1/Case_3/Final4 http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedra Micro/proskauer.pdf