1) El documento describe varias pruebas bioquímicas utilizadas para identificar bacterias, incluyendo la hidrólisis de gelatina, almidón, fosfolípidos y la fermentación de carbohidratos. 2) Cada prueba mide una capacidad metabólica diferente como la producción de enzimas o el metabolismo de sustratos específicos. 3) Los resultados de múltiples pruebas bioquímicas pueden utilizarse en conjunto para determinar la identidad de un microorganismo.

1. Prueba
bioquímica
Medio de
cultivo
Fundamento Reacción Lectura Imagen
HIDRÓLISIS
DE
GELATINA
(licuefacción
de
gelatina/Dig
estión de
gelatina y
caseína en
caja)
Medio sólido
en tubo
*picadura
con asa
recta
*4°C o baño
de Hielo
Las proteínas que se producen naturalmente son moléculas demasiado grandes, para que la
bacteria las utilice , primero deben ser catabolizadas , para que esto se lleve a cabo . ciertas
bacterias segregan gelatinasas exocelulares para degradar las proteínas y esta capacidad ayuda a
la identificación de la bacteria. el catabolismo de las proteínas por parte de las gelatinasas es un
proceso de dos pasos, el resultado final es una mezcla de aminoácidos aislados.
Las enzimas capaces de producir gelatinolisis se denominan gelatinasas, estas enzimas
proteolíticas (Proteínasas) son importantes factores de virulencia de algunos microorganismos.
capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo
proteolítico (gelatinasas) que licuan/hidrolizan la gelatina o muestran cambios característicos
debido a la degradación de productos.
Licuefacción de Gelatina:
Después de enfriamiento:
Positivo(+):
Contenido del tubo es líquido
Negativo (-):
Contenido del tubo sólido
Digestión de gelatina y
caseína en caja: (+HgCl2)
positivo (+): halo transparente
Negativo (-): Sin halo
Agar
gelatina y
agar leche
descremada
en caja
+ HgCl2
HIDRÓLISIS
DE
ALMIDÓN
Gelosa
almidón
+
Lugol (yodo)
El almidón es un homopolisacárido, un producto de condensación de muchos monómeros, de un
solo tipo de monosacárido,α-D-glucosa, que forma un polímero unido por puentes
α-glucosídicos. Almidón = amilosa lineal + amilopectina ramificada
Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una hidrólisis
extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias
elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio.
El almidón es un carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que contienen
amilasas.
Las moléculas de yodo están atrapadas dentro de la hélice no ramificada de unidades de glucosa
de la cadena de amilosa para formar un compuesto de inclusión azul. Si la red se desintegra como
ocurre durante la hidrólisis del almidón y las dextrinas por definición se produce una mezcla de
dos moléculas de polisacáridos poliglucosa: amilosa lineal que solo da glucosa con la hidrólisis se
denomina glucosán.
Añadir lugol:
Positiva: (+) halos
transparentes que rodean a
las bacterias. Sobre un fondo
azul
Negativa (-) :
sin halo (No hidroliza
almidón)
Hidrolisis de
fosfolipidos
Agar gelosa
sangre
Ruptura de la membrana de las células rojas de la sangre por una proteína bacteriana conocida
como hemolisina, que provoca la liberación de la hemoglobina de los glóbulos rojos (hemolisis)
La hidrolisis de fosfolipidos de la membrana celular de los eritrocitos
α-hemólisis
Las colonias están rodeadas de una zona difusa en la cual los eritrocitos
están parcialmente lisados; hidrolisis de enlaces éster fosfato con la acumulación extracelular de
digliceridos insolubles que se agrupan formando un capa opalescente.
ß-hemólisis
Las colonias del microorganismo están rodeadas de una zona clara, en la
cual todos los eritrocitos están lisados. Hidrólisis de enlaces éster y utilización de productos de
loa ácidos grasos, ´por los microorganismos.
γ- hemolisis ausencia de halo, no utiliza fosfolípidos membrana les de los eritrocitos.
Hemolisis α:
halo opaco o verdoso al
rededor de la colonia
Hemolisis β: halo
transparente al redor de la
colonia
Hemolisis γ: sin halo
alrededor de la colonia.
Agar yema
de Huevo
BD Baird-Parker Agar contiene las fuentes de carbono y nitrógeno necesarias para el
crecimiento. La glicina, el cloruro de litio y el telurito potásico actúan como agentes selectivos.
La yema de huevo constituye el sustrato que contiene fosfolípidos polares hidrosolubles que al ser
d e g r a d a d o s p o r f o s f o l i p a s a s e l i m i n a n e l f o s f a t o q u e e s e l g r u p o p o l a r
produciendo diglidéridos insolubles, estos se agrupan por efecto hidrófobo conformando una delgada
película opalescente, para determinar la producción de lecitinasa y, además,
la actividad de lipasa. Los estafilococos producen colonias de color de gris oscuro a negro
debido a la reducción del telurito; los estafilococos que producen lecitinasa descomponen la
yema de huevo y crean zonas transparentes alrededor de las colonias correspondientes. Es
posible que se forme una zona de precipitación debido a la actividad de lipasa.
El medio no debe utilizarse para el aislamiento de estafilococos diferentes de S. aureus.
Positiva (+):
Halo opaco opalescente
alrededor de la bacteria
Negativa (-) :
sin halo alrededor de la bacteria
Digestión de
proteínas y
fermentació
n de leche
tornasolada
Tubos con
leche
tornasolada
La leche tornasolada es un medio diferencial utilizado para diversas funciones metabólicas de un
microorganismo:
a) Fermentación de Lactosa
B)Caseolísis
E) Reducción del tornasol
F)Peptonizacion
G)Formacion de gas
El tornasol incorporado en la leche indica pH, por eso el medio puede denotar distintas funciones
metabólicas ,cada una especifica para una especie particular
La leche contiene Hidrato de carbono lactosa, y Tres proteínas, Caseína, lactoalbúmina, y
lactoglobulina
Fermentación de la lactosa
(acidificación)
Positivo: (+)Tornasol rojo = acido
Reducción:
Negativo(-): Tornasol azul= Básico
Coagulación:
aparición de un coagulo
semisólido que ocupa todo el
tubo
Peptonización:
Fragmentación del coagulo
Licuefaccion del coagulo:
el medio se licua totalmente,
(agua con arena)
Alcalinización:
Medio vira a color violeta
Fermentació
n de
carbohidrato
s en tubos
de
Durham
Glucosa/
Dextrosa
Sacarosa
Manitol +
Rojo de
fenol
Determinar la capacidad de un organismo para degradar los carbohidratos, para utilizarlos
como fuente de carbono
El acido piruvico es el intermediario principal, en la degradación de la glucosa o al ciclo de
Krebs
Producción de ácido:
positiva (+)
Vire a amarillo
Producción de Gas
Positiva(+):
formación de burbuja que
desplaza al liquido en la campana
de Durham
KLIGLER
Fermentación
de
carbohiodratos
MEDIO
KLIGER
Kligler Hierro Agar Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos
para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y
a la producción de ácido sulfhídrico.
•En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados
para el desarrollo bacteriano. •La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. •El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido
sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan
con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. •El rojo de fenol es el
indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente
solidificante. • Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por
medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. •El tiosulfato
de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
Pico alcalino/fondo ácido (pico
rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente
fermenta la glucosa. 2-Pico
ácido/fondo ácido (pico
amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta
glucosa, y lactosa. 3-Pico
alcalino/fondo alcalino (pico
rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no
fermentador de azúcares. 4-La
presencia de burbujas, o ruptura
del medio de cultivo, indica que
el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio
indica que el microorganismo
produce ácido sulfhídrico
Fermentación
de
Carbohidratos
de Rojo de
Metilo Y Voges
Proskauer
Caldo
Glucosado
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías
metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico,
ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un
indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la
adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos
finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar
hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta
coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la
peptona del medio para dar un color rojo.
a-Prueba del rojo de metilo:
de rojo de metilo
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.
b-Prueba del Voges Proskauer:
Prueba de Voges Proskauer
La aparición de un color
rosjoconstituye una reacción
positiva indicadora
de la presencia de acetoína,
producto de la fermentación de la
glucosa.
Añadir 6 gotas de α-naftol+ 2
gotas de KOH-creatina, agitar
suavemente, dejarlo de 20 a 30
min,
Resultados
1-Prueba del rojo de metilo:
2-Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo de un color
rojo en pocos minutos después de
una completa agitación del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo
Utilización de
ácidos
orgánicos
Tubo con
agar-citrato
de Simmons
por estria
abierta
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la
única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las sales de
fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino.
El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como
única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente
producción de alcalinidad
El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de
un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen
carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción
Positivo: crecimiento y color azul
en el pico, alcalinidad. -Negativo:
el medio permanece de color
verde debido a que no hay
desarrollo bacteriano y no hay
cambio de color.