Este documento describe la práctica de farmacocinética clínica para determinar concentraciones plasmáticas de fármacos. Explica que la farmacocinética clínica busca optimizar el tratamiento farmacológico mediante la monitorización de concentraciones plasmáticas. También describe la metodología de inmunoensayo competitivo usada por el sistema TDx y los pasos para determinar la concentración plasmática de fenitoína. Además, resume la farmacocinética de la fenitoína y cómo las aplic

1. PRÁCTICA:
FARMACOCINÉTICA CLÍNICA (TDx)
Objetivos:
1. Comprender cual es el objetivo de la monitorización plasmática de
fármacos dentro de la farmacocinética clínica
2. Entender los fundamentos analíticos de la inmunopolarización de
fluorescencia indirecta para la determinación plasmática de fármacos en
sangre
3. Realizar sobre un autoanalizador TDx la determinación plasmática de
fenitoína sódica
4. Valorar la importancia que las aplicaciones informáticas pueden aportar
en la dosificación individualizada de la posología medicamentosa

2. CONCEPTO DE FARMACOCINÉTICA CLÍNICA
La farmacocinética estudia la absorción, distribución, metabolismo y
excreción de los medicamentos por el organismo, a través del estudio de la
evolución temporal de las concentraciones de fármaco y metabolitos en los
diferentes fluidos y tejidos, así como las relaciones matemáticas entre el régimen
de dosificación y las concentraciones plasmáticas resultantes.
La optimización de la terapia farmacológica mediante la determinación de
las concentraciones plasmáticas y a través del conocimiento de los principios
farmacocinéticos y farmacodinámicos es el objetivo de la farmacocinética clínica.
Esto permite individualizar la posología en cada paciente, limitando la probabilidad
de toxicidad e incrementando la probabilidad de conseguir los efectos
terapéuticos deseados.
La respuesta clínica al tratamiento farmacológico no siempre es fácil de
valorar y cuantificar, especialmente con algunos fármacos (como por ejemplo los
anticonvulsivantes o los inmunosupresores). Cuando no se puede medir la respuesta
farmacológica con parámetros simples y seguros, la determinación de la
concentración del fármaco en sangre es el método más útil para establecer la dosis
óptima para conseguir la mayor efectividad y seguridad del tratamiento
farmacológico.
La premisa más importante para la monitorización de fármacos es que la
intensidad del efecto farmacológico se correlaciona más estrechamente con su
concentración plasmática que con su dosis.
Los fármacos que habitualmente se monitorizan representan una minoría
frente a los existentes. Se monitorizan aquellos fármacos que presentan un
estrecho intervalo terapéutico, los que tienen una excelente correlación entre
concentraciones plasmáticas y respuesta cinética-dinámica, los que poseen una
cinética no lineal y los que tienen una amplia variabilidad interindividual. Se
excluyen aquellos fármacos cuya eficacia terapéutica puede medirse por otros
métodos clínicos más sencillos y baratos.
Entre los fármacos mayoritariamente monitorizados se encuentra
antibióticos como amikacina, gentamicina, tobramicina y vancomicina,
anticonvulsivantes como carbamazepina, fenitoína, fenobarbital y ácido valproico,
inmunosupresores como la ciclosporina y el tacrólimus, y otros fármacos como la
digoxina, la teofilina, y el metotrexato.

3. TÉCNICAS ANALÍTICAS
INMUNOPOLARIZACIÓN DE FLUORESCENCIA INDIRECTA. El sistema
TDx (Abbott USA) emplea una metodología de inmunoensayo competitivo, basado
en la competencia entre el antígeno marcado con fluoresceína (fármaco trazador) y
el antígeno del paciente (fármaco a determinar), para ocupar los sitios de unión de
las moléculas del anticuerpo. Es decir, los participantes en esta reacción de enlace
competitivo son el anticuerpo, el antígeno del paciente y el antígeno marcado con
fluoresceína (trazador). Al producirse el enlace competitivo, la proporción antígeno
del paciente/trazador condiciona la cantidad de complejo anticuerpo-trazador que
se forma y que es el responsable de la polarización resultante.
A medida que la muestra del paciente contenga mayor cantidad de antígeno
(fármaco), éste desplazará al trazador de su unión con el anticuerpo y conducirá a
una menor concentración del complejo anticuerpo-trazador, lo que hará que la
polarización resultante sea cada vez más baja. Si por el contrario, existe una baja
concentración del antígeno en la muestra, habrá una elevada concentración del
complejo anticuerpo-trazador y la polarización será alta. Partiendo de los valores
de polarización final, es posible calcular la concentración del fármaco con ayuda de
la curva de calibración almacenada en la memoria.
Esta técnica se caracteriza por la rapidez y sencillez en su manejo y por no
requerir tratamiento previo de la muestra biológica o ser éste muy sencillo (como
en el caso de la digoxina o ciclosporina). Como inconveniente, existe una limitada
disponibilidad de reactivos específicos para fármacos (menos de 30), no determina
metabolitos y su coste es elevado.
HPLC. La cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) es una técnica
altamente sensible, es posible determinar metabolitos y puede resultar a la larga
económica. Pero su utilidad es limitada en el caso de determinaciones urgentes,
requiere tratamiento previo de la muestra biológica y personal cualificado.

4. METODOLOGÍA
Los reactivos y los controles se mantienen en el frigorífico hasta el
momento de su utilización. Una vez extraídos se dejan a temperatura ambiente 10-
15 min. Antes de utilizarlos es conveniente agitarlos, volteando los recipientes una
5 veces, para homogeneizar la solución.
Descripción de la metodología:
1. Extraer de las muestras de plasma un volumen equivalente a 200 μL y
depositarlo sobre un tubo Ependorf.
2. Identificar la muestra y proceder a su centrifugado durante 5 minutos.
3. Seleccionar un carrusel de ensayo numerado.
4. Cargar en el carrusel un cartucho y una cubeta por cada muestra que vaya a
ser analizada. Comenzar con la posición 1 y seguir secuencialmente, sin
saltarse ninguna posición. Cerciorarse de que todas las cubetas quedan
colocadas boca arriba.
5. Fijar las cubetas en el carrusel girando el mecanismo de cierre en el sentido
de las agujas del reloj hasta que encaje con un “clic”.
6. Pipetear un volumen apropiado de las muestras de los pacientes y de los
controles (100 μL).
7. Si se han formado burbujas en los cartuchos de muestra deben retirarse
con una punta de pipeta; si hay más de una, utilizar una diferente para cada
cartucho de muestra.
8. Del envase de reactivos seleccionado se retiran los tapones de los frascos y
se colocan boca arriba en los lugares previstos en la cara interior de la tapa
del envase de reactivos.
9. Si se han formado burbujas en la superficie de los frascos deben retirarse
con una punta de pipeta; seguir la recomendación del punto número 5
(utilizar una diferente para cada cartucho de muestra).
10. Colocar el envase de reactivos en la posición correcta y el carrusel cargado
dentro del analizador TDx.
11. Cerrar la puerta de acceso.
12. Pulsar RUN.
13. El ensayo termina cuando en la pantalla (“display”) del aparato se visualiza
(”DONE-REMOVE RPAK”).
14. Los controles de fenitoína deben estar dentro del rango siguiente:
• L: 7,5 μg/mL (6.8-8.3)
• M: 15 μg/mL (13.9-16.6)
• H: 30 μg/mL (26.8-33.12)

5. FARMACOCINÉTICA DE LA FENITOÍNA
La fenitoína o difenilhidantoína es un antiepiléptico que deprime las áreas
motoras de la corteza cerebral
La Fenitoina, por su elevada variabilidad en la velocidad de absorción oral, la
elevada fracción de unión a la albúmina (90%), su posible saturación de
metabolización a concentraciones superiores a 10 mg/L que da lugar a una cinética
dosis-dependiente tipo Michaelis-Menten (por lo que a dosis altas se alcanzan
concentraciones mayores de las esperadas, aumentando ostensiblemente la
semivida de eliminación) y que concentraciones plasmáticas por encima de 20
μg/mL suelen desencadenar efectos adversos frecuentes y a veces graves,
aconsejan la monitorización de la concentración plasmática.
APLICACIÓN INFORMÁTICA A LA FARMACOCINÉTICA CLÍNICA
(PKS de Abbott)
Existen aplicaciones informáticas que nos ofrecen una valiosa ayuda para
establecer los regímenes posológicos teóricos y realizar simulaciones de evolución
de las curvas plasmáticas de concentraciones de fármacos.