Este documento describe los diferentes tipos y usos de tinción para células y tejidos biológicos. Explica que las tinciones se utilizan para mejorar el contraste y resaltar estructuras celulares al microscopio. Luego detalla los pasos de preparación como fijación, permeabilización y montaje de muestras, así como los diferentes tipos de colorantes y sus usos. Finalmente, se enfoca en describir la tinción de Gram, cómo funciona y cómo clasifica a las bacterias.

1. CARACTERÍSTICAS
TINTORIALES DE LAS
CÉLULAS
EQUIPO 2

2. Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada
en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al
microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que
usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la
ayuda de diferentes tipos de microscopios.

3. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar
la definición y examinar grandes cortes de tejido (resaltando
por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo),
poblaciones celulares (por ejemplo clasificando
diferentes células sanguíneas) o incluso para
resaltar orgánulos dentro de células individuales.

4. Tinción in vivo
Es el proceso de teñir tejidos vivos. Al
provocar que determinadas células o
estructuras adquieran los colores de
contraste, se puede estudiar su
ubicación y morfología mientras están
desempeñando su función.

5. Tinción in vitro
La Tinción in vitro involucra el coloreo de células
o estructuras que han sido removidas de su
contexto biológico. Se utiliza a menudo una
combinación de varios colorantes para revelar
más detalles y características de las que se
obtendrían con la utilización de uno solo.

6. PREPARACIÓN
Las etapas preparatorias involucradas en una
tinción van a depender del tipo de análisis
planeado; bajo estas premisas se puede
considerar que algunos o todos de los
siguientes pasos podrían requerirse.

7. PREPARACIÓN
1
FIJACIÓN
2
PERMEABILIZA
CIÓN
3
MONTAJE

8. La fijación es una modificación
de las propiedades
fisicoquímicas de las proteínas
que forman una célula o tejido
y que tiene por finalidad
preservar las formas de las
células o tejidos tanto como
sea posible. A veces se puede
utilizar una fijación por calor
para matar, adherir y alterar un
espécimen de modo que
acepte la tinción.
1 FIJACIÓN
La mayor parte de las veces
se utiliza un fijador químico.
Los fijadores químicos en
general causan la formación
de enlaces cruzados entre
proteínas, o entre proteínas y
otras sustancias presentes en
la muestra, incrementando su
resistencia mecánica.

9. Entre los fijadores químicos más comunes se
encuentran el formaldehído, etanol
y/o metanol. Pequeños bloques de tejido
pueden ser embebidos en parafina o algún
polímero, proceso conocido como inclusión,
para incrementar su resistencia y estabilidad,
y para hacer más fácil cortarlos en rodajas
extremadamente delgadas, ya que cuanto
más delgado es un corte histológico, más
definición se obtiene en las imágenes
microscópicas.

10. Este paso implica el tratamiento de las células con
un surfactante suave. Este tipo de tratamiento tiene
como finalidad disolver la membrana celular para
permitir que las grandes moléculas de colorante puedan
acceder a las estructuras del interior de las células.
2 PERMEABILIZACIÓN

11. Frecuentemente implica adherir
los cortes histológicos a
un portaobjetos de vidrio para su
observación al microscopio o
análisis. En algunos casos, se
puede cultivar a las células
directamente sobre le
portaobjetos. En muestras de
células sueltas, como las que se
presentan en un extendido de
sangre o de fluidos biológicos, la
muestra puede ser aplicada
directamente sobre el
portaobjetos.
3 MONTAJE

12. Para piezas de tejido de mayor tamaño, se utiliza
un micrótomo que corta la muestra en rodajas
sumamente delgadas. Estas rodajas son luego adheridas
al portaobjetos por medio de una substancia que
funciona como pegamento, ya sea una resina
transparente, gelatina o clara de huevo. El montaje tiene
por finalidad aumentar la resistencia mecánica de una
muestra que de otra manera sería extremadamente
frágil, para que soporte el proceso de teñido
conservando lo más posible su estructura original.

13. COLORANTES
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos
que tienen alguna afinidad específica por los materiales
celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan
con intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los
polisacáridos ácidos.

14. Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente
(aniones) y se combinan con los constituyentes celulares
cargados positivamente, tales como muchas proteínas.
Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles;
los colorantes de este grupo se combinan con los
materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo
para revelar la localización de las gotículas o depósitos
de grasa.

15. Colorantes con
moléculas cargadas
positivamente
(cationes)
 azul de metileno
 cristal violeta
 safranina.
Colorantes con moléculas
cargadas negativamente
(aniones)
 eosina
 fucsina ácida
 rojo Congo
Colorante liposoluble
 negro Sudán.

16. Colorantes histológicos más
comunes.
 Cristal violeta
El cristal violeta, al ser combinado con un mordiente
adecuado, tiñe las paredes celulares de color púrpura. El
cristal violeta es un componente importante en
la coloración de Gram.
 Azul de metileno
El azul de metileno se utiliza para teñir células animales,
para hacer más visibles sus núcleos. Es también utilizado
para teñir los extendidos de sangre para ser utilizados en
citología y como colorante vital en el recuento
de reticulocitos.

17.  Eosina
Imparte un color que va del rosado al rojo al material
citoplasmático, membrana celular, y algunas estructuras
extracelulares. Además imparte un fuerte color rojo a
los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada también en
algunas variantes de la coloración de Gram, y en
muchos otros protocolos de tinción. De hecho existen
dos compuestos muy estrechamente relacionados
(aunque no iguales) conocidos como eosina.
 Lugol
El yodo se utiliza en química analítica como indicador para el almidón.
Cuando se mezcla almidón con una solución de yodo, se desarrolla un
color intensamente azul, representando la formación del complejo de
inclusión yodo/almidón. El almidón es una sustancia muy común en la
mayor parte de las células vegetales, de modo que una solución diluida de
yodo puede colorear el almidón presente en las células. El yodo también
es componente de la coloración de Gram utilizada en microbiología.

18.  Lugol
 Safranina
La safranina es un colorante nuclear. Colorea los
núcleos celulares de rojo. También puede ser utilizada
para darle una coloración amarilla al colágeno.

19. TIPOS DE TINCIÓN
Tinción Simple: utiliza un solo colorante.
Tinción de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo
1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg.)
Tinción Ácido Resistente: Una vez teñidos, conservan su color
resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción
las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario
color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados
por el ácido y toman el color azul.

20. Tinción de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se
utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para
observar materias núcleos de la células.
Tinción de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con
safranina.
Tinción de Cápsula: Colorante nigrosuna, aquí se observa
microorganismos encapsulados creando resistencias.

21. Cultivo de Bacterias
Para aislar e identificar una
especie bacteriana del medio y
de otra especie que pueda
confundirse morfológicamente
es necesario usar medios de
cultivos, ya que nos permiten
diferenciar las características del
crecimiento de las bacterias y
establecer su identidad según el
medio de cultivo que se use.
En bacteriologia, un cultivo es un método para la multiplicación de
microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el
que se prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado.

22. Un medio de cultivo está diseñado para posibilitar el
desarrollo y nutrición de las bacterias por esto cuenta con una
cantidad de sustancias como: carbono, agua, azufre, fosforo,
nitrógeno, potasio, sodio, magnesio, entre otros. También su
crecimiento depende de muchos factores entre ellos: un pH
preferiblemente neutro, humedad, oxigeno, temperatura.

23. TINCIÓN DE GRAM
La tinción de Gram o coloración de Gram
es un tipo de tinción diferencial
empleado en bacteriología para la
visualización de bacterias, sobre todo en
muestras clínicas. Debe su nombre al
bacteriólogo danés Christian Gram
(1853-1938), que desarrolló la técnica en
1884. Se utiliza poder referirse a la
morfología celular bacteriana.

24. FUNDAMENTO
Reactivos empleados en la tinción de Gram:
cristal violeta (colorante básico)
lugol
alcoholcetona (decolorante)
safranina (colorante de contraste)

25. BACTERIAS GRAM +
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared
celular bacteriana, con ayuda del lugol que refuerza la unión del
colorante. Las bacterias Gram positivas, debido a la estructura y
composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo
cristal violeta-lugol y aun después del tratamiento con el
decolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan de
color púrpura o violeta al microscopio.

27. BACTERIAS GRAM -

28. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando
son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el
contenido lipídico de la pared celular (lo que aumenta la
permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del
complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan
entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas bacterias
se observan de color rojo al microscopio.

29. PROCEDIMIENTO
Cristal violeta
1 min.
Sacar el exceso de
decolorante con
abundante agua
Lugol
1 min.

30. Alcohol - acetona (diferenciador):
Decoloración (4 partes de alcohol
y 1 parte de acetona
15 – 30 segundos
30 segundos
Safranina

31. GRAM +
GRAM -

32. GRAM + GRAM -
STAPHILOCOCCUS PSEUDOMONAS
STREPTOCOCCUS ESCHERICHIA. E. coli
MYCOBACTERIUM SHIGELLA
SALMONELLA
ENTEROBACTER
.KLEBSIELLA

33. BIBLIOGRAFÍA
http://educacionhistotecnologiafijacion.blogspot.mx/
http://procedimientosmicrobiologicos.wikispaces.com/
tinción_gram
http://umm.edu/health/medical/spanishency/articles/ti
nciones