El documento describe los diferentes tipos y usos de las tinciones en microbiología. Las tinciones se utilizan para mejorar el contraste en el microscopio y para identificar microorganismos mediante la detección de estructuras específicas. Las tinciones principales son las simples, diferenciales y específicas. La tinción de Gram es fundamental y clasifica las bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Otras tinciones como la auramina, acridina y Ziehl-Neelsen se usan para identificar micobacterias y hongos.

1. Tinciones

2. Objetivo

Poder llegar a conocer los tipos de tinciones así como su
importancia y para que sirven.

3. Tinción

Técnica auxiliar en microscopía para mejorar el contraste en la
imagen vista al microscopio. También se denomina coloración, ya
que implica agregar un colorante específico a un sustrato para
cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto.
Diccionario en línea. Invitrotv.com. 1 de octubre de 2013.

4. Usos

Descripción de microorganismos en base a su morfología,
estructura y distribución.

Detección de determinados microorganismos para diagnostico
clínico, por ejemplo.

Clasificación
tintoriales.
de
microorganismos
según
sus
características

5. Tipos de tinciones

Simples: se usa un solo colorante disuelto en solución acuosa o
alcohólica, y se suplementan con un mordiente para una mejor
fijación del colorante además de aumentar el grosor de algunas
estructuras para su mejor visión. Sirven para ver la morfología y las
agrupaciones que forman los microorganismos entre ellos y con
otras células.
B.Fany. http://microbiologiavip.blogspot.mx/2012/02/tinciones.html 2013.
Imagen: Tinción simple con azul de metileno. Quirino Cristobal, Luis Armando. http://kirino12.blogspot.mx/2009/05/tarea-no3.html. 13 de mayo de 2009.

6. 
Diferenciales: Se usa mas de un colorante. Tiñe de diferente modo
a las células de distintas especies.
Bacterias Gram positivas de Bacillus anthracis (bacilos morados)
que producen una enfermedad llamada Carbunco, encontrados en una
muestra de líquido cerebroespinal. Si hubiera una especia de bacteria
Gram negativa aparecería de color rosa. El resto son leucocitos atacando
la infección.
B.Fany. http://microbiologiavip.blogspot.mx/2012/02/tinciones.html 2013.

7. 
Específicas: Mientras las tinciones diferenciales permiten distinguir entre
distintos tipos de microorganismos, las tinciones específicas incrementan
el contraste en las células microbianas y revelan estructuras particulares,
entre las que se incluyen los flagelos y las cápsulas.
Flores, Yazz. http://realisaciondeanalisis.blogspot.mx/2012/06/tinciones-usadas-en-microbiologia.html. 5 de junio de 2012.

8. Técnicas

La tinción de Gram La técnica de la tinción de Gram fue
desarrollada por el bacteriólogo danés Christian Gram en 1884. Esta
tinción clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram
negativas.
Flores, Yazz. http://realisaciondeanalisis.blogspot.mx/2012/06/tinciones-usadas-en-microbiologia.html. 5 de junio de 2012.

9. 
Paso 1. Tinción con cristal violeta.

Paso 2. Fijación con una solución de yodo. Estabiliza el cristal violeta, todas las bacterias
en la preparación permanecen de color púrpura o azul.
Murray, Capitulo 2. pp16-18 y 21. Escuela de la medicina Universidad de Carolina del sur. Microbiología e inmunología on-line. http://pathmicro.med.sc.edu/spanish/chapter2.htm. May 5 2009.

10. 
Paso 3. Extracción con alcohol u otro solvente. Decolora algunas bacterias (las Gram
negativas) y no otras (las Gram positivas).

Paso 4. Tinción de contraste con safranina. Las bacterias gram positivas ya están teñidas
con cristal violeta y permanecen de color púrpura. Las bacterias gram negativas se tiñen
de color rosa.
Murray, Capitulo 2. pp16-18 y 21. Escuela de la medicina Universidad de Carolina del sur. Microbiología e inmunología on-line. http://pathmicro.med.sc.edu/spanish/chapter2.htm. May 5 2009.

14. Cocos Gram +

Racimos: forma típica de Staphylococcus sp,
como S. aureus.

Cadenas: forma típica de Streptococcus sp,
como S. pneumoniae, Streptococcus grupo B.

Tetradas: forma típica de Micrococcus sp

15. Bacilos Gram +

Gruesos: forma típica de Clostridium sp, como C.
perfringens, C. septicum

Finos: forma típica de Listeria sp

Ramificados: forma típica de Actinomycetes y
Nocardia, como A. israelii

16. Cocos Gram 
Diplococos: forma usual de Neiseria sp, como N. meningitidis

También Moraxella sp y Acinetobacter sp aparecen con
morfología de diplococos.

Acinetobacter puede ser pleomórfico, y a veces aparece como
coco Gram-positivo.

Cocobacilos: forma usual de Acinetobacter sp, que puede ser
Gram-positivo o Gram-negativo, y, a menudo, Gram-variable.

17. Bacilos Gram 
Bacilos finos: forma usual de
enterobacteriaceae, como E. Coli

Cocobacilos: forma usual de Haemophilus
sp, como H. influenzae

Curvados: forma usual de Vibrio sp, como V.
cholerae, y Campylobacter sp, como C.
jejuni

Forma de aguja fina: forma usual de
Fusobacterium sp

18. Otras tinciones

RODAMINA-AURAMINA

Los ácidos micólicos de las paredes celulares de las
micobacterias
poseen
afinidad
para
los
fluorocromos
auramina
y
rodamina.
Estos
colorantes se fijan a las bacterias, que aparecen
de color amarillo o naranja brillante contra un
fondo verdoso.

19. 
NARANJA DE ACRIDINA

El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su forma nativa o
desnaturalizada. En algunas preparaciones de naranja de acridina, el color de la
fluorescencia puede variar, dependiendo del pH y de la concentración. El naranja de
acridina ha sido empleado como colorante vital, que da una fluorescencia verde si el
microorganismo está vivo y roja si está muerto.
Cocultivo de células tumorales LM3 y mastocitos (MC). Coloración: Naranja de acridina en ClNa 0.1M. Se observan dos MC color naranja.

20. 
ZIEHL-NEELSEN (BAAR)

El frotis se tiñe durante unos 5 min con
Carbolfucsina aplicando calor suave.
Lavar con agua. Decolorar con alcohol
etílico 95% con un 3% de ClH
concentrado. Lavar y teñir durante 30-60
seg con Azul de Metileno (color de
contraste). Lavar y secar

21. 
BLANCO DE CALCOFLÚOR

Las paredes celulares de los hongos
fijan
el
colorante
blanco
de
calcoflúor
aumentando
considerablemente su visibilidad en
los tejidos y otras muestras. Según fue
descrito por Hageage y Harrington,
este colorante se emplea en lugar de
KOH al 10% para el examen inicial de
los materiales clínicos.
Fragilidium al microscopio óptico (40X), y con tinción calcoflúor
para observar sus tecas. Autor de la última imagen: Alf Skovgaard
disponible en http://www.alfskovgaard.dk
http://www.danival.org/notasmicro/tincion/_madre_tincion.html.
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm