Germenes Gram negativos.

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Germenes Gram negativos.

  1. 1. Identificación de gérmenes gram negativos Obtener cultivo puro Agar sangre Agar nutritivo Importante trabajar sobre colonias aisladas Agar diferencial Agar chocolate Levin Clerd SS
  2. 2. Examen microscópico Se tiene en cuenta: coco Morfología bacilo otro cadena Agrupación grupo otro Reacción al gram Negativa Positiva Sistema de graduación Murray y Washington Células PMN x epitelial CBP es x CBP Grupo 1 >25 <10 Grupo 2 25 10-25 Grupo 3 25 25 Grupo 4 10-25 25 Grupo 5 <10 >25
  3. 3. Observación de colonias
  4. 4. Hemólisis
  5. 5. Tamaño
  6. 6. Color
  7. 7. Aspecto
  8. 8. Identificación Clasificación de la bacteria en: Familia: Enterobactereaceae Genero: Escherichia Especie: coli test de orientación: oxidasa semiautomatizados Diferentes automatizado Métodos agares cromógenos manuales características bioq/cas
  9. 9. Metabolismo oxidativa Glucosa fermentativo Lactosa Sacarosa Arabinosa Metabolismo proteico: proteasas Metabolismo lípidos: lipasas
  10. 10. ATB -Es definido como la evaluación de la capacidad de un fármaco antibacteriano para inhibir in vitro el desarrollo bacteriano *Método de dilución en caldo *Método de difusión (kirby bauer)
  11. 11. ∗ ∗ ∗ Objetivo del montaje del ATB Conocer probabilidad de éxito clínico Detecta mecanismos de resistencia Coadyuvante en la identificación Se fundamenta en: 1. Suspensión bacteriana 2. Discos de papel impregnados 3. Incubación 4. Medición de diámetros (S, I, R) Punto de Corte Piperaciclin a tazobactam PTZ Enterobacterias R I S < o = 17 18-20 > o = 21
  12. 12. Medio de cultivo: Mueller Hilton * * * * * * * Medio poroso (permite difusión del antibiótico) Adecuado crecimiento de la mayoría de bacterias patógenas Control electrolítico (Ca 2+, Mg 2+) Altura del agar 3-5 mm (ideal 4 mm) pH: 7.2 -7.4 peachimetro Humedad controlada Control de calidad: incubar lotes preparados a 35ºC x 24 horas
  13. 13. Sensidiscos Discos de papel absorbente de 6 mm, con cantidades exactas de antibióticos o de otros agentes quimioterapeùticos. GM: gentamicina GM 10 10: 10 µg Control de calidad de discos Test de screen Test de confirmación K. pneumoniae ATCC 700603 K. pneumoniae ATCC 700603 E. coli ATCC 25922 E. coli ATCC 25822
  14. 14. 2 1 3 4 3 direcciones diferentes 7 6 5
  15. 15. Factores que en el resultado * * * * * * influyen del ATB Grosor del agar pH del agar Densidad óptica de la suspensión bacteriana (0.5 McF) Atmósfera de incubación (usualmente aire) Habilidad para la lectura de las zonas de inhibición Actualización anual de los puntos de corte
  16. 16. - Mecanismos de resistencia bacteriana Producción de enzimas - Modificación del blanco - Bombas de eflujo - Cierre de porinas
  17. 17. RESISTENCIA INTRINSECA Microorganismo Antibióticos Pseudomona aeruginosa Ampicilina, Amoxicilina y Ac Clavulanico, Cefalosporinas (I, II),CTX, CRO, Acido nalidixico Salmonella y Shiguella Stenotrophomonas Klebsiella Cefalosporinas I, II y Aminoglucosidos Todos los betalactamicos, Aminoglucosidos Ampicilina, Amoxicilina Proteus Nitrofurantoina, Ampicilina, Amoxicilina Acinetobacter Ampicilina, Nitrofurantoina, cefalosporinas I y II
  18. 18. Betalactamasas Clasificación según Bush. Betalactamasas que son inhibidas por ácido Clavulanico, Sulbactam y Tazobactam. 2. Betalactamasas de amplio espectro, generalmente inhibidas por la acción del ácido clavulanico. 1.
  19. 19. Betalactamasas Clasificación según Bush. 3. Metalo-betalactamasas que actúan sobre Penicilinas, Cefalosporinas y Carbapenicos no inhibidas por el ácido clavulanico e inhibidas por el EDTA. 4. Betalactamasas que no son inhibidas por el ácido clavulanico.
  20. 20. Expresión de betalactamasas ∗ Constitutiva: producción enzimática, es independiente de un agente inductor. ∗ Inducible: la producción enzimática se manifiesta cuando la bacteria fuera expuesta al agente inductor (betalactamico).
  21. 21. Betalactamasas de espectro extendido (Blees) Enzimas mediadas por genes plasmidicos, no inducibles, capaces de hidrolizar la cadena oximino-betalactamica. Espectro de acción: Ceftazidima Cefotaxima Ceftriaxona Aztreonam
  22. 22. Betalactamasas de espectro extendido (Blees) No confiere resistencia a: Cefamixinas: Cefoxitina Cefotetan Carbapenicos: Meronem Imipenem Ertapenem
  23. 23. A quienes vigilar para Blees Klebsiella pneumoniae Klebsiella oxytoca Escherichia coli Proteus mirabilis
  24. 24. Confirmación de Blees Caz < 22 Ctx < 27 Cro < 25 Atm < 27
  25. 25. E. coli ESBL Caz + Clav Ctx Caz Ctx + Clav
  26. 26. K. Oxytoca No ESBL Caz + Clav Ctx Caz Ctx + Clav
  27. 27. Betalactamasas tipo AmpC A M P C E S Aeromonas Morganella Providencia/ Pseudomona Citrobacter Enterobacter Serratia
  28. 28. Betalactamasas tipo AmpC Confiere resistencia a: Cefalosporinas de 1, 2 y 3 generación. Piperacilina Cefoxitina Pero sensible a CEFEPIME
  29. 29. E. coli AmpC positiva Fox
  30. 30. E. coli AmpC negativa Fox
  31. 31. Klebsiella Blee + AmpC
  32. 32. Selección de antimicrobianos * Conocimientos de resistencias naturales * Propiedades farmacológicas, incluso toxicidad, unión de proteínas, distribución, absorción y excreción * Experiencia clínica previa de eficiencia * Naturaleza del proceso patológico * El estado inmune del paciente
  33. 33. Orinas GENTAMICINA CEFAZOLIN CEFEPIME CEFTRIAXONE CEFTAZIDIME CEFOTAXIME AMIKACINA AMPICILINA SULBACTAM TRIMETROPIN SULFA NITROFURANTOIN NORFLOXACINA ACIDO NALIDIXICO
  34. 34. Pseudomonas GENTAMICINA CEFEPIME CEFTAZIDIME CIPROFLOXACINO CEFOPERAZONA SULBACTAM AMIKACINA PIPERACICLINA TAZOBACTAM AZTREONAM TRIMETROPIN SULFA MEROPENEM IMIPENEM TOBRAMICINA
  35. 35. Enterobacterias GENTAMICINA AZTREONAM CIPROFLOXACINO PIPERACICLINA TAZOBACTAM AMIKACINA AMPICILINA SULBACTAM CEFEPIME CEFTAZIDIME TRIMETROPIN SULFA CEFOTAXIME CEFAZOLIN CEFTRIAXONE
  36. 36. Stenotrophomonas Burkholderia Trimetropin sulfa Trimetropin sulfa Levofloxacino Ceftazidima Ceftazidima* Meronem Levofloxacino* *Antibiótico recomendado para técnica de microdilución
  37. 37. Errores en el antibiograma Klebsiella pneumoniae Ampicilina Am/ sulbactam Cefazolin Ceftriaxona Ceftazidima Cefepime Meropenem sensible sensible sensible resistente sensible sensible sensible
  38. 38. Errores en el antibiograma Pseudomona aeruginosa Amikacina sensible Gentamicina sensible Ciprofloxacina sensible Ceftriaxona sensible Cefepime sensible Ceftazidima sensible Meropenem sensible
  39. 39. Errores en el antibiograma Escherichia coli Ampicilina sensible Cefazolin sensible Vancomicina resistente Cefepime sensible Amikacina sensible Ciprofloxacina resistente Ac.nalidixico sensible
  40. 40. Errores en el antibiograma Proteus mirabilis Am/sulbactam resistente Cefazolin resistente Ceftriaxone sensible Ceftazidime resistente Nitrofurantoina sensible Ac.nalidixico Ciprofloxacina sensible resistente
  41. 41. Antibiograma Klebsiella pneumoniae Am/sulbactam resistente Amikacina sensible Gentamicina sensible Cefazolin resistente Ceftriaxone intermedio Ceftazidime sensible Cefepime sensible Piper/tazo resistente
  42. 42. Antibiograma Pseudomona aeruginosa Ceftazidime sensible Cefepime sensible Pip/tazobactam resistente Ciprofloxacina resistente Gentamicina sensible Imipenem resistente Meropenem resistente
  43. 43. Conclusione La evolución de la resistencia bacterianas un s reto permanente para los laboratorios de microbiología, los cuales deberán: ∗Sospechar nuevos mecanismos de resistencia. ∗Tamizar apropiadamente para vigilar los mas prevalentes. ∗Reportar con criterio microbiológico y clínico al medico.

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