El documento explica la prueba ELISA (Ensayo Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas). ELISA utiliza anticuerpos o antígenos marcados con enzimas para detectar la presencia de analitos como anticuerpos o antígenos. Existen dos tipos principales de ELISA: directo e indirecto. En ELISA directo, los antígenos se fijan al soporte y se detectan con anticuerpos marcados. En ELISA indirecto, son los anticuerpos los que se fijan y se detectan con antígenos marcados. ELISA permite
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
Twitter.com/@bryanpriegop
Radioinmunoensayo, ELISA y Western BlotBryan Priego
A continuación, te proporciono información detallada sobre los tipos de ELISA, inmunoensayo y Western Blot, incluyendo los pasos a seguir, la técnica, el fundamento, los materiales, la historia y las aplicaciones. Espero que esta explicación te ayude a comprender mejor cómo se llevan a cabo estas técnicas y para qué se utilizan. Si tienes alguna duda, no dudes en preguntar, estaré encantado de ayudarte.
El ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica de ensayo inmunológico ampliamente utilizada para detectar y cuantificar la presencia de una sustancia específica, como un antígeno o un anticuerpo, en una muestra biológica. Existen diferentes tipos de ELISA, incluyendo el competitivo, directo, indirecto y sándwich.
En el ELISA competitivo, el antígeno de interés compite con un antígeno marcado previamente conocido por su unión a un anticuerpo. La cantidad de antígeno presente en la muestra se determina midiendo la cantidad de antígeno marcado que se une al anticuerpo.
En el ELISA directo, el antígeno de interés se une directamente a una superficie sólida (como un pozo de una placa de microtitulación) y se detecta utilizando un anticuerpo marcado que se une específicamente al antígeno.
En el ELISA indirecto, se utilizan dos anticuerpos: uno primario, que se une específicamente al antígeno, y otro secundario, marcado con una enzima, que se une al anticuerpo primario. La enzima proporciona una señal detectable para cuantificar la presencia del antígeno.
En el ELISA sándwich, se utilizan dos anticuerpos: uno de captura, que se une al antígeno, y otro de detección, que se une a otra región del antígeno. El antígeno se "sándwicha" entre los dos anticuerpos, lo que permite una alta sensibilidad en la detección.
El inmunoensayo es una técnica general que utiliza anticuerpos para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos específicos. El ELISA es un ejemplo de inmunoensayo, pero también existen otras técnicas, como el radioinmunoensayo (RIA), que utiliza isotopos radiactivos, y los inmunoensayos enzimáticos basados en enzimas para la detección.
El Western Blot, también conocido como inmunotransferencia, es una técnica utilizada para detectar proteínas específicas en una muestra. Consiste en separar las proteínas de la muestra mediante electroforesis en gel, transferirlas a una membrana y luego incubar la membrana con anticuerpos específicos para las proteínas de interés. Los anticuerpos marcados permiten la detección de las proteínas mediante reacciones enzimáticas o quimioluminiscencia.
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La prueba ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) es una técnica utilizada para detectar la presencia de anticuerpos o antígenos en una muestra biológica. Se basa en la unión de un anticuerpo específico a un antígeno, seguido de la unión de una enzima a dicho anticuerpo. La reacción enzimática produce un cambio de color que indica la presencia del anticuerpo o antígeno de interés.
Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo.
Terapia cinematográfica (6) Películas para entender los trastornos del neurod...JavierGonzalezdeDios
Los trastornos del neurodesarrollo comprenden un grupo heterogéneo de trastornos crónicos que se manifiestan en períodos tempranos de la niñez y que, en conjunto, comparten una alteración en la adquisición de habilidades cognitivas, motoras, del lenguaje y/o sociales que impactan significativamente en el funcionamiento personal, social y académico. Tienen su origen en la primera infancia o durante el proceso de desarrollo y comprende a heterogéneos procesos englobados bajo esta etiqueta.
El Manual diagnóstico y estadístico de los trastornos mentales en su quinta edición (DSM-V) incluye dentro los trastornos del neurodesarrollo los siguientes siete grupos: Discapacidad intelectual, Trastornos de la comunicación, Trastorno del espectro del autismo (TEA), Trastorno de atención con hiperactividad (TDAH), Trastornos específico del aprendizaje, Trastornos motores y Trastornos de tics. Es importante tener en cuenta que en una misma persona puede manifestarse más de un trastorno del neurodesarrollo. Y, dentro de todos los trastornos del neurodesarrollo, el autismo adquiere una especial importancia, por lo que será considerado en el próximo capítulo de la serie “Terapia cinematográfica” de forma particular.
Y esta gran diversidad también la ha reflejado en la gran pantalla y en las historias “de cine” que el séptimo arte nos ha regalado. Y hoy proponemos un recordatorio de la amplia variedad y complejidad de los trastornos del neurodesarrollo en la infancia a través de 7 películas argumentales. Estas películas son, por orden cronológico de estreno:
- El milagro de Ana Sullivan (The Miracle Worker, Arthur Penn, 1962) 6, para valorar el milagro de la palabra, el milagro del lenguaje y de los sentidos.
- Forrest Gump (Robert Zemeckis, 1994) 7, para comprender el valor de la lucha por encontrar cuál es la meta de cada uno, una mezcla de destino y sueños propios.
- Estrellas en la Tierra (Taare Zameen Par, Aamir Khan, 2007) 8, para confirmar que cada niño y niña es especial, incluso con sus potenciales deficiencias psíquicas, físicas y/o sensoriales.
- El primero de la clase (Front of the Class, Peter Werner, 2008) 9, para demostrar el valor de la superación y como, a pesar de nuestras dificultades, somos merecedores de oportunidades.
- Cromosoma 5 (María Ripoll, 2013) 10, para entender la soledad del corredor de fondo ante los trastornos del neurodesarrollo.
- Gabrielle (Louise Archambault, 2013) 11, para intentar normalizar las relaciones afectivas y amorosas entre dos personas con enfermedades mentales y discapacidad.
- Línea de meta (Paola García Costas, 2014) 12, para interiorizar que la carrera de la vida es especialmente difícil para algunos.
Siete películas argumentales que el séptimo arte nos presenta con protagonistas afectos con diferentes trastornos del neurodesarrollo durante su infancia, adolescencia y juventud y que nos ayudan a comprender que cada persona es especial, diversa y con capacidades diferenciales que hay que respetar y potenciar.
La empatía facilita la comunicación efectiva, reduce los conflictos y fortale...MaxSifuentes3
La empatía es la capacidad de comprender y compartir los sentimientos de los demás. Es una habilidad emocional que permite a una persona ponerse en el lugar de otra y experimentar sus emociones y perspectivas. Hay diferentes formas de empatía, que incluyen:
Empatía cognitiva: Es la capacidad de comprender el punto de vista o el estado mental de otra persona. Es decir, saber lo que otra persona está pensando o sintiendo.
Empatía emocional: Es la capacidad de compartir los sentimientos de otra persona. Esto significa que, cuando otra persona está triste, tú también sientes tristeza.
Empatía compasiva: Va más allá de simplemente comprender y compartir sentimientos; implica la voluntad de ayudar a la otra persona a lidiar con su situación.
La empatía es importante en las relaciones interpersonales, ya que facilita la comunicación efectiva, reduce los conflictos y fortalece los vínculos. También es fundamental en profesiones que requieren interacción constante con otras personas, como la atención médica, la educación y el trabajo social.
Para desarrollar la empatía, se pueden practicar varias técnicas, como la escucha activa, la observación de las señales no verbales, la reflexión sobre las propias emociones y la exposición a diversas perspectivas y experiencias.
La empatía es esencial en todas las relaciones interpersonales, ya que permite comprender y compartir los sentimientos de los demás. Es una habilidad emocional que nos ayuda a ponernos en el lugar de otra persona y experimentar sus emociones y puntos de vista. Existen diferentes tipos de empatía, como la cognitiva, que implica comprender el estado mental de otra persona, la emocional, que consiste en compartir sus sentimientos, y la compasiva, que va más allá al involucrar la voluntad de ayudar a la otra persona.
La empatía facilita la comunicación efectiva, reduce los conflictos y fortalece los lazos entre las personas. También es fundamental en profesiones que requieren contacto constante con otras personas, como la atención médica, la educación y el trabajo social.
Para desarrollar la empatía, es importante practicar diferentes técnicas como la escucha activa, la observación de las señales no verbales, la reflexión sobre las propias emociones y la exposición a diferentes perspectivas y experiencias.
La introducción plantea un problema central en bioética.pdfarturocabrera50
Este documento aborda un problema central en el campo de la bioética, explorando las complejas interacciones entre el avance científico y sus implicaciones éticas. Se analiza cómo la tecnología biomédica y las investigaciones emergentes plantean dilemas éticos relacionados con el tratamiento y el cuidado de la vida humana, la toma de decisiones informadas y la equidad en el acceso a los beneficios médicos. Este análisis proporciona una base para discutir cómo estas cuestiones afectan las políticas públicas, la práctica médica y la ética profesional.
2. Antes de nada
quería recordaros
que…
ANTÍGENO (Ag):
Molécula exógena, que se encuentra
en la superficie de un agente patógeno,
y que al entrar en contacto con el
organismo, induce la producción de una
respuesta del Sistema Inmune específica
(formación de Acs)
ANTICUERPO (Ac):
Proteína producida como respuesta a una sustancia “extraña” (Ag)
y que tiene la capacidad de combinarse con él (complejo Ag-Ac).
3. ¿Qué es un INMUNOENSAYO?
Es una prueba que usan complejos antígeno:anticuerpo
(también denominados inmunocomplejos) para medir la
presencia de un analito¹ específico en una muestra.
“Inmuno” se refiere a una respuesta inmunológica que hace
¹Analito es todo
que el cuerpo genere anticuerpos, y “ensayo” se refiere a una que se mide en
lo
prueba de
prueba. Entonces, un inmunoensayo es una prueba que utilizaunalaboratorio.
inmunocomplejos cuando hay una unión Ag-Ac.
En el
inmunoensayo, el
analito puede ser
tanto un Ac como
pruebas
un Ag.
Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de
de laboratorio (como las pruebas colorimétricas) ya que usan
complejos Ac-Ag para generar una señal que pueda medirse.
Los Acs son la base de los inmunoensayos, ya que poseen
una alta especificada y afinidad para un Ag específico. Es
esta unión lo que permite la detección de analitos por medio
de una variedad de técnicas de inmunoensayo.
4. INTRODUCCIÓN:
El método ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs
marcados con una enzima, de forma que los
conjugados resultantes tengan actividad tanto
inmunológica como enzimática.
Al estar uno de los componentes (Ag o Ac) marcado
con una enzima e insolubilizado sobre un soporte o
pocillo (inmunoadsorbente) la reacción Ag-Ac quedará
inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada
mediante la adición de un substrato especifico que al
actuar, la enzima producirá un color observable a
simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro o un colorímetro.
5. TIPOS:
ELISA no competitivo:
Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la
fase sólida. Si una muestra es positiva se formará el complejo AgAc, y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato
desarrollando color.
Directo: Detectan Ag
Indirecto: Detectan Ac
ELISA Sandwich
Doble (DAS)
Heterólogo (HADAS)
ELISA competitivo:
El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un
número limitado de sitios de unión del Ag. Habrá ausencia de color en
una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la
6. Pasos generales…
El primero es el
ELISA directo,
seguido del indirecto
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Tapizado del pocillo con el Ag o
Ac.
Adición de la muestra problema
con la mezcla de Ags o Acs.
Unión del Ag o Ac específico al Ag
o Ac tapizado en el pocillo.
Lavado del pocillo para eliminar el
exceso de Ag o Ac no unido.
Adición del Ac secundario
marcado con la enzima.
Unión del Ac secundario al Ag o
Ac.
Lavado del pocillo para eliminar el
exceso de enzima no unida.
Adición del sustrato.
Unión del sustrato a la enzima.
Coloración.
7. ELISA directo
Consta de las siguientes etapas:
1.
2.
3.
4.
Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Acs específicos.
Lavado con solución salinaTween 20 como agente tensioactivo
(ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados.
Adición de Ags marcados (“conjugados”) con una enzima; si los
Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.
Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan
reaccionado.
8. ELISA directo
5.
Adición de un substrato sobre el que sea capaz
de actuar la enzima marcadora.
6.
Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
Los lectores ELISA
se llaman
espectrofómetros!
!
9. ELISA indirecto
Consta de las siguientes etapas:
1.
2.
3.
4.
Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos.
Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo
(ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados.
Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los
Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado.
Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan
reaccionado.
10. ELISA indirecto
5.
Adición de un substrato sobre el que sea capaz
de actuar la enzima marcadora.
6.
Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
12. LECTURA E INTERPRETACIÓN
DE RESULTADOS:
Una de las grandes ventajas de la técnica
ELISA es la posible automatización de la
lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha
automatización se puede conseguir con un
simple colorímetro o espectrofotómetro de
cubeta o con sofisticados equipos de
lectura automática de microplacas.
Los resultados finales de la lectura
colorimétrica se reflejan numéricamente
mediante valores de absorbancia o
densidad óptica que se obtendrán a la
longitud de onda más adecuada para la
coloración final alcanzada.
13. APLICACIONES CLÍNICAS:
Enfermedades producidas por parásitos
Enfermedades producidas por Micoplasmas
Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonelas…
Enfermedades producidas por virus
Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosomas…
Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia
felina…
Otras aplicaciones
Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona..)
Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)
Inmunopatología (Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmunocomplejos
circulantes)
14. Bibliografía:
Palacios, L. (2012). E.L.I.S.A Enzime Linked Inmuno Sorbent
Assay. http://www.slideshare.net/lexass/presentacion-elisa13245114
Cultek (2006). Fundamentos y Tipos de ELISAs.
http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISAprotocolos.pdf
Dra. Fernández, N. (2007). E.L.I.S.A Enzime Linked Inmuno
Sorbent Assay. http://www.slideshare.net/aselle/elisa14876995?from_search=2
Jose, M. (2009). Técnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno
Sorbent Assay) http://es.scribd.com/doc/15834994/Tecnica-deELISA-Enzyme-Linked-Inmuno-Sorbent-Assay
Escobedo, J., Bautista, A., Correa, P., Mier, J., Pam, W., Valladar
es, J. (2012). Técnicas aplicadas a la Proteómica.
http://www.slideshare.net/angelicashantay/elisa-pasos-