PNT espectrofotómetro para su respectivo manejo y cuidado

1. LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA
INSTRUMENTAL
No 220
REGISTROS
CODIGO:
VIGENCIA: 1 AÑO
PROTOCOLO NORMALIZADO DE
TRABAJO PARA EL USO DEL
ESPECTROFOTÓMETRO EVOLUTION
600
VERSIÓN: 01
CONTROLADO: SI  NO 
COPIA No: 1
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ELABORÓ (Firma y Fecha):
Luis Carlos Garzón Tovar
Haendel S. Rodriguez
18-Noviembre -2010
REVISÓ (Firma y Fecha):
Nelson G. Castro
Junio 20015
APROBÓ (Firma y Fecha): VALIDO DESDE (Fecha):
1. OBJETIVO
Este PNT describe el procedimiento que se debe seguir para realizar un manejo básico y
llevar a cabo la verificación del funcionamiento del espectrofotómetro EVOLUTION 600,
que se encuentra en el laboratorio 220 del departamento de química de la Universidad
Nacional de Colombia.
2. DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO
Figura N°1 Espectrofotómetro EVOLUTION 600
3. ENCENDIDO DEL EQUIPO
3.1. Verificar que las conexiones del computador y espectrofotómetro evolutión 600 están
conectadas al estabilizador (figura N°2), y la conexión del estabilizador al toma co-
rriente.
3.2. Encender el espectrofotómetro con el botón de encendido (figura N°2 - C), es-
perar 5 minutos antes de encender el computador.
Figura N°2 Computador, Estabilizador y botón de encendido del espectrofotómetro
A- Puerta
deslizante con
acceso al porta
muestra
B- Compartimento
para muestra
A
B
A –Estabilizador
B- Estabilizador
C- Botón encendido
espectrofotómetro.
A
B
C

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3.3. Encender el computador y la pantalla
3.4. En el escritorio de Windows hacer click sobre el icono del software asociado al ma-
nejo del espectrofotómetro Evolution 600, VISIONpro.
3.5. Dar espera a que en la ventana de inicio aparezca un cuadro de dialogo donde se
verifica el estado del espectrofotómetro, (figura N°3 izquierda).
Figura N°3 Pantalla de inicio software VISIONpro, verificación espectrofotómetro.
3.6. SOLO si todos los ítems aparecen con un visto bueno en verde es posible el uso del
espectrofotómetro Evolution 600, (figura N°3 derecha).
3.7. Una vez el espectrofotómetro se ha iniciado, aparecerá una ventana como lo muestra
la figura N°4, dar aceptar para continuar.
Figura N°4 Ventana inicio software VISIONpro

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4. CREACIÓN O SELECCIÓN DEL MÉTODO
4.1. Vista General del Software
4.1.1. En la figura N°5 se muestra la ventana de inicio del software VISIÓNpro.
4.1.2.Tener precaución de las variables que se van a modificar, así
como de mover las pestañas en la ventana de presentación del
software VISIÓNpro, son suceptibles de moverse y perder su
ubicación, todo lo anterior puede descalibrar el equipo y ha-
cer complejo su uso.
Figura N°5 Ventana de inicio del programa VISIONpro

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4.1.3. En la barra de herramientas, seleccione la opción de método de barrido
, existen también las opciones de método fijo, cuantifi-
cación, método de velocidad, análisis multicomponente y DNA, las cuales deben
ser seleccionadas en caso de que se desea realizar alguno de estos tipos de análisis.
4.1.4. En la barra de herramientas, seleccione la opción cargar un método ya existente.
En caso contrario seleccione la opción crear un nuevo
método, Si el equipo se usó con anterioridad en el mé-
todo de barrido, al iniciar el software VISIONpro se observará la ventana que
muestra la Figura N°5.
4.1.5. Para observar las diferentes ventanas que ofrece el software VISIONpro, se puede
minimizar la ventana inicial, (Figura N°5, cuadrado rojo), y así se observaran las
ventanas de, tabla de datos y gráfica, como se observa en la Figura N°6.
Figura N°6 Vista de la ventana de inicio software VISIONpro, ventanas minimizadas.
4.2. Ajuste de variables del Método

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4.2.1. Seleccione en la pestaña modo barrido, absorbancia o si desea algún otro método
selecciónelo de la pestaña desplegable, (figura N°6 cuadrado rojo).
4.2.2. Seleccione las longitudes de onda de inicio y parada de acuerdo al rango en el que
desea hacer el barrido, esto debe hacerse de acuerdo a la lámpara seleccionada, la
lámpara de tungsteno ofrece un barrido en el visible y la lámpara de deuterio hace
un barrido en el ultravioleta, como se observa en la Figura N°7.
Figura N°7 Selección de variables para el espectrofotómetro
4.2.3. Seleccione el cambio de lámpara de acuerdo a las longitudes de onda selecciona-
das (Figura N°7 – derecha), la lámpara elegida aparecerá en la parte inferior de
la ventana, amarillo para tungsteno y azul para deuterio. (círculo rojo Figura N°8).
4.2.4. En la sección Parám-Grafico seleccione un intervalo de escala correspondiente a
su elección de unidad de respuesta, para absorbancia, seleccionar entre 0 y 2,
como lo muestra la figura N°6 encerrado en círculo.
4.2.5. En la opción tabla de resultados seleccione la opción rastreo de picos, haga click
en la opción setup, se desplegará la ventana de configuración de rastreo automá-
tico.
4.2.6. Seleccione el número de picos a encontrar (por lo general 8), en la celda Encima
seleccione la absorbancia mínima de los picos a detectar, finalmente la sensibili-
dad y a continuación en aceptar, Figura N°8.

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Figura N°8 Selección de tabla de datos
5. Metodología para la toma de un espectro
5.1. Uso de Celdas
5.1.1. La selección adecuada de la celda es importante para la toma del espectro de una
muestra. Para tomar el espectro en la región UV, usar una celda de cuarzo y para
tomar el espectro en la región visible se puede usar una celda de plástico o de
cuarzo.
5.1.2. Tomar la celda por la parte rugosa (Figura N°9 – A) y colocarla en el porta-mues-
tra del espectrofotómetro, de tal forma que la parte rugosa de la celda quede su-
jetada por las paredes del porta-muestra en el espectrofotómetro.

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Figura N°9 Celdas de plástico para la toma de muestra, Azul muestra, transparente refe-
rencia, A- Lado rugoso de la celda, B- Lado liso de la celda.
5.2. Línea Base
5.2.1. Corra la tapa del compartimiento para la muestra en el espectrofotómetro,( Figura
N°1 – A).
5.2.2. Llene las celdas con la solución referencia o blanco y de muestra, .
5.2.3. Coloque la celda con la referencia o blanco, en el compartimento del porta-mues-
tra y cierre la tapa.
5.2.4. seleccione la opción de línea base , enseguida saldrá un cuadro de dialogo,
, dar click en proceda para obtener la línea base.
A
B

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5.2.5. Una vez realizado el análisis aparecerá en Data Store, (Figura N°10, recuadro),
los datos recientemente adquiridos, en donde podrán ser guardados , exportados,
manipulados o eliminados.
Figura N°10 Línea Base
5.3. Toma de muestra
5.3.1. Retire el blanco o referencia y coloque la celda con la muestra en el porta-celdas
con el cuidado que se lista en el literal 5.1. y cierre la tapa.
5.3.2. En la barra de herramientas, en la sección grupo de análisis (Figura N°8, cuadro),
seleccione la opción Correr , saldrá un cuadro de dialogo como se muestra
en la Figura N°11.

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Figura N°11 Corrida de la muestra
5.3.3. Para asignar un nombre a la muestra hacer click en Nombre , saldrá un nuevo
cuadro donde se puede asignar el rotulo de la muestra, dar click en aceptar, y a
continuación en proceda para iniciar el análisis.
5.3.4. Al finalizar el análisis se observarán los resultados en la ventana de Data Store
donde podrán ser guardados.
5.3.5. Como se observa en la figura N°11, en las ventanas de fondo, se puede observar
las ventanas de gráfica y tabla, una vez terminada la adquisición del espectro allí
se observarán los resultados.

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6. Toma de espectro a una sola longitud de onda
6.1. En la barra de herramientas, seleccione método fijo , inme-
diatamente aparecerá una ventana como se muestra en la Figura N°12, donde se ob-
serva una tabla de resultados, además de una ventana de selección de las longitudes
de onda a las cuales se desea obtener los valores de respuesta.
Figura N°12 Selección Toma de espectros a una longitud de onda.
6.2. En la pestaña método fijo (Figura N°12- circulo) seleccione la o las longitudes de
onda que desea evaluar, haciendo click en el recuadro Apagado, para lo cual saldrá
un cuadro de dialogo, donde podrá anotar la longitud de onda requerida.
6.3. En la sección Parámetros Método, seleccione la unidad de respuesta a trabajar, así
como la lámpara según la zona del espectro a trabajar, sección 4.2.2.

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6.4. Guarde los parámetros del método haciendo click en el icono, guardar .
6.5. Hacer click en correr y al terminar se obtendrá una ventana como lo muestra la
Figura N°13.
Figura N°13 Resultado toma de espectro a una sola longitud de onda.

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7. Guardar los datos adquiridos
7.1. Seleccionar los datos a ser guardados en la ventana Data Store estos aparecerán en
sombreado amarillo, (Figura N°14 recuadro).
Figura N°14 Selección datos a guardar
7.2. Ir a archivo, exportar como ASCII , Lote al hacer click saldrá una ventana de dialogo
donde podrá guardar los datos en la ubicación que desee.
7.3. El la pestaña tipo escoger la extensión .txt para que así sea sencillo exportar los datos
a Excel (Figura N°15).

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Figura N°15 Como guardar los datos
8. Otras opciones del software VISIONpro
8.1. Suavizado de espectros (Método Savitzky Golay)
8.1.1. Para realizar suavizado o derivación del espectro por el método Savitzky Golay,
debe hacer click en matemáticas en la barra de menú principal, y posteriormente
en Savitzky Golay. (Figura N°16).
Figura N° 16 Selección suavizado por el método Savitzky Golay

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8.1.2. Una vez seleccionado el método, aparecerá una ventana en la cual se podrán filtrar
los datos, (Figura N° 17).
Figura N° 17 Ventana de filtro método Savitzky Golay.
8.1.3. El resultado a ser tratado matemáticamente debe ser seleccionado del Data Store
haciendo click sobre el nombre de la muestra, mantener oprimido y arrastrar hasta
la casilla donde está la opción Lote. Una vez elegidos los datos a tratar, en tipo de
filtro debe seleccionar suavizado o el tipo de derivada que desea realizar.
8.1.4. Hacer click en cerrar y en la gráfica de barridos se podrá observar el espectro
derivado o suavizado.

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9. Como exportar datos a Microsoft Excel
9.1. Una vez guardados los datos (Sección 6), es posible abrirlos en una tabla de Excel.
9.2. Ejecute Microsoft Excel, hacer click en archivo/ abrir, saldrá una ventana como se
muestra en la Figura N°18. En la pestaña Buscar en, seleccione el lugar donde fue
guardado los datos.
Figura N°18 Ventana de apertura de datos en Microsoft Excel.
9.3. En tipo de archivo (Figura N°18), seleccione todos los archivos, para hacer visible
los datos guardados con la extensión .txt. una vez seleccionado el archivo dar click
en Abrir.
9.4. Se abrirá una ventana como se muestra en la Figura N°19, esta ventana es el inicio
para el tratamiento de los datos de tal forma que Excel pueda abrirlos.

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Figura N°19 Selección de parámetros para abrir archivos .txt
9.5. Seleccionar delimitados y dar click en siguiente.
9.6. A continuación aparece otra ventana donde debe seleccionarse ÚNICAMENTE la
opción tabulación, (Figura N°20), posteriormente dar click en siguiente con lo cual
aparecen los datos en su respectiva columna donde pueden ser graficados o modifi-
cados, (Figura N°21)
Figura N°20 Selección parámetros Excel-final

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Figura N°21 Espectro de la muegraficado en Excel
10. Apagado del Equipo
10.1. Retirar la celda del portacelda
10.2. Una vez terminada la operación de exportar y guardar datos, debe cerrar el
programa VISIONpro.
10.3. Vaya al menú de inicio y cierre Windows
10.4. Apague la pantalla y posteriormente el espectrofotómetro con el botón que
muestra la Figura N°2 – C.
10.5. Apague el estabilizador y desconéctelo de la tomacorriente.
___________________FIN DEL DOCUMENTO_____________________