Este documento describe protocolos para realizar la hidrólisis de una proteína llamada grenetina y ensayos para identificar proteínas y aminoácidos. Incluye objetivos, reactivos, procedimientos para la hidrólisis de grenetina, reacciones de identificación como la reacción de Biuret y con ninhidrina, y cromatografía en placa fina para identificar los aminoácidos presentes en la grenetina hidrolizada.

1. PRÁCTICA 6 : HIDRÓLISIS DE
UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS
PARA PROTEÍNAS Y
AMINOÁCIDOS

2. Aminoácido
El grupo R define la
diferencia entre
cada aminoácido.
Se consideran
zwitteriones.
(ANFÓTEROS)
Se unen mediante
enlaces peptídicos
para formas las
PROTEINAS
Moléculas orgánicas
constituidas por un
grupo amino y un
grupo carboxilo

3. CLASIFICACIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS

4. ENLACE PEPTÍDICO

5. Proteína
Polímeros largos de
α- aminoácidos,
unidos por enlaces
petídicos.
Primaria Secundaria Terciaria Cuaternaria
La desnaturalización
es un cambio
estructural de las
proteínas.

6. Funciones
Estructural
Transporte
De
reserva
De
defensa

7. OBJETIVOS
1. Conocer las características de las proteínas.
2. Realizar la hidrólisis de una proteína denominada
grenetina.
3. Aplicar reacciones de identificación para aminoácidos y
proteínas.
4. Identificar los aminoácidos presentes en la grenetina
por medio de una cromatografía en placa fina.

8. REACTIVOS
Ácido clorhídrico HCl
Ácido nítrico
Hidróxido de sodio

9. Fenolftaleína
Ninhidrina
Nitrito de sodio
Rojo Congo

10. HIDRÓLISIS DE GRENETINA
(SOLUCIÓN “A”).
Cantidad Reactivo
1 g Grenetina
10 mL Ácido clorhídrico
concentrado
10 mL Agua destilada
0.5g Carbón Activado.
1 g de grenetina
10 mL de HCl
10 mL de agua
destilada
0.5 g de
carbón
activado y
continuar
calentado
Filtrar35 minutos
Continuar
calentado por
2 minutos

11. REACCIÓN DE HIDRÓLISIS

12. SOLUCIÓN NEUTRALIZADA DE
HIDROLIZADO DE GRENETINA
(SOLUCIÓN “B”).
5 ml
Solución A Neutraliza
r con
NaOH
Se Ocupara en la cromatografía, la
prueba con Ninhidrina y Acción
reguladora de Aminoacidos
CANTIDAD REACTIVO
5 mL Solución A ( G.
Hidrolizada)
La necesaria Hidróxido de sodio
El necesario Papel pH

13. SOLUCIÓN DE GRENETINA SIN
HIDROLIZAR.(SOLUCIÓN “C”).
Grenetina 0.5g
Agua destilada

14. SOLUCIÓN DE ALBÚMINA (SOLUCIÓN
“D”)
Cantidad Reactivo
1 huevo La clara
100 mL Agua destilada
Un trozo Manta de cielo
Utilizar filtrado.

15. •Reacciones de
identificación

16. REACCIÓN XANTOPROTEÍCA.
• La reacción es dada por los aminoácidos que contienen
de grupos, compuestos aromáticos.
• Se presentará una coloración amarilla.

17. REACCIÓN XANTOPROTÉICA.
CANTIDAD REACTIVO
20 mL. Solución “A” (G.
hidrolizada)
2.0 mL Solución “D” (Albúmina)
10 mL Ácido nítrico concentrado
- Hidróxido de sodio al 10%
2mL de solución A
2mL de
albúmina
Agregar a cada
tubo 5 mL de
ácido nítrico
Calentar
suavemente a
baño Maria
Observar
coloración
Enfriar, y agregar
NaOH al 10%
Observar
cambio de
coloración

18. MECANISMO

19. Reacción de Precipitación
• 2ml
Solución A
• 2ml
Solución D
• 2ml H2O
5ml NAOH
10%
1.0ml
Pb(C2H3O2)2
Cantidad Reactivos
2 mL Solución A ( G. Hidrolizada)
2mL Solución D (Albúmina)
2 mL Agua destilada
15 mL Hidróxido de sodio al 10%
1 mL Acetato de Plomo al 10%

20. MECANISMO

21. Reacción de Biuret
-0.5ml agua
destilada + -
0.5ml de sol. de
NaOH al 10%
(testigo)
-0.5ml sol. C
+ 0.5 mL de
NaOH al 10%
-A cada tubo adicionar 2ml de solución de sulfato de cobre al 2%
-Agitar, observar y concluir
-0.5ml sol. D
-0.5ml sol A +
0.5 mL de NaOH
al 10 %
-0.5ml sol. D
+ 0.5 mL de
NaOH al 10%
0.5 mL de
sol. A

22. Reacción general

23. REACCIÓN CON NINHIDRINA
• La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) reacciona con
aminoácidos que tengan el grupo amino libre.
• Una reacción positiva es en la cual se presenta un color
violeta intenso.

24. Reacción general

27. REACCIÓN CON ÁCIDO NITROSO
CANTIDAD REACTIVO
3.0 mL Ácido clorhídrico concentrado
2.0 mL Solución A ( G. hidrolizada)
2.0 mL Solución “C” (son hidrolizar)
2.0 mL Solución “D” (Albúmina)
2.0 mL Agua destilada
4.0 mL Nitrito de sodio al 5%

28. Reacción de Acido Nitroso
3ml de HCl
concentrado
• 2ml solución A
• 2ml solución C
• 2ml solución D
• Tubo testigo sin
proteína
Enfriar
1ml
Solución
acuosa de
Nitrito de
Sodio 5%

29. MECANISMO

30. ACCIÓN REGULADORA DE
AMINOÁCIDOS.

31. Cromatografía en Placa Fina
• Solución B
• Solución patrón de
aminoácido 1
• Solución patrón de
aminoácido 2
Dejamos secar
Fase-Móvil: Alcohol
terbutilico-Agua 3:1
Secar en
Estufa
Solución
Ninhidrina