1. CANCER
GENETICA Y BIOLOGICA MOLECULAR
ADRIANA MARIA GIL ZAPATA.
Msc. CIENCIAS BASICAS BIOMEDICAS
Msc.

2. CANCER
Es una enfermedad de carácter genético,
producida por la inhibición de los
restricciones que una célula posee para
limitar su división celular.
Tiene un patrón de presentación que
puede ser heredado o adquirido.

3. CANCER
Anomalía genética en el ámbito celular.
Cèlulas cancerosas:
Multiplicación incontrolada.
Capacidad para extenderse o producir
metastasis

4. CANCER
HOMEOSTASIS ENTRE:
Control de la proliferación
Diferenciación
Muerte celular

5. NEOPLASIA
Porciòn anormal de tejido, en crecimiento
màs acelerado que los tejidos normales,
que se expande sin regulaciòn en forma
autònoma e invade y destruye los tejidos
adyacentes.
TUMOR: Tumefacciòn de una masa en
crecimiento.
CANCER: Tumor maligno.

6. EPIDEMIOLOGIA DEL
CANCER
Es una enfermedad de muy alta incidencia
y una de las mayores causas de morbi-
mortalidad a nivel mundial.
En el mundo 10’900.000 personas se ven
afectadas anualmente y de ellas mueren
6’700.000, lo cual corresponde a la muerte
de una de cada seis personas en el mundo.
(Instituto Nacional de Cancerología 2005)

7. EPIDEMIOLOGIA DEL CANCER
EN COLOMBIA
SEXO INCIDENCIA MORTALIDAD
MASCULINO TAE* % TAE* %
PROSTATA 45.8 19.7 19.6 13.9
ESTOMAGO 36 16 27.7 19.4
PULMON 20 8.6 19.8 13.5
COLON-RECTAL 11.4 5.3 7.1 5.2
TOTAL 213.7 100 137.6 100
Incidencia estimada y mortalidad por cáncer en Colombia, 1995-1999.
cá 1995-
*Individuos x 100000 habitantes/año. Instituto Nacional de Cancerología 2005.
habitantes/añ Cancerologí

8. EPIDEMIOLOGIA DEL CANCER
EN COLOMBIA
SEXO INCIDENCIA MORTALIDAD
FEMENINO TAE* % TAE* %
CUELLO UTERO 36.8 17.7 18.4 15.2
MAMA 30 14 12.4 10.5
ESTOMAGO 20.7 9.5 15.9 13
COLON-RECTAL 13.9 6.4 7.2 6
TOTAL 212.9 100 121.7 100
Incidencia estimada y mortalidad por cáncer en Colombia, 1995-1999.
cá 1995-
*Individuos x 100000 habitantes/año. Instituto Nacional de Cancerología 2005.
habitantes/añ Cancerologí

9. CANCER
Se ha dificultado conocer completamente
ésta patología porque existen diferencias
notables entre los individuos para:
Metabolizar los carcinógenos.
Reparar el ADN dañado.
Responder ante diferentes estímulos
especialmente individuos con
predisposición heredada al cáncer.

10. CANCER
La alteración de la célula se produce
como resultado de defectos en la regulación
del ciclo celular.
Estos defectos son debidos a la
desestabilización del genoma provocada por
el daño del material genético, causado por
factores internos o externos a las células.
Su manifestación es la presencia de
alteraciones génicas y/o cromosómicas
específicas.

11. CANCER
El estilo de vida se relaciona con
determinados tipos de cáncer.
Fumar Cáncer de pulmón
Rayos X Leucemias mieloides
Rayos UV Cáncer de piel
Alimentación Ca. gástrico y Colorectal
Todos estos factores ocasionan mutaciones
en el material genético que se acumulan y
finalmente llevan a alterar el comportamiento
celular.
(Lichtenstein et al. 2000, Cunningham et al. 2001, Castillo et al. 2002)

13. NATURALEZA DEL CANCER
TEORIA CLONAL:
Una cèlula normal sufre una alteraciòn en
su material genètico y se transforma, y a
partir de ella se originan las demàs cèlulas
alteradas.
Se presenta con mayor frecuencia en
cèlulas de tejidos que proliferan
abundantemente en condiciones normales.
Las cèlulas cancerosas muestran mùltiples
lesiones genèticas.
La incidencia aumenta con la edad.

16. ETIOLOGIA
Sager:
El càncer es un proceso genètico con
mùltiples estadìos:
1. Daño inicial del ADN.
2. Rupturas cromosòmicas y rearreglos
3. Selecciòn de cèlulas mutantes
suceptibles de crecer.
4. Aberraciones cromosòmicas con
nuevos patrones de expresiòn gènica.

17. DAÑO DEL ADN
AGENTES MUTAGENOS QUE
CAUSAN MUTACIONES
INDUCIDAS
1. Mutágenos Físicos
2. Mutágenos Químicos
3. Mutágenos Biológicos

19. CARACTERÍSTICAS DEL
PROCESO CANCERIGENO
1. Es un proceso que se desarrolla a largo plazo
y progresa en cuatro fases obligatorias:
a. Fase de inducciòn: 20 años o màs,
exposiciòn a agentes mutagènicos.
b. Fase in situ: Ocurre la selecciòn clonal y
esta localizado
c. Fase invasiva: las cèlulas se multiplican e
invaden tejidos profundos a travès la m. basal.
d. Fase diseminaciòn: En 1 a 5 años hacen
metàstasis a distancia del sitio de origen.

20. DETECCION DEL CANCER
Es critica la detecciòn antes de la fase D
(metàstasis), idealmente en la fase A
pero es imposible, por lo cual se busca
que la detecciòn se haga en la fase B
(carcinoma in situ), como el caso de la
citologìa para detecciòn de ca de cervix
donde la detecciòn en fase in situ tiene un
pronòstico excelente.
La mayorìa de los canceres se sigue
detectando en fase C (invasiva).

21. CARACTERÍSTICAS DEL
PROCESO CANCERIGENO
2. Cambios en la divisiòn celular:
La cèlula se inmortaliza.
3. Desdiferenciaciòn celular:
La cèlula pasa de un tipo especìfico a uno
màs general y produce sustancias propias
de estadios embrionarios como proteìnas
(Alfa feto proteina) y antìgenos oncofetales
(Antìgeno carcinoembrionario)

22. CARACTERÍSTICAS DEL
PROCESO CANCERIGENO
4. Invade tejidos alrededor. Entre los
factores que influyen està:
a. Incremento de la motilidad de los
receptores de membranas
b. Incremento en la presiòn debido a la
activa multiplicaciòn celular.
c. Elaboraciòn de sustancias lìticas
d. Pèrdida de uniones intercelulares.
e. Pèrdida de inhibiciòn por contacto.

23. CAMBIOS DE LA CELULA
NEOPLASICA
1. Alteraciones cromosòmicas
2. Transformaciòn
3. Alteraciones de la membrana celular
4. Cambios antigènicos
5. Cambios bioquìmicos

25. GENES SUPRESORES DE
TUMORES
• Retinoblastoma (RB)
• Tumor de Wilms (WT)
• Cancer de mama (BRCA1)
• Guardian del genoma (p53)

28. ONCOGENES
• Los protoncogenes se convierten en
Oncogenes por:
• Mutaciones puntuales ( glicina 12 y la
glutamina 61)
• Translocaciones
• Sobreexpresiones.
Familia génica ras, proteína de 189 a.a.
transducción de señales a través de la
membrana plasmática

29. ALTERACIONES
ESTRUCTURALES ONCOGENES
GEN Numero de Numero de
codones aminoacidos
Gen c-onc
H-ras 189 3
K-ras 189 7
mos 369 11
myc 417 2
erbA 408 22
src 533 16

30. Translocación Oncogenes
• Oncogen c-abl, esta asociado a leucemia
mielogena cronica (CML).
• Translocación reciproca cromosoma 9 y
22

31. Genómica del Cáncer
Células cancerosas Genoma de cáncer
Familia con cáncer
Mutación
genética

33. MUTACIONES EN EL CANCER

34. HERRAMIENTAS EN CANCER
En los ùltimos años se han desarrollado a
travès de procesos empìricos de observaciòn
y experiencia novedosas avances tècnicos
para combatir el càncer.
• Biologìa molecular
• Bioquimica de cèlulas eucariotas
• Inmunologìa celular
• Virologìa
• Citogenètica y cultivo celular
• Modelos animales con estadìos de cancer

35. CAMBIOS DE LOS ANALITOS CON
EL CANCER
Los analitos bioquìmicos producidos por la cèlula
se pueden medir como marcadores tumorales
primarios o como test secundarios para detectar
invasiòn o metàstasis.
Entre los marcadores bioquìmicos que se pueden
detectar estàn los antìgenos oncofetales y algunas
enzimas, su uso es limitado en diagnòstico pero
pueden ser ùtiles para medir respuesta a terapia y
como indicador pronòstico. Se pueden detectar en
el laboratorio por pruebas de ELISA,
quimioluminiscencia, etc.

36. PAPEL DEL LABORATORIO CLINICO
Puede desempeñar cuatro funciones
importantes:
1. DETECCION: Pruebas de tamizaje
2. CONFIRMACION: Cuando hay
sìntomas clìnicos.
3. CLASIFICACION Y ESTADÌO:
Determinar el grado de diferenciaciòn.
4. MONITOREO: Es la màs importante.

37. MARCADORES TUMORALES
Coombes y Neville han sugerido para seleccionar
como un marcador tumoral ideal:
1. Ser especìfico del tumor estudiado.
2. Facil de medir en fluidos biològicos.
3. Mediciòn econòmica.
4. Relaciòn entre niveles plasmàticos y tamaño
del tumor.
5. Tener niveles plasmàticos y urinarios
estables.
6. Si està presente en tejidos sanos que su
concentraciòn sea mucho menor que los
valores asociados con el càncer.

38. MARCADORES TUMORALES
Es dificil encontrar marcadores que cumplan
todos estos requisitos, sin embargo todos deben
cumplir:
1. Permitir pronosticar mayor o menor riesgo de
recurrencia de la neoplasia
2. Su concentraciòn debe cambiar con los
cambios del tumor a lo largo del tiempo.
3. Debe predecir recurrencias antes de que
sean clinicamente detectables.
Un marcador tumoral debe ser usado para
detectar estadios muy tempranos de cancer,
especialmente si hay tratamiento disponible.

39. CLASIFICACIÓN
MARCADORES TUMORALES SEGÚN SU ESTRUCTURA
TIPO DE MARCADOR EJEMPLO
Fosfatasa ácida, fosfatasa alcalina,
ENZIMAS creatincinasa, deshidrogenasa láctica,
enolasa neuroespecífica,…
Gonadotropina coriónica humana,
HORMONAS, NEUROTRANSMISORES catecolaminas (y metabolitos),
Y SUS METABOLITOS serotonina y ácido 5-
hidroxindolacético,…
α-fetoproteína, antígeno
carcinoembriónico, antígeno
PROTEÍNAS
específico de la próstata, ferritina,
inmunoglobulinas, CA19-9, CA15-3,…
RECEPTORES CELULARES Estrógeno y progesterona
ÁCIDOS NUCLEICOS DNA

40. ENZIMAS
ENZIMA SITIO/TUMOR
Fosfatasa ácida Próstata
Pró
Fosfatasa alcalina Metástasis a huesos e hígado, sarcoma osteogénico
Metá hí osteogé
Próstata, senos, ovarios, colon, pulmón, aparato
Pró pulmó
Creatincinasa-BB
Creatincinasa-
digestivo
Amilasa Páncreas
Lipasa -
Tripsina -
Ribonucleasa -
5’-nucleotidasa y transferasa de gammaglutamilo Hígado
Transferasa de desoxinucleótidilo terminal
desoxinucleó Leucemia
Colagenasa Huesos
Deshidrogenasa láctica Hígado, cuello uterino, colon, leucemia, linfoma
Neuroblastoma, cerebro, testículos, tumor pulmonar
Neuroblastoma, testí
Enolasa específica de neuronas
especí
de células pequeñas
cé pequeñ
Carcinoma medular, carcinoma bronquial,
Histaminasa
carcinoma del embriometrio.
embriometrio.

41. HORMONAS
HORMONA/NEUROTRANSMISOR SITIO/TUMOR
Tumore trofoblásticos, coriocarcinoma,
Gonadotropina coriónica humana
tumor de células geminales
Calcitonina Médula tiroidea
Adrenocorticotrópica Suprarenales, pulmonar
Catecolaminas y metabolitos Neoroblastoma
Serotonina Tumores carcinoides
Páncreas, próstata, corteza suprarenal,
ADH
carcinoma pulmonar de células tipo avena
Gastrina Gastrónoma
Glucagon Glucagonoma
Insulina Insulinota
Prolactina Gándula pituitaria
Tumor testicular de células de Leydig,
Estrógenos, andrógenos
tumores ováricos
TSH Próstata, carcinoma broncogénico, sangre

42. PROTEÍNAS
PROTEÍNA
PROTEÍ SITIO/TUMOR O ACCIÓN
ACCIÓ
α-fetoproteína
fetoproteí Hígado, ovario, testículos
testí
Antígeno carcinoembriónico
Antí carcinoembrió Colon, senos, pulmones
Antígeno específico de la próstata
Antí especí pró Próstata
Pró
Catepsina-D
Catepsina- Senos
CA19-9
CA19- Páncreas
Antígeno oncofetal pancreático
Antí pancreá -
Mucina de cáncer de mama
cá Senos
CA125 Ovarios
Células escamosas de cuello uterino, pulmones, cabeza,
Antígeno de carcinoma de células escamosas
Antí cé
cuello
P-glucoproteína
glucoproteí Marcador de resistencia de fármacos
fá
CA72-4
CA72- Estómago, ovario, colon, senos y pulmones
Estó
LASA, ácido siálico asociado con lípidos
siá lí Marcador muy genérico para neoplasmas
gené
Hodking, leucemia mielocítica aguda, pulmones, hígado,
Hodking, mielocí hí
Ferritina
senos y páncreas
pá
Linfoma, leucemia, mieloma múltiple, macroglobulemia
mú
Microglobulina-β2
Microglobulina-
waldenström
waldenströ
Hidroxiprolina Metástasis óseas
Metá
Péptido C Insulinota
Inmunoglobulinas Mieloma múltiple, macroglobulemia waldenström
mú waldenströ
Antígeno polipeptídico de tejidos
Antí polipeptí Senos, pulmones, aparato digestivo, vejiga, ovario y útero

43. RECEPTORES CELULARES
SITIO/TUMOR O
RECEPTOR
ACCIÓN
Estrógeno,
Mamario
progesterona
Medidas del potencial
Laminina
metastático
Factor de crecimiento
Mamas
epidérmico
Interleucina-2 leucemia

44. ÁCIDOS NUCLEICOS
ONCOGEN/AGENTE VIRAL SITIO/TUMOR
c-erbB-2 Senos, ovario
Pulmones, linfoma, aparato
Myc
digestivo, colon cerebro
P53 Colon
Cromosoma Filadelfia Leucemis mielógena crónica
Ras Genérico
RB Ojos, pulmones, senos, vejiga
Virus de papiloma humano Cuello uterino

45. ALFA FETO PROTEINA (AFP)
CARACTERISTICAS:
Glucoproteina producida por el feto despues de la cuarta semana de
gestación, alcanza cantidades elevadas en el segundo trimestre.
desaparece en el suero a los 25 días posnatal
Valores normales: < 10ng/ml
INDICACIONES: Hepatocarcinoma en población en riesgo
sensibilidad: 39 – 64 % ESPECIFIDAD: 76-91%
CRITERIO: >500ng/ml. En 70-80 % de HC
Niveles inferiores pueden ser hallados en grandes metástasis de
tumores gástricos ó colónicos
En hepatitis aguda ó crónica, <4 veces el valor normal

46. ANTÍGENO CARCINOEMBRIONARIO
Y EL CÁNCER DE COLON
22-36% se detectan en fase avanzada.
• Glucoproteina oncofetal presente el tejido embrionario y
en ciertos tejidos malignos. Suele dar falsos positivos en
pacientes fumadores.
• se basa en la de pronosticar de forma rápida la
reactivación de un tumor, ya que sus valores aumentan
sustancialmente al reactivarse. Para estas situaciones
tiene una sensibilidad del 60%.
VALORES DE VALORES DE
VALORES
VALORES CONFIRMACI CONFIRMACIÓN DE
CONFIRMACIÓ
CRÍTICOS
CRÍ
PACIENTE NORMALES ÓN DE TUMOR METÁSTASIS POR CEA
METÁ
DE CEA
CEA (ng/ml)
(ng/ml) POR CEA (ng/ml)
ng/ml)
(ng/ml)
ng/ml)
(ng/ml)
ng/ml)
Hombre/mujer 2.5 Entre 2.5-5 Entre 5-10
5- >20
2.5-

47. FRACCION BETA DE
GONADOTROFINA CORIONICA
• CARACTERISTICAS
– Producida por el trofoblasto y otros tejidos
– valores de referencia: < 5 mu/ml
• INDICACIONES
– Embarazo: diagnóstico precoz de embarazo midiendo en
sangre, los valores se incrementan de acuerdo a las
semanas de embarazo
– Embarazo tubario: amenorrea, dolor en flanco, y beta
HCG >5

48. FRACCION BETA DE
GONADOTROFINA CORIONICA
– Mola Hidatiforme: aumento por encima de los valores
normales esperados para el tiempo de embarazo
– Coriocarcinoma
– Tumor testicular no seminomatoso
– Otras NM: pancreas, estómago, pulmón, hígado, mama,
ovario.
• Para control del Coriocarcinoma
• También se eleva en Ca. Embrionario de Testículo,
Ovario Hígado, Estómago, Páncreas
• El uso de Marihuana y el Embarazo pueden
elevarla

49. FOSFATASA ÁCIDA PROSTÁTICA
(PAP)
• Puede elevarse en el cáncer de próstata, más aún si
está extendido y también en etapas tempranas
• Puede estar alta en : Leucemia, Linfoma no
Hodkins,C.Testiculo
• También en Cirrosis Hepática, Embolia Pulmonar,
Paget, Gaucher, Osteoporosis
• 0 a 1,2 U/L (METODO ENZIMÁTICO)
• 2,5 ng/ml(RIA-EIA

50. CA 125
• Se eleva en Cáncer de ovario
• También en tumores de : Cuello y cuerpo
Uterino, Pancreas, Mama, Colon, Hígado,
Pulmón
• En procesos benignos como: Pelviperitonitis,
Pleuritis, Menstruación, Endometriosis,
Embarazo

51. CA 19-9
• Cáncer Colorectal
• Cáncer de la Vesícula Biliar. Páncreas,
Estómago
• Puede elevarse en procesos benignos como
Pancretitis, Colecistitis, Cirrosis, Litiasis
Vesicular
• HASTA 37 UI/ml

52. CA 15-3
• Control del tratamiento del Cáncer de
Mama.
• Puede elevarse en Pulmón, Ovario,
Próstata,
• Patologías benignas como: Hepatitis,
Endometriosis.
• Aumenta en la Lactancia y Embarazo
• HASTA 30 UI/ml

53. CA 27-29
• Control de recaídas Cáncer de Mama etapas II y
III después de recibir tratamiento.
• Puede > en Ca. dePpulmón, Ovario, Páncreas,
Riñon, Estomago
• > Primer Trimestre del Embarazo. Quiste de
Ovario, Endometriosis
• < DE 38 U/ml

54. DESHIDROGENASA LÁCTICA (LDH)
• Poco específica, se eleva en casi todo tipo de
cáncer
• Sirve para seguimiento de tratamientos como
Ca. de Testículo, Linfoma no Hodkins,
Sarcoma de Ewing
• Se eleva en Insuficiencia Cardiaca, IAM,
Hepatopatías.
• 80 a 120 U/L

55. ENOLASA NEURO-ESPECÍFICA (NSE)
• >En tumor de Wilms,Neuroblastomas, O,
Testículo, Riñon, Tiroides Páncreas,
Melanomas
• Sirve para informar sobre extensión,
pronostico y respuesta al tratamiento

56. ÁCIDO-5-HIDROXIINDOLACÉTICO
• TUMOR CARCINOIDE
• EN ORINA :
• a) CUALITATIVO : NEGATIVO
• b) CUANTITATIVO : 1,8 a 6,0 mg /24 hs. (9,4 a
31,4 MOL/24 hs.

57. CATECOLAMINAS
• Feocromocitoma y Neuroblastoma
Vanil mandélico
• a) Orina al azar <14 g/dl
• b) Orina 24 hs.: < 100 g/día

58. BIOLOGIA MOLECULAR EN
CANCER
La presencia de alteraciones génicas
y/o cromosómicas específicas,
permite el estudio molecular de estas
y los hallazgos pueden convertirse en
marcadores diagnósticos y
pronósticos de una malignidad en
particular.

59. VIAS GENETICAS QUE ORIGINAN
EL CANCER
Desde 1980 se estableció
que la inestabilidad genética
es un componente
fundamental de la neoplasia
humana.
A partir de 1993 que se
definió la existencia de dos
formas de inestabilidad
genética responsables de
desarrollo de malignidad y
generadoras de dos vías
moleculares de patogénesis.
(Ionov, et al 1993)

60. VIAS GENETICAS QUE ORIGINAN
EL CANCER
1. VIA SUPRESORA
De Inestabilidad cromosómica
2. VIA MUTADORA
De Inestabilidad de microsatélites

61. CICLO CELULAR
PUNTOS DE CONTROL:
G2 / M
Quinasas y Ciclinas.
G1/ S

62. CICLO CELULAR
Genes RER
G2
Chequeo de la
fidelidad de la
is
replicación.
it os
M
esis
Citocin
G1
Replicación
del ADN Crecimiento G0
celular.
S
Genes supresores
Proto-oncogenes
VIA SUPRESORA

63. VIA SUPRESORA
También denominada vía de inestabilidad
cromosómica (ICRO).
Se requiere de mutaciones que inactivan
genes supresores de tumor y activan
protooncogenes.
Marcada inestabilidad cromosómica, con
presencia de rearreglos, aneuploidía y pérdida
de heterocigocidad (LOH).
Del 80-85% de los cánceres se desarrollan por
esta vía.
La expectativa de vida es reducida.
(Liu T. 1999, Smyrk et al. 1999, Castillo et al. 2002)

66. V
I EPITELIO
A NORMAL
ADENOMA
S TEMPRANO
APC
U β CADENINA
P K-Ras
R ADENOMA
ADENOMA INTERMEDIO
E
TARDIO
S DCC
O
p53
R
A Robbins and Itzkowitz 2002

67. ALTERACION DEL CICLO
HOMEOSTASIS
PROLIFERACION-MUERTE
TUMOR
TUMOR

68. DIAGNÓSTICO MOLECULAR
VIA SUPRESORA
Cáncer de Seno
Deleción de AG en el codón 185 del exón 2 del gen
BRCA1 (185delAG)
24

69. METODOLOGIA
MUESTRA SANGUINEA
EXTRACCION DE ADN
PCR CON PRIMERS MISMATCH
DIGESTION CON ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
ELECTROFORESIS
ANALISIS DE RESULTADOS

70. PCR MISMATCH
Jara et al, 2002

71. ELECTROFORESIS EN
AGAROSA
ALELO MUTADO
ALELO NORMAL
MARCADOR DE PESO
MOLECULAR
DE 25 A 500 pb

72. CICLO CELULAR
Genes RER
G2
VIA MUTADORA
Chequeo de la
fidelidad de la
is
replicación.
it os
M
esis
Citocin
G1
Duplicación
del ADN Crecimiento G0
celular.
S
Genes supresores
Proto-oncogenes

73. VIA MUTADORA
También denominada vía de inestabilidad
de microsatélites (IMI).
Se alteran los genes implicados en la
reparación de errores posterior a la
replicación (RER).
Del 15 al 20% de los cánceres se
desarrollan por esta vía.
Está asociado a una mejor expectativa de
vida y una mejor respuesta al tratamiento.
(Hemminki et al. 2000, Gryfe et al. 2000, Robbins and Itzkowitz 2002)

74. SISTEMA DE REPARACION DEL
ADN
ATP
ADP
hMutL α
hMutS α

75. SISTEMA DE REPARACION DEL
ADN

76. MLH1, MSH2
V EPITELIO PMS1, PMS2,
I NORMAL MSH3 O GTBP,
A 6 POLIMERASA
M TGFβ-R2, BAX
Tef4, IGF2R, E2F4
U Fenotipo
MUTACIONES
T Hipermutable
FRAME-SHIFT
A
D
O RER+
R
A
Robbins and Itzkowitz 2002

77. DIAGNÓSTICO MOLECULAR
VIA MUTADORA
Cáncer de Colon
El 15 – 20 % del total por esta vía y del
heredado (S. de Lynch) 90 – 95%
Genes hMSH1 y hMSH2
Proteínas forman parte del complejo
de enzimas reparadoras de errores
posteriores a la replicación. (RER)
Gen hMSH2

78. INESTABILIDAD DE
MICROSATELITES
Producida por deleciones o inserciones de
nucleótidos, debido a eventos consecutivos
de slippage de la ADN polimerasa que no son
corregidos por los complejos enzimáticos
encargados de la reparación.
Se inducen mutaciones que se observan
como variaciones en el tamaño de las
regiones microsatélites (STR’s).
El cambio en el tamaño de las regiones
microsatélites se conoce como fenotipo de
Inestabilidad de microsatélites.
(Shibata et al. 1994, Hoang et al. 1997, Perucho 1998, Zhang et al. 2001)

79. REGIONES DEL ADN
85-90%
ADN
p Medianamente
repetitivas
Altamente
Repetitivas
q
10-15%
De secuencia
única (genes)

80. REGIONES ALTAMENTE
REPETITIVAS
SHORT TANDEM REPEATS (STR’s)
Miles distribuidos a lo largo del genoma en
las regiones de heterocromatina.
Formados por una unidad de repetición de
1 a 7 nucleótidos repetidos unos tras de otro.
De acuerdo con el numero de veces que se
presente la repetición, se asignan los alelos.

81. MICROSATELITES UTILIZADOS PARA
DETECTAR INESTABILIDAD EN CANCER
STR’s Gen Secuencia Tamaño
BAT-26 hMSH2 (A)n 116
D175261 p53 (CA)n 128
D3S1283 hMLH1 (CA)n 149
D2S123 hMSH2 (CA)n 210
D3S1611 hMLH1 (CA)n 263

82. BAT-26
Es un STR de una unidad de repetición
(A)26, ubicado en el brazo p del
cromosoma 2, dentro del gen hMSH2 en
el intrón 5.
...CAGGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGGGTTAAA…
BAT 26
GEN MSH2
Parsons et al. 1995, Bocker et al. 1997, Morifuji et al. 2003, Chai et al. 2004

83. BAT-26
• Es un marcador monomórfico
• Posee una especificidad > 95%
• Su inestabilidad se asocia con la pérdida
de la función de los genes hMLH1 y hMSH2
Parsons et al. 1995, Bocker et al. 1997, Morifuji et al. 2003, Chai et al. 2004.

84. METODOLOGIA

85. MONTAJE EN EL EQUIPO ABI
MUESTRA MUESTRA
REACTIVOS DE DE
SANGRE BIOPSIA
FORMAMIDA 12 l 12 l
TAMRA 500 0.6 l 0.6 l
AMPLIFICADO 0.75 l 1.5 l
TOTAL 13.35 l 14.1 l

86. ELECTROFEROGRAMAS DEL ABI
PRISM 310
Eje Y: Intensidad de la fluorescencia (uf)
Eje X: Tamaño del fragmento en pares de bases (pb)

87. ANALISIS DE LA TIPIFICACION
FENOTIPO ESTABLE (IMI-)
C+: Control Positivo
SG035: Muestra de Células Normales (Sangre)
T035: Muestra de Células Tumorales (Biopsia)

88. ANALISIS DE LA TIPIFICACION
FENOTIPO INESTABLE (IMI+)
C+: Control Positivo
SG003: Muestra de Células Normales (Sangre)
TG003: Muestra de Células Tumorales (Biopsia)

89. INESTABILIDAD EN BAT-26
ELECTROFEROGRAMA DEL MARCADOR BAT 26
CORRIDO EN ABI PRISM 310

90. The catalogue of somatic mutations in COLO-829
Nature 463, 191-196 (14 January 2010) | doi:10.1038/nature08658;

91. Se muestran en todo el anillo exterior y se orientan pter-qter en
sentido horario con centrómeros indican en rojo.
Otras pistas contienen alteraciones somáticas (de fuera hacia
dentro): validado inserciones (luz-rectángulos verdes); validado
supresiones (rectángulos de color verde oscuro); heterocigotos
(barras de luz de color naranja) y homocigotos (barras de color
naranja oscuro) sustituciones se muestra por la densidad por 10
pares de bases.
Sustituciones de codificación (cuadrados de colores: gris en silencio,
sin sentido, de color morado, un sinsentido en el sitio de empalme
en rojo y negro), el número de copias (líneas azules), las regiones
de LOH (líneas rojas); validado reordenamientos intracromosomal
(líneas verdes); validado intercromosómicos reordenamientos (línea
morada).

92. CONCLUSIONES
Desde finales de la década de los noventa se ha
venido incrementando el uso de pruebas
genéticas moleculares como parte del
diagnóstico, pronóstico y monitoreo de varios
tipos de cánceres.
Actualmente existe además un gran interés por
la identificación y detección de mutaciones
heredadas o adquiridas en genes que causan
susceptibilidad o predisposición al cáncer, como
una herramienta valiosa en la prevención y
detección temprana de esta patología.

93. CONCLUSIONES
De acuerdo con la vía genética por la
cual se haya desarrollado el tumor, se
establecen patrones distintos de
evolución y pronóstico de la enfermedad,
pues cada una de estas vías genera
diferencias en el fenotipo y
comportamiento del tumor y por tanto
determina la necesidad de implementar
técnicas de diagnóstico específicas para
cada una de ellas.

94. CONCLUSIONES
Los cánceres generados a partir de la vía
mutadora han sido relacionados con
predisposición heredada al cáncer en algunos
pacientes, estadío tumoral bajo y un pronóstico
favorable para el paciente.
Los tumores que presentan la vía genética
supresora en general son más agresivos; de ahí,
la importancia del estudio genético en estos
tumores, como ayuda en la prevención,
diagnóstico, pronóstico y decisión sobre el
tratamiento.