Técnicas inmunológicas: ELISA paso a paso
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- 2. ¿Qué es un ELISA? ELISA, de las siglas de Enzime linked ImmunoadSorbent Assay. La técnica utiliza Acs marcados con una enzima para poder visualizar la reacción Ag- Ac. La técnica se utiliza tanto para la determinación de Ags como de Acs. Seguidamente, se agrega un sustrato, que, al reaccionar con la enzima del anticuerpo, produce un cambio de color en la muestra.
- 3. Tipos de muestras Sobrenadante de cultivo Lisados celulares Extractos de tejidos Suero/Plasma Fluidos corporales (saliva, orina) Alimentos (leche, aceite)
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- 11. Ventajas y desventajas Desventajas ● Positividad vs infección activa. ● Dificultad de detección en pacientes inmunodeficientes. ● Cte de afinidad Ag-Ac varía según las condiciones. ● Reactividad cruzada, Ags similares.
- 13. ¡Muchas gracias!
- 14. Bibliografía • ELISA. (2021). Ehu.eus. http://www.ehu.eus/immunologia/elisa.php • The ELISA Guidebook. (2021). The ELISA Guidebook - Second Edition | John R. Crowther | Springer. Springer.com. https://www.springer.com/gp/book/9781603272537 • ELISA. (2015). ELISA - Methods and Protocols | Robert Hnasko | Springer. Springer.com. https://www.springer.com/gp/book/9781493927418 • Abyntek. (2017, June). Preparación de muestras para ELISA - Abyntek Biopharma. Abyntek Biopharma. https://www.abyntek.com/preparacion-de-muestras-para-elisa/
Notas del editor
- ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas La enzima de los acs suele ser una peroxidasa que produce un cambio de color en el substrato colocado en una solución
- Explicar norma general: Dilución al 50% con el buffer. Concentración mínima de proteína en los extractos de 1mg/mL. Se centrifuga y se utiliza el sobrenadante, en caso de conservación a bajas °T (-4, -8 periodo inferior a 48 hs, -20°C inferior a un mes y hasta -80° C por periodos de hasta 6 meses) Para suero se deja la sangre en reposo 30’ y se centrifuga, se separan los fact de coagulación, fibrinógenos, en cambio, para plasma al tener anticoagulante el tubo y al centrifugar se obtienen también factores de coagulación, fibrinógenos
- Método directo detección de ags Nico
- Nico
- Indirecto: detecta acs (VIH) Directo, Sandiwch y competitivo detecta ags. Nico
- Fundamentalmente en técnicas de diagnósticos Confirmación de patología: HIV (método indirecto se detecta acs) Respuestas inmunes: Seguimiento de vacunas: Respuesta Humoral y Celular Alimentación: Presencia de alergenos, toxinas Ambientales: Estudio de microorganismos del aire aplicaciones biotecnológicas, epigenética Antivenenos: Pruebas de potencia de antivenenos (Se prueba antivenenos provenientes de equinos, prueba de sueros con anticuerpos poder de neutralización)
- Nico
- Nico
- Nico
- Maxi Ventajas: flexibilidad, los reactivos se pueden usar en diferentes combinaciones. Se requiere poco equipamento placa de microtitulación y pipetas (relativamente barato). Rendidor hasta 96 muestras por placas. Muy sensible (amplificación catalizada por enzima) lo que hace ideal para los diagnósticos. Es posible cuantificar ya sea por lectura a simple vista, espectrofotómetro. Limitaciones: Principalmente cuando se quiere detectar acs. Positividad vs infección activa depende del ac que se esté evaluado puede confundirse un caso activo con uno que ya superó la enfermedad. Dificultad en la detección de acs en personas inmunodeficientes, en periodo de ventanas o infectados por cepas desconocidas. La cte de afinidad ag-ac varia según las condiciones de pH, °T, salinidad. Reactividad cruzada secuencias de aa conservadas evolutivamente en los ags
- Nico