3. Realizamos una cromatografía en columna con el fin de
separar una mezcla de colorantes: azul de metileno y rojo de
metilo.
Utilizamos este método de separación porque aprovecha la
diferencia de polaridad entre estas sustancias.
Azul de metileno: polar
Rojo de metilo: no polar
4. Para seleccionar el mejor eluyente, en primer lugar realizamos cuatro
pruebas de cromatografía en placas de gel de sílice.
Con un capilar angostado se colocó
una gota de muestra en cuatro
placas de gel de sílice.
5. Se prepararon cuatro vasos de
precipitado que contenían
cuatro mililitros de: metanol,
diclorometano, mezcla 3:1
diclorometano-metanol y mezcla
30:1 de diclorometano-metanol.
Luego se colocó una placa
de silicagel en cada uno de
los vasos de precipitado.
6. Se retiraron las placas
cuando el eluyente hubo
alcanzado el otro extremo
de la placa.
La elección del eluyente
apropiado estriba en su
capacidad para arrastrar
ambos componentes en
distinta proporción.
Puede observarse que sólo
en la placa 3 ambos
componentes se
desplazaron, razón por la
cual fue elegida como
eluyente la mezcla 3:1
diclorometano-metanol.
Diclorometano Metanol 3:1 30:1
7. Cromatografía en columna
Materiales: bureta, soporte universal, agarradera para bureta, tubos de
ensayo, embudo, vaso de precipitados, algodón, pipeta, perita de
goma, silicagel.
Reactivos: muestra (mezcla rojo de metilo y azul de metileno), mezcla
3:1 diclorometano-metanol, ácido acético.
8. Se armó el dispositivo de la foto.
Con ayuda de una vara de vidrio se colocó un pequeño
pedazo de algodón en el fondo de la bureta.
Usando un embudo se introdujo en la bureta una
cantidad de silicagel medida al ras con una tapa de
gaseosa.
Luego se colocó otro pequeño pedazo de algodón sobre
la silicagel.
Para que la silicagel se compactara y no se formasen
canales se le dieron algunos golpecitos a la pared de la
bureta.
Se abrió el robinete de la bureta y se vertió el eluyente
hasta humedecer totalmente la silicagel.
9. Usando una pipeta se sembraron
0,5 ml de muestra encima del
algodón y la silicagel, como se ve en
la foto.
10. Usando un embudo
se vertió
gradualmente el
eluyente (mezcla 3:1
diclorometano-metanol)
cuidando
que nunca se seque la
silicagel.
11. A medida que la muestra
bajaba por la bureta sus
componentes se separaban.
En un Erlenmeyer se recogió
la porción que correspondía
al rojo de metilo.
12. Con el objetivo de evitar
que los componentes de la
muestra volvieran a
mezclarse, se recogió una
porción intermedia en un
tubo de ensayos.
13. Para acelerar el descenso del azul
de metileno se agregó al eluyente
unos pocos mililitros de ácido
acético.
La elución continuó hasta que la
silicagel quedó limpia.
15. Se realizaron pruebas
cromatográficas en placa de
cada componente
comparándolo con un
patrón, Azul de Metileno y
Rojo de Metilo.
16. No se observan
diferencias en el Rf de
cada componente con
respecto al Rf del
patrón, por lo cual
podemos decir que se
trata de la misma
sustancia.
Puede verse que cada
uno de los
componentes es una
sustancia pura porque
no hay separación en el
arrastre producido por
el eluyente
Rf patrón = 3.5cm/3.7cm = 0.95
Rf muestra = 3.5cm/3.7cm = 0.95
Rf patrón = 3.6cm/3.7cm = 0.97
Rf muestra = 3.6cm/3.7cm = 0.97