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INSTITUTO TECNOLÒGICO SUPERIOR EN EL ESTADO DE CAMPECHE
Bioquimica I , tercer semestre periodo septiembre 2009 a enero de 2010
Práctica de laboratorio no.. 2. Identificación o reconocimientos de glúcidos
reductores mediante la prueba de Fehling. Los que vamos a analizar son:
glucosa, lactosa , sacarosa y almidón.
Objetivo
Que el alumno conozca comprenda y pueda identificar glúcidos y la hidrólisis
de del enlace de un disacárido
Introducción
Los glúcidos, también conocidos como azúcares, sacáridos, carbohidratos o
hidratos de carbono, constituyen el grupo de biomoléculas más abundantes
sobre la superficie terrestre y representan los principales componentes de tipo
energético-nutricional. Estas moléculas responden a la composición genérica
Cn (H2O)n, con una relación entre H y O que le ha valido el término de
carbohidrato.
Desde el punto de vista químico, los glúcidos son polihidroxialdehídos o
polihidroxicetonas, esto es, alcoholes polivalentes (polialcoholes) que contienen
un grupo carbonilo aldehídico (si lo porta el carbono del extremo) o cetónico (si
lo porta un carbono interno).
Entre las propiedades físicas destaca la de su poder edulcorante y el desviar,
como después analizaremos, la luz polarizada en el seno de las soluciones.
Los monosacáridos y la mayoría de los disacáridos poseen poder reductor, que
deben al grupo carbonilo que tienen en su molécula. Este carácter reductor
puede ponerse de manifiesto por medio de una reacción redox llevada a cabo
entre ellos y el sulfato de Cobre (II). Las soluciones de esta sal tienen color
azul. Tras la reacción con el glúcidos reductor se forma óxido de Cobre (I) de
color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido la
citada reacción y que, por lo tanto, el glúcidos presente es reductor.
Sus funciones biológicas principales son:
* Reserva energética: hígado, musculatura...
* Papel estructural o plástica en el mundo vegetal y animal
* Fuente inmediata de energía para la inmensa mayoría de las células
* Suministradores de átomos para formar otras moléculas en rutas
anapletóricas
1. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa, maltosa,
lactosa fructosa o sacarosa (según indique el profesor).
2. Añadir 1ml de solución de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling
B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reacción)
3. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.
4. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será
negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.
5. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas
con las distintas muestras de glúcidos
Materiales y métodos:
Materiales biológicos para muestras de glúcidos
Pasta cocidas, arroz,
Leches , leche con chocolate
Frutas. Manzana, plátano, naranjas o mandarinas
Jugos de naranja de caja
Harina
Papa, camote
1. Reacción de Fehling:
o Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una
cantidad de 3 cc.)
o Añadir 1 cc. de Fehling A y 1 cc. de Fehling B. El líquido del tubo
de ensayo adquirirá un fuerte color azul.
o Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de
Laboratorio.
o La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-
ladrillo.
o La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a
un tono azul-verdoso.
Fundamento: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y
de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el glúcido que
se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del
sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo-
anaranjado.
2. Reacción del Lugol: Este método se usa para identificar polisacáridos.
El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolución
de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta característico.
o Poner en un tubo de ensayo unos 3 cc. del glúcido a investigar.
o Añadir unas gotas de lugol.
o Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta,
la reacción es positiva.
Fundamento: La coloración producida por el Lugol se debe a que
el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón.
No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se
forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades
físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta.
Basándote en esta característica te voy a proponer un pequeño
juego de magia que te va a sorprender:
 Una vez que tengas el tubo de ensayo con el almidón y el
lugol, que te habrá dado una coloración violeta, calienta el
tubo a la llama y déjalo enfriar. !Sorprendido!.
 Vuelve a calentar y enfriar cuantas veces quieras.... ?
Dónde está el color?.
• Poner las muestras de glúcidos en los tubos de ensayo. Pueden
prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Figura 1.
• Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio de página.
Figura 2.
• Después de calentar observar los resultados. Figura 3.
• Estos resultados nos indican que los azúcares: glucosa, maltosa y
lactosa tienen carácter reductor.
Figura 1
Figura 2 Figura 3
Como se veía en la experiencia 1 la sacarosa daba la reacción de Fehling
negativa,(Figura 4)por no presentar grupos hemiacetálicos libres.
Ahora bien, en presencia del ácido clorhídrico (HCl)y en caliente, la sacarosa
se hidroliza descomponiéndose en los dos monosacáridos que la forman
(glucosa y fructosa).
Técnica: Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido
clorhídrico al 10%. Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos.
Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. Observa el resultado (Figura 5). La
reacción positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O-
glucosídico de la sacarosa. ( Se recomienda antes de aplicar la reacción de
Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale mejor en un medio que no
sea ácido.)
Figura 4
Figura 5
El polisacárido almidón se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido
no a una reacción química, sino a la fijación del yodo en la superficie de la
molécula del almidón, fijación que sólo tiene lugar en frío.
Figura 6
Figura 7
Técnica:
• Colocar en una gradilla muestras de distintos glúcidos. Figura 6
• Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo.
• Observar los resultados. Figura 7.
Cuestionario:
1- explicar para cada tipo de glúcidos que reacción se lleva a cabo
2. ¿por que los disacáridos no dan pruebas reductoras positivas?
3. ¿ todos los glúcidos son dulces?
4. Todos los azucares son fáciles de metabolizar?
5. ¿El almidón se reduce si es si y ¿por que?
Bibliografia
Muñoz E (1988): Propiedades químicas de los azúcares. En Lozano JA, Tudela
J (eds): Prácticas de bioquímica. Experimentación y Simulación, 1ª Ed. Editorial
Síntesis (Madrid, España), pp. 65 – 70.
McKee T, Mckee JR (2003): Hidratos de carbono. En Mckee T, McKee JR
(eds): Bioquímica. La base molecular de la vida, 3ª Ed. Editorial McGraw-Hill
Interamericana (Madrid, España), pp. 200 – 233.
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J (eds): Prácticas de bioquímica. Experimentación y Simulación, 1ª Ed. Editorial
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McKee T, Mckee JR (2003): Hidratos de carbono. En Mckee T, McKee JR
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  • 1. INSTITUTO TECNOLÒGICO SUPERIOR EN EL ESTADO DE CAMPECHE Bioquimica I , tercer semestre periodo septiembre 2009 a enero de 2010 Práctica de laboratorio no.. 2. Identificación o reconocimientos de glúcidos reductores mediante la prueba de Fehling. Los que vamos a analizar son: glucosa, lactosa , sacarosa y almidón. Objetivo Que el alumno conozca comprenda y pueda identificar glúcidos y la hidrólisis de del enlace de un disacárido Introducción Los glúcidos, también conocidos como azúcares, sacáridos, carbohidratos o hidratos de carbono, constituyen el grupo de biomoléculas más abundantes sobre la superficie terrestre y representan los principales componentes de tipo energético-nutricional. Estas moléculas responden a la composición genérica Cn (H2O)n, con una relación entre H y O que le ha valido el término de carbohidrato. Desde el punto de vista químico, los glúcidos son polihidroxialdehídos o polihidroxicetonas, esto es, alcoholes polivalentes (polialcoholes) que contienen un grupo carbonilo aldehídico (si lo porta el carbono del extremo) o cetónico (si lo porta un carbono interno). Entre las propiedades físicas destaca la de su poder edulcorante y el desviar, como después analizaremos, la luz polarizada en el seno de las soluciones. Los monosacáridos y la mayoría de los disacáridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molécula. Este carácter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reacción redox llevada a cabo entre ellos y el sulfato de Cobre (II). Las soluciones de esta sal tienen color azul. Tras la reacción con el glúcidos reductor se forma óxido de Cobre (I) de color rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido la citada reacción y que, por lo tanto, el glúcidos presente es reductor. Sus funciones biológicas principales son: * Reserva energética: hígado, musculatura... * Papel estructural o plástica en el mundo vegetal y animal * Fuente inmediata de energía para la inmensa mayoría de las células * Suministradores de átomos para formar otras moléculas en rutas anapletóricas 1. Poner en los tubos de ensayo 3ml de la solución de glucosa, maltosa, lactosa fructosa o sacarosa (según indique el profesor). 2. Añadir 1ml de solución de Fehling A (contiene CuSO4) y 1ml de Fehling B (lleva NaOH para alcalinizar el medio y permitir la reacción) 3. Calentar los tubos a la llama del mechero hasta que hiervan.
  • 2. 4. La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo y será negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso. 5. Observar y anotar los resultados de los diferentes grupos de prácticas con las distintas muestras de glúcidos Materiales y métodos: Materiales biológicos para muestras de glúcidos Pasta cocidas, arroz, Leches , leche con chocolate Frutas. Manzana, plátano, naranjas o mandarinas Jugos de naranja de caja Harina Papa, camote 1. Reacción de Fehling: o Tomar la muestra que se quiera analizar (normalmente una cantidad de 3 cc.) o Añadir 1 cc. de Fehling A y 1 cc. de Fehling B. El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul. o Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de Laboratorio. o La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo- ladrillo. o La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azul-verdoso. Fundamento: Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos y de la mayoría de los disacáridos (excepto la sacarosa). Si el glúcido que se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo- anaranjado.
  • 3. 2. Reacción del Lugol: Este método se usa para identificar polisacáridos. El almidón en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolución de yodo y yoduro potásico) toma un color azul-violeta característico. o Poner en un tubo de ensayo unos 3 cc. del glúcido a investigar. o Añadir unas gotas de lugol. o Si la disolución del tubo de ensayo se torna de color azul-violeta, la reacción es positiva. Fundamento: La coloración producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula de almidón. No es por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul violeta. Basándote en esta característica te voy a proponer un pequeño juego de magia que te va a sorprender:  Una vez que tengas el tubo de ensayo con el almidón y el lugol, que te habrá dado una coloración violeta, calienta el tubo a la llama y déjalo enfriar. !Sorprendido!.  Vuelve a calentar y enfriar cuantas veces quieras.... ? Dónde está el color?.
  • 4. • Poner las muestras de glúcidos en los tubos de ensayo. Pueden prepararse soluciones al 1% aproximadamente. Figura 1. • Realizar la Prueba de Fehling como se indica al principio de página. Figura 2. • Después de calentar observar los resultados. Figura 3. • Estos resultados nos indican que los azúcares: glucosa, maltosa y lactosa tienen carácter reductor. Figura 1 Figura 2 Figura 3 Como se veía en la experiencia 1 la sacarosa daba la reacción de Fehling negativa,(Figura 4)por no presentar grupos hemiacetálicos libres. Ahora bien, en presencia del ácido clorhídrico (HCl)y en caliente, la sacarosa se hidroliza descomponiéndose en los dos monosacáridos que la forman (glucosa y fructosa). Técnica: Tomar una muestra de sacarosa y añadir unas 10 gotas de ácido clorhídrico al 10%. Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos. Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling. Observa el resultado (Figura 5). La reacción positiva nos dice que hemos conseguido romper el enlace O- glucosídico de la sacarosa. ( Se recomienda antes de aplicar la reacción de Fehling, neutralizar con bicarbonato, Fehling sale mejor en un medio que no sea ácido.)
  • 5. Figura 4 Figura 5 El polisacárido almidón se colorea de azul-violeta en presencia de yodo, debido no a una reacción química, sino a la fijación del yodo en la superficie de la molécula del almidón, fijación que sólo tiene lugar en frío. Figura 6 Figura 7 Técnica: • Colocar en una gradilla muestras de distintos glúcidos. Figura 6 • Añadir 5 gotas de Lugol en cada uno de los tubos de ensayo. • Observar los resultados. Figura 7. Cuestionario:
  • 6. 1- explicar para cada tipo de glúcidos que reacción se lleva a cabo 2. ¿por que los disacáridos no dan pruebas reductoras positivas? 3. ¿ todos los glúcidos son dulces? 4. Todos los azucares son fáciles de metabolizar? 5. ¿El almidón se reduce si es si y ¿por que? Bibliografia Muñoz E (1988): Propiedades químicas de los azúcares. En Lozano JA, Tudela J (eds): Prácticas de bioquímica. Experimentación y Simulación, 1ª Ed. Editorial Síntesis (Madrid, España), pp. 65 – 70. McKee T, Mckee JR (2003): Hidratos de carbono. En Mckee T, McKee JR (eds): Bioquímica. La base molecular de la vida, 3ª Ed. Editorial McGraw-Hill Interamericana (Madrid, España), pp. 200 – 233.
  • 7. 1- explicar para cada tipo de glúcidos que reacción se lleva a cabo 2. ¿por que los disacáridos no dan pruebas reductoras positivas? 3. ¿ todos los glúcidos son dulces? 4. Todos los azucares son fáciles de metabolizar? 5. ¿El almidón se reduce si es si y ¿por que? Bibliografia Muñoz E (1988): Propiedades químicas de los azúcares. En Lozano JA, Tudela J (eds): Prácticas de bioquímica. Experimentación y Simulación, 1ª Ed. Editorial Síntesis (Madrid, España), pp. 65 – 70. McKee T, Mckee JR (2003): Hidratos de carbono. En Mckee T, McKee JR (eds): Bioquímica. La base molecular de la vida, 3ª Ed. Editorial McGraw-Hill Interamericana (Madrid, España), pp. 200 – 233.