Este documento resume los procesos de activación, diferenciación y maduración de los linfocitos B. La respuesta inmune mediada por linfocitos B implica la inducción de anticuerpos a través de la cooperación T-B, que conduce a la formación de centros germinales donde ocurre la hipermutación somática y el cambio de isotipo. Esto genera células plasmáticas de larga vida y células B de memoria. Los linfocitos B también pueden diferenciarse a células plasmáticas a través de una respuesta extra

1. Inmunidad
mediada por
linfocitos B:
inducción de
anticuerpos
AdrianaGruppi
agruppi@fcq.unc.edu.ar

2. Distribución de
linfocitos B en OLS
CooperaciónT-B :
formación de CG
Respuestafolicular
Los linfocitos B:
funciones
Células de memoria
Células plasmáticas:
longevidad y ubicación
Respuesta
extrafolicular

3. B lymphocytes: how theydevelopandfunction. LeBien TW, Tedder TF
Blood. 2008 Sep 1;112(5):1570-80.
• Rolesencial en la
InmunidadHumoral:
PRODUCTORESDE
ANTICUERPOS.
• Presentación
Antigénica.
• Producciónde
Citoquinas.
• Capacidad
regulatoria.
LosLinfocitosB:presentaciónensociedad

4. Max Cooper in Robert Good's lab at the
University of Minnesota in 1960
50 años de los
linfocitos B: en
enero de1965MaxDale
Cooper,Raymond
Peterson y Robert Good
publicaronunartículo en
larevista “Nature” que
revelaba la existencia de
dos tipos delinfocitos.
Este descubrimiento
cambióelcurso de la
inmunologíamoderna
Immunology: Fifty years
of B lymphocytes
Alexander D. Gitlin and
MichelC.NATURE.COM

5. Distribuciónanatómica
Thewho, how andwhere of antigen presentation to B cells. Batista FC, HarwoodNE Nat Rev Immunol. 2009 Jan;9(1):15-27.
PALS
ZonaT
Folículos
ZonaB
ZonaMarginal

6. DistribuciónanatómicaenBazo
By Xiaoming Wang andJason Cyster. HowardHughes Medical Institute andDepartment ofMicrobiology and Immunology, UCSF
Immunity. Cell Press

7. DistribuciónanatómicaenBazo
By DavidR. Withers, University ofBirmingham
Immunity. Cell Press

8. Cynthia L. Willard-Mack Toxicol Pathol 2006;34:409-424
Copyright © by Society of Toxicologic Pathology
DistribuciónanatómicadelinfocitosBenganglios

9. DistribuciónanatómicadelinfocitosBenganglios
Source:http://what-when-how.com/acp-medicine/organs-and-cells-of-the-immune-system-part-1/

10. ¿Como se generan anticuerpos específicos para un
antígenos proteico?

11. LINFOCITOS BFOLICULARES - RESPUESTA T-DEPENDIENTE
• Los linfocitos B foliculares o convencionales
responden a antígenos T dependientes.
• Son antígenos de origen proteico que son
reconocidos a través del BCR (primera señal).
• Además de la señal a través del BCR se
requiere una segunda señal aportada por los
LiT cooperadores específicos.
• Las respuestas T dependientes se
caracterizan por la formación de centros
germinales.
Immunobiology. Janeway

12. Cooperación T-B y formación del Centro Germinal
1. Ubicaciónanatómica pre contactoconel Ag.
•CélulasT naïve se ubican en la
vaina periarteriolar (PALS) en los
ganglioslinfáticos siguiendo un
gradiente de quimiocinas CCL19y
CCL21,que se unen a CCR7en su
superficie.
•Células B naïve se localizan en
folículos, organizadospor la
quimiocina CXCL13que se une a
CXCR5en su superficie.
Follicular helper Tcells in immunity and systemic autoimmunity. CraftJ.
Nat Rev Rheumatol 8, 337-347 (June 2012)

13. 2. Encuentro conelAg.AcercamientoT-B.
Follicular helper Tcells in immunity and systemic autoimmunity. CraftJ.
Nat Rev Rheumatol 8, 337-347 (June 2012)
•La célula B reconoce a través de
su BCRel Ag (primera señal de
activación). Procesa el Ag y lo
presenta en el contexto MHCII.
Upregula, además, CCR7que le
permite migraral bordeT-B.
•Lascélulas dendríticas presentan
Ags ycoestimulan a la célula T. La
célula Tadquiere fenotipo de pre-
Tfh,upregula CXCR5, downregula
CCR7y migraal bordeT-B.
•Las células Ty B afines parael Ag
contactan entre sí, se produce la
segunda señal de activación.
•Se producen dos interacciones
claves: CD40-CD40LeICOS-
ICOSL.Estoconlleva al ingreso del
ciclo celular por partede lacélula
B y aldesarrollo de la Tfh.

14. •El resultado de la interacción T-B
puede originarmúltiples destinos:
-Focos extrafoliculares que
contienen plasmoblastos decorta
vida productores de anticuerpos
(la mayoría IgM)
-Centrosgerminales en el interior
del folículo, donde la célula B
proliferará,hará Switch de Isotipo
e Hipermutación Somática
3. Diferenciación ydestino de las células B.
Follicular helper Tcells in immunity and systemic autoimmunity. CraftJ.
Nat Rev Rheumatol 8, 337-347 (June 2012)

15. 4. FormacióndelCentro Germinal.
Follicular helper Tcells in immunity and systemic autoimmunity. CraftJ.
Nat Rev Rheumatol 8, 337-347 (June 2012)
•En los CG,los Tfh promueven la
maduración dela célula B,
inducen Hipermutación Somática
y Switch deIsotipo (ambas
dependientes de AID). Se
seleccionan los clones con alta
afinidad por el Ag y nula
autorreactividad
•Hipermutación Somática: altera
el dominio variable del Ac.
•Switch de Isotipo: reemplaza la
porción constante de una cadena
pesada por otraperteneciente a
una clase diferente.
•Tanto las células B de CG, como
lasTfh ´dependen de la expresión
del factor de transcripción Bcl-6 y
de la citoquina IL-21.

16. •Lascélulas B deCG que
sobrevivieron al proceso de
selección se diferencian a células
B de memoria o plasmoblastos,
que abandonan el centro germinal
paracompletar su diferenciación a
Célula Plasmática de largavida
productoras deinmunoglobulinas
de alta afinidad.
•Las células plasmáticas delarga
vida se alojan en nichos
particulares limitados, ricosen
factores de sobrevida (BAFF,
APRIL).
5. Generaciónde Linfocitos Bde memoria yCélulas Plasmáticas
Follicular helper Tcells in immunity and systemic autoimmunity. CraftJ.
Nat Rev Rheumatol 8, 337-347 (June 2012)

17. Germinal centers. Victora GD; Nussenzweig MC.
Annu Rev Immunol. 2012;30:429-57.
Centroblastos
Centrocitos
Centros Germinales: Poblaciones celulares

18. Molecular programming of Bcell memory. McHeyzer-Williams M1,Okitsu S,Wang N,McHeyzer-Williams L.
Nat Rev Immunol. 2011 Dec 9;12(1):24-34.
Centros Germinales: Eventos principales

19. Bcl-6 controlled TFH polarization andmemory: the known unknowns. QiH, Liu D, MaW, Wang Y, Yan H.
CurrOpin Immunol. 2014 Jun;28:34-41.
Centros Germinales: InteraccionesT-B

20. - Mediado por AID
- Recombinación no homóloga entre
regiones switch de los genes de Igs
- Se mantiene la especificidad y se
cambia el region constante de la Ig 
cambio en la función efectora del Ac
- Regulado por LiTFH a través de
moléculas de superficie y citoquinas
Stavnezer et al. Ann Rev Immunol. 2008
Cambio de Isotipo de Ig (CSR)

21. Centros Germinales: Citoquinas que influyenen el isotipo de Igs

22. REGULACIONTRANSCRIPCIONAL DELCENTRO GERMINAL
BCL-6 : regulador crítico del centro germinal
Klein y Dalla-Favera. Nat Rev Immunol. 2008

23. REGULACIONTRANSCRIPCIONAL DELCENTRO GERMINAL
BLIMP-1 : regulador crítico de la diferenciación terminal
Shapiro-Shelef y Calame. Nat Rev Immunol. 2005

24. CENTRO GERMINAL.PROCESOS BIOLOGICOS
- Mediado por la afinidad del BCR luego de SHM
- Los centrocitos con nuevos BCR interactúan con FDC y LiTFH durante los procesos de selección.
Rol controversial de los IC depositados en FDC
- Los centrocitos que no reconocen el Ag especifico mueren por apoptosis y son eliminados por
macrófagos (“tingible bodies“)
Procesos de Selección
Vinuesa et al. Immunol Rev. 2010

25. ¿Qué dictamina la elección de una de estas dos vías de diferenciación del LiB?
Modificado de Vinuesa et al. Nat Rev Immunol.2005
Naive B cell
RESPUESTA EXTRAFOLICULAR:Sepueden producircelulas plasmaticasextra CG

26. RESPUESTA EXTRAFOLICULAR
1. LiB activados y en expansion migran del borde
B/T y hacia los canales de unión con la pulpa
roja en bazo y hacia los cordones medulares en
ganglio
2. En los focos EF se diferencian rápidamente a CP
de corta vida
3. Se observa cambio de isotipo de Igs (secretan
IgM e IgG1) pero no hipermutación somática
(especificidad de Igs codificadas en linea
germinal)
Producción rápida de Acs que actúan como
primer línea de defensa
RESPUESTA FOLICULAR
1. LiB activados migran al folículo y
proliferan desplazando a LiB vírgenes,
generando una estructura especializada
denominada centro germinal (CG).
2. En CG los LiB se diferencian a CP de
larga vida y LiB de memoria
3. Se observa cambio de isotipo de Igs e
hipermutación somática con selección de
LiB a través de la interaccion con FDC y
TFH cells
Producción más lenta de Acs de alta
afinidad con generación de memoria
inmunológica

27. La fuerza/intensidad del reconocimiento antigénico determina si se produce una respuesta
extrafolicular o una reacción de centro germinal.
Benson et al. Curr Op Immunol. 2007
• Avidez de la interacción BCR – Ag
Paus et al. J Exp Med. 2006
O‘Connor et al. J Immunol. 2006
• Nivel de colaboración B/T (señal a través de CD40/CD40L)
Erickson et al. J Clin Invest. 2002
MacLennan et al. Immun Rev.2003
RESPUESTA EXTRAFOLICULARvs FOLICULAR

28. CélulasPlasmáticas
Competence andcompetition: the challenge of becoming a long-lived plasma cell.
Radbruch A,Muehlinghaus G, Luger EO,Inamine A, Smith KG, DörnerT, Hiepe F.
Nat Rev Immunol. 2006 Oct;6(10):741-50.

29. CélulasPlasmáticas
Plasmoblastos Célula Plasmática
Proliferantes NoProliferan
Tienen capacidadmigratoria Notienen capacidadmigratoria
CXCR4+ CXCR4+++
Blimp-1+ Blimp-1+++

30. CélulasPlasmáticas
Competence andcompetition: the challenge of becoming a long-lived plasma cell.
Radbruch A,Muehlinghaus G, Luger EO,Inamine A, Smith KG, DörnerT, Hiepe F.
Nat Rev Immunol. 2006 Oct;6(10):741-50.
Se estableceunacompetenciaentreplasmoblastosrecién llegadosycélulas plasmáticasporlos nichosen
Médula Ósea.El estromaallí, es rico en CXCL12,un quemoatractantedeCXCR4,expresadoaltamenteen las
Células Plasmáticas(CP).
Una vezque unaCP es desplazadadesu nicho,éstano puedevolver a unnicho desobrevida,ymuere.

31. CélulasPlasmáticas
Theestablishment of the plasma cell survival niche in the bonemarrow. ChuVT, Berek C.
Immunol Rev. 2013 Jan;251(1):177-88.
6 días luego de un re-boost, se tiñó
médula ósea con laminin (estroma,
rojo)eIgG (células plasmáticas,verde)
60 días luego de un re-boost, se tiñó
médula ósea con laminin (estroma,
gris) , IgG (células plasmáticas, verde)
y proteína mayor básica (eosinófilos,
rojo).

32. CélulasPlasmáticas
Theestablishment of the plasma cell survival niche in the bonemarrow. ChuVT, Berek C.
Immunol Rev. 2013 Jan;251(1):177-88.
Factores desobrevida paralascélulas plasmáticasysusreceptores.
La supervivencia de los plasmocitos en MO depende de varios factores aportados por el
estroma. Los principales son: BAFF, APRIL, IL-6 y CXCL12. Es necesario, además, que el
plasmocito mantenga Blimp-1.

33. DIFERENCIACIONA CELULA PLASMATICA vsLiBDE MEMORIA
La fuerza/intensidad del reconocimiento antigénico dictamina la vía de diferenciación de los
LiB de CG
Benson et al. Curr Op Immunol. 2007
• Avidez de la interacción BCR – Ag
Phan et al. J Exp Med. 2006
O‘Connor et al. J Immunol. 2006
• Nivel de colaboración B/T (señal a través de CD40/CD40L)
Erickson et al. J Clin Invest. 2002
• Señal a través de los receptores de complemento (CD21/CD35)
Gatto et al. J Exp Med. 2005
• Otros (IL-21, IL-10, BAFF, APRIL, TLR, etc)

34. DIFERENCIACIONA CELULA PLASMATICA vs LiBDE MEMORIA
Centrocitos de mayor afinidad se diferencian preferencialmente a CP

35. CELULAS B DE MEMORIA
• Son producto de centro germinal
• Tienen mayor afinidad por el Ag: hipermutación
somática
•Se diferencian rápidamente a CP
•Son heterogéneas en fenotipo: ausencia de
marcadores específicos
• Localización: zona marginal de bazo (folículos
y órganos periféricos)
• Tienen tiempo de vidas largos, pero no se
conocen completamente las señales de
sobrevida
Características que defienen a las CBM:

36. Conceptos claves
Plasmablastos: célula secretante
de Acs con potencialidad para
proliferar ymovilizarse.
B Folicular: células B maduras
recirculantes que pueblan folículos de
órganos linfáticos secundarios.
Células plasmáticas: estadio
terminal de diferenciación B,
secretante de anticuerpos, sin
capacidad mitótica einmóvil.
Celulas B de memoria: células B que
han contactado con el Ag que expresa
anticuerpos de alta afinidad y
rápidamente se diferencia a célula
plasmática frente a unre-encuentro.
Respuesta TI: Las células B producen Acs
específicos para Ags TI como LPS y bacterias
capsuladas (polisacáridos). No requieren
cooperación T.
Respuesta TD: Las células B producen Acs
específicos para Ags TD como proteínas
microbianas. Involucra linfocitos B foliculares y
requierecooperación de los linfocitos T(CD40L).

37. Conceptos claves
AID: Enzima cytidin deaminasa
que media la HS y el Switch de
isotipo.
Recombinación Somática:
mecanismos de mutación que
tiene su target en la región
variable de los segmentos de
genes de Igs.
Switch de Isotipo: Cambios en el
DNA que codifica la región constante
de las cadenas pesadas de Igs. Origina
isotipos diferentes al IgM: IgG, IgA e
IgE. La decisión sobre cuál isotipo es
generado está fuertemente
influenciado por el medio rico en
citoquinas.
Centros Germinales: estructura linfoide que
surgen en los folículos luego del encuentro con Ags
en contextos TD. Estas estructuras promueven la
expasión clonal B, HS, Switch de Isotipo, seguido
por el desarrollo de células B de memoria y células
plasmáticas de larga vida secretantes de
anticuerpos de alta afinidad.
Linfocitos T Helper Foliculaes (Tfh): Linfocitos T
CD4+ esenciales para la formación y desarrollo de
Centros Germinales. Están implicados en el
desarrollo y selección de clones B en GC. Expresan
CXCR5, ICOS, PD-1 (entre otros) y el factor de
transcripción Bcl-6.Secretan IL-21.

38. Referencias
B lymphocytes: how theydevelopandfunction. LeBien TW, Tedder TF. Blood. 2008 Sep 1;112(5):1570-80.
Marginal zone B cells: virtues of innate-like antibody-producing lymphocytes. Cerutti A, Cols M, Puga I. Nat Rev Immunol. 2013
Feb;13(2):118-32.
Control systems and decision making for antibody production. Goodnow CC, Vinuesa CG, Randall KL, Mackay F, Brink R. Nat
Immunol. 2010 Aug;11(8):681-8.
Germinal center B and follicular helper T cells: siblings, cousins or just good friends? Nutt SL, Tarlinton DM. Nat Immunol.2011
Jun;12(6):472-7.
Germinal centers. Victora GD; Nussenzweig MC.Annu Rev Immunol. 2012;30:429-57.
Follicular helperCD4 Tcells(TFH). CrottyS. Annu Rev Immunol. 2011;29:621-63.
Molecular programming of B cell memory. McHeyzer-Williams M1, Okitsu S, Wang N, McHeyzer-Williams L. Nat Rev Immunol. 2011 Dec
9;12(1):24-34.
Shining a light on germinal center B cells. CysterJG. Cell. 2010 Nov12;143(4):503-5.
Bcl-6 controlled TFH polarization and memory: the known unknowns. Qi H, Liu D, Ma W, Wang Y, Yan H. Curr Opin Immunol. 2014
Jun;28:34-41.
Diversity Among Memory B Cells: Origin, Consequences, andUtility. D Tarlinton,KGood-Jacobson. Science 341, 1205 (2013)
Theestablishment of the plasma cell survival niche in the bonemarrow. ChuVT, Berek C.Immunol Rev. 2013 251(1): 177-88.
Competence andcompetition: the challenge of becoming a long-lived plasma cell. Radbruch A,Muehlinghaus G,Luger EO, Inamine A,
Smith KG,Dörner T,Hiepe F. Nat Rev Immunol. 2006 Oct;6(10):741-50.

39. ¡Gracias por la atención!
CENTRO DE INVESTIGACIONES EN BIOQUÍMICA CLÍNICAE INMUNOLOGÍA (CIBICI-CONICET)
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA, LAB #103
FACULTAD DE CIENCIASQUÍMICAS – UNIVERSIDAD NACIONAL DE CORDOBA.

40. Agradecimiento muy especial a Cristian Beccaria por su
contribución en la confección de esta presentación!!!!.