La presentación describe los tipos de detecciones para las mutaciones, que se usan actualmente en la practica medica.

1. Detección de mutaciones.
 En la actualidad es posible la detección directa mediante un análisis, de los genes
causantes de enfermedades en portadores y personas afectadas.
Hay dos estrategias principales:
Detección
genómica en DNA
propio o familiar.
Marcadores
ligados al locus
de una
enfermedad
DIRECTA INDIRECTA

2. Detección de mutaciones.
Anaya Vazquez, Marco Antonio

3. Detección de mutaciones de forma directa
Para analizar una
muestra en busca
de una mutación
celular se
examinar una
gran cantidad de
DNA.
Un gran
debido que a
genómico hay
1/1100 de prob.
en encontrar la
muestra de
interés.
Solución=
Electroforesis
En gel

4. Transferencia de Southern o de DNA
 La técnica puede ser
usada incluso con tej.
Fibroblastico, liq
amniótico.
Permite el análisis de fragm
de DNA (1M) por enzimas de
restricción.
Capacidad limitada
Deleción, inserción de gran
tamaño.
Una o varias bases de
pequeño tamaño escapan al
análisis.

5. Sondas de oligonucleótidos con
especificidad de alelo.
 La mutación de unas pocas bases, y su
difícil detección, generan camino para este
método.
La sonda es un olig.
especifico, sintetico y
sensible, incluso para una
sola base.
Esta sonda presenta
hibridación= con la base
normal o la mutante.
Al ser tan minúsculo y exacto el análisis
no se debe descartar una mutación en
otro segmento.

6. Transferencia Northern o de RNA
 Analiza el tamaño y la abundancia
de mRNA en una muestra
El análisis busca la abundancia
de un transcrito de interés.
La técnica a sido sustituida en
gran parte por la Reacción en
cadena Polimerasa

7. Reacción en cadena de la Polimerasa
 Es una alternativa a la clonación para generar gran cantidad de secuencias de interés
Esta reproduce el DNA
“Diana” que se
encuentra entre dos
cebadores(olig).
La rápida producción y
amplificación permite
detectar rápidamente las
mutaciones.
Menos
de 1 dia
La PCR es barata,
sencilla, especifica y
rápida para detectar
mutaciones
Puede ser realizada prácticamente
de cualquier tipo de tejido o
célula con pequeñas cantidades

8. Detección de mutaciones en forma indirecta
 Debido a las razones a continuación la detección directa no es posible en todos los casos:
1.- Por una
heterogeneidad
alélica sustancial.
2.- Genes muy
grandes y con
muchos exones que
dificultan la
detección de la
mutacion
3.- Limitaciones
del tiempo, en
particular en el
embarazo.
Diagnostico
prenatal

9. Requisitos para una detección indirecta.
 No se detecta el alelo mutante, sino que se usan marcadores colindantes al locus de la
enfermedad. El método es adecuado si se siguen los siguientes requisitos
Que exista un lig
genético fuerte
mutacion-marcador,
y con ello no exista
una recombinación.
Que la familia sea
“informativa” de la
enfermedad que
produce la
mutacion.
Que no suceda una
recombinación anterior
entre marcador
evaluado y locus de la
enfermedad

10.  La posibilidad de detección se incrementa con el uso de dos marcadores de
ligamento colindantes al locus de la enfermedad.
La probabilidad de error es menor debido a que
ahora son dos los marcadores informativos
colindantes a la enfermedad.
El conocimiento de los marcadores colindantes, es solo una diana mas
para el PROYECTO GENOMA HUMANO.