Este documento proporciona una introducción a la electroforesis. Define la electroforesis como la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico. Explica que las partículas migran hacia el cátodo o ánodo dependiendo de su carga, peso molecular y estructura. También resume los diferentes tipos de electroforesis como la electroforesis de límite móvil, zonal e isoelectroenfoque. Además, describe los diferentes medios de electroforesis como el papel, gel, capilar y otros. Finalmente, ident

1. AGUILAR LISETH
BOHORQUEZ
KEVIN
BOSSIO LAURA
GIRALDO DAVID
6-05-16

2. CONTENIDO
1-Definición de electroforesis
2-Historia de la electroforesis
3-Tipos de electroforesis
4-Medios de electroforesis
5- Factores que afecta la electroforesis
6-Video
7-Bibliografia

3. ¿ QUE ES LA ELECTROFORESIS?
La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de
un campo eléctrico; estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo
(electrodos - y +), en dependencia de una combinación de su carga,
peso molecular y estructura tridimensional.

4. Es usado como método de separación de mezclas complejas de ácidos
nucleicos, proteínas y otras biomoléculas, donde aportan un potente
criterio de pureza, también para determinar otros parámetros como
peso molecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas
de las proteínas.
La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente
proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de
potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de
fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la
resistencia que le ofrece el medio.

5. ¿CÓMO HA DESARROLLADO LA
ELECTROFORESIS?
Tiselius, 1937 Tiselius, 1948
1940- proteínas
grande,
aminoácidos e
iones inorgánicos
Smithies, 1955
Khon,1957
Ornstein y Davis,
1959
Jorgenson y
Lukacs,
principios de los
80

6. TIPOS DE ELECTROFORESIS
LIMITE MÓVIL
En este método la
muestra se coloca en una
solución buffer en un tubo
con forma de U. Se aplica
un campo eléctrico por
medio de electrodos
sumergidos en cada
extremo del tubo. Las
partículas de la muestra
pueden entonces migrar
en relación al campo
eléctrico.

7. ELECTROFORESIS
ZONAL
Es una de las técnicas
más utilizadas en
bioquímica y biología
molecular por su elevada
resolución. Este método
es parecido al de límite
de movilidad dado que
cada componente migra
de acuerdo con su propia
movilidad.

8. ISOELECTROENFOQUE
• El isoelectroenfoque separa componentes usando un gradiente de pH.
• El gradiente va desde un pH bajo en el ánodo hasta un pH alto en el cátodo.
• Cuando se aplica un campo eléctrico la muestra migra según su carga hasta que
encuentra un pH igual a su punto isoeléctrico, donde la carga neta es 0 y en
consecuencia se detiene.
• Cuando todos los componentes se detienen se llega a un estado estacionario.
• Se usan geles como soporte, lo que minimiza la difusión una vez que se llega al
estado estacionario y el campo eléctrico es eliminado.

9. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
En la electroforesis la
muestra debe situarse en
o sobre un medio
soporte, principalmente
para evitar
perturbaciones
mecánicas y corrientes
de convección durante la
separación.
Medios de baja
fricción
Medios de elevada fricción
papel
acetato de
celulosa
- gel de
almidón
- gel de
agarosa
gel de poliacrilamida
gel de
agarosa+poliacrilamid
a
separación
principalmente
por carga
separación por carga, tamaño y
forma

10. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
MEDIO CAPILAR
La muestra se hace pasar
a través de un tubo largo y
de pequeño calibre que
contiene una matriz
reutilizable. La separación
se lleva a cabo según la
relación masa/carga de las
distintas moléculas.

11. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
MEDIO PAPEL
En la electroforesis en papel la
muestra se coloca en un punto
sobre una tira de papel de filtro
o de acetato de celulosa
embebida de buffer. Los
extremos de la tira se
sumergen en reservorios
separados de buffer en los que
se colocan los electrodos.

12. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
MEDIO GEL
• La electroforesis en gel, que se halla entre
los métodos más poderosos y convenientes
para la separación de macromoléculas,
suplantó en gran medida a la electroforesis
en papel.
• Los geles más usados, poliacrilamida y
agarosa, tienen poros de dimensiones
moleculares cuyos tamaños pueden
especificarse.
• Por ello, las separaciones moleculares se
basan en la filtración en geles y en las
movilidades electroforéticas de las moléculas
que intentan separar.

13. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
MEDIO GEL AGAROSA
• La agarosa es un polisacárido
(originalmente obtenido de algas,
como el agar-agar, pero de
composición homogénea), cuyas
disoluciones (típicamente de 0.5 a 2
%) poseen la propiedad de
permanecer liquidas por encima de
50 grados C y formar un gel,
semisólido al enfriarse.

14. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
ELECTROFORESIS EN GEL DE
CAMPOS PULSANTES (PFGE)
La PFGE consigue la separación de
grandes fragmentos de DNA induciendo
su reorientación mediante cambios
periódicos en el campo eléctrico, cuya
duración determina el intervalo de
tamaños que se pueden separar (cuanto
mayor sea el tamaño de los fragmentos a
separar, mayor ha de ser la duración de
los campos aplicados).

15. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
• ELECTROFORESIS EN GELES DE
GRADIENTES
El uso de geles de poliacrilamida que tienen un
gradiente creciente de concentración de
archilamida + bisacrilamida, y en consecuencia
un gradiente decreciente en el tamaño del poro,
pueden tener ventajas sobre los geles de
concentraciones uniformes de acrilamida.
En un gel en gradiente la proteína migra hasta
alcanzar una zona donde el tamaño de poro
impida cualquier avance. Una vez se alcanza el
limite del poro no se produce una migración
apreciable aunque no se detiene completamente.

16. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
• ELECTROFORESIS EN GEL DE
POLIACRILAMIDA
Los geles de poliacrilamida se forman
por polimerización de la acrilamida
por acción de un agente
entrecuzador, es químicamente inerte,
de propiedades uniformes, capaz de
ser preparado de forma rápida y
reproducible. Forma, además, geles
transparentes con estabilidad
mecánica, insolubles en agua,
relativamente no iónicos y que
permiten buena visualización de las
bandas durante un tiempo

17. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
ELECTROFORESIS EN GEL CON GRADIENTE
DESNATURALIZANTE (DGGE)
Es un tipo de electroforesis que permite la separación de fragmentos
de ADN del mismo tamaño pero con diferente secuencia de
nucleótidos. Para ello, un gradiente lineal creciente de agentes
químicos desnaturalizantes del ADN (una mezcla de urea y formamida)
se incorpora a lo largo de un gel de poliacrilamida. Durante la
electroforesis, se mantiene una temperatura constante de 50-65 °C y
los fragmentos de ADN de doble cadena migran por el gel hasta
encontrar una determinada concentración de urea y formamida
(concentración desnaturalizante) a la cual las cadenas se separan
localmente y el desplazamiento de las moléculas disminuye o se

18. MEDIOS DE ELECTROFORESIS
• ELECTROFORESIS
BIDIMENSIONAL
La electroforesis bidimensional se
basa en separar las proteínas en
una mezcla según sus dos
propiedades moleculares, una en
cada dimensión. El procedimiento
más usado se basa en la
separación en una primera
dimensión mediante
isoelectroenfoque y la segunda
dimensión según peso molecular
mediante electroforesis en

19. FACTORES QUE AFECTAN A LA
ELECTROFORESIS
CAMPO ELÉCTRICO
Es un gradiente de potencial que posibilita que haya electroforesis. A su vez,
depende de diferentes parámetros:
• Diferencia de potencial (V) Cuanto mayor sea, mayor será la velocidad de
migración
• Intensidad (I) viene determinado por la resistencia del soporte, por lo que, en
última instancia, da cuenta de la distancia recorrida por las moléculas.
• Resistencia (R) cuanto mayor sea la resistencia del soporte, menor será la
movilidad electroforética (ya que la intensidad ha de ser menor para que se
cumpla la Ley de Ohm).
• Temperatura (T) Por el efecto Joule, el paso de una corriente eléctrica produce
calor, y este efecto será tanto mayor cuanto mayor sea la diferencia de
potencial y la resistencia del sistema.

20. FACTORES QUE AFECTAN A LA
ELECTROFORESIS
MUESTRA
La movilidad electroforética de una molécula es tanto mayor cuanto
mayor sea su carga y disminuye según aumenta su tamaño, ya que
mayor es la fricción de la molécula con el medio y menor es su carga por
unidad de superficie. Por esta razón, las moléculas globulares se
mueven con mayor facilidad que las elongadas, ya que la esfera
presenta la mínima superficie a igualdad de volumen. Así, moléculas del
mismo tamaño y carga, pero de diferente forma, pueden tener una
movilidad electroforética diferente y ser, por tanto, separables mediante
una electroforesis.

21. TAMPÓN
Durante una electroforesis,
se produce una electrolisis
del agua por acción del
campo eléctrico, lo cual
genera protones en la
proximidad del ánodo e
iones hidroxilo en el cátodo.

22. •SOPORTE
Hace que se presenten una serie de fenómenos de elevada
trascendencia para el resultado del proceso:
Electroendósmosis (EEO):
El EEO va en contra de la
resolución de una
electroforesis, sin embargo,
la EEO contribuirá a una
mejor resolución en las
inmunoelectroforesis y en la
electroforesis.

23.  Adsorción: Es una retención inespecífica de las
moléculas de la muestra sobre el soporte, por lo que
afecta negativamente a la resolución, ensanchando
las bandas de migración.
Tamizado molecular: Es un efecto debido al mayor
o menor reticulado de los soportes; cuanto más
tupida sea la red de fibras, menores serán los poros.

24. PARA SABER???
* Hoy en día se aplica principalmente al análisis de muestras biológicas. es
ampliamente usada en el análisis de DNA para química forense.

25. BIBLIOGRAFIA
• Curso “métodos físico- químico en biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de
México.
• Alan Townshend, ed., Encyclopedia of Analytical Science, vol. 2, Harcourt Brace and Company, 1995,
p. 1041.
• Jacqueline Kroschwitz, ed., Encyclopedia of Chemical Technology, 4th ed., John Wiley & Sons, 1994, p.
356.
• Jorgenson, J. W. Analytical Chem, 1986, 58, 7, 743A.
• UAH. Biomodel. {En línea}. {4 Mayo de 2016}. Disponible en:
(http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm)
• UNAM. Plataformas de proteomica. {En línea}. {4 Mayo de 2016}. Disponible en:
(http:/www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/plataformas_de_proteomica.pdf)

26. GRACIAS !!